苦參堿對皮膚傷口愈合的影響的研究

摘要：目的：苦參堿對傷口愈合是否有影響，未見有關報道，為此，本實驗通過小鼠背部皮膚傷口模型的建立，觀察苦參堿對小鼠皮膚傷口愈合的影響，為進一步苦參堿的開發與應用提供實驗依據。

方法：動物傷口實驗模型是篩選有效促進傷口愈合藥物的重要工具。

結果：本研究以小鼠背部傷口為模型，著重觀察了苦參堿對傷口愈合過程的促進作用。

結論：苦參堿對傷口愈合有促進作用。

關鍵詞：苦參堿傷口愈合

【中圖分類號】R4【文獻標識碼】A【文章編號】1008-1879（2012）12-0014-02

機體皮膚直接與外界接觸，易于受到各種損傷。創傷修復是創傷學乃至整個醫學中最重要又是最基本的問題之一，也是醫學中最古老的課題之一。自有人類起就有創傷，有創傷就有創傷愈合和組織修復[1]。創傷愈合過程是一個非常復雜的過程，主要包括：①傷口早期變化；②傷口收縮；③肉芽組織增生；④表皮及其他組織增生等。傷口愈合延遲或不愈合不僅影響患者的身心健康，而且增加經濟負擔，有時甚至會危及患者生命。促進傷口愈合，減少病人的痛苦，是臨床對傷口愈合進行治療的主要措施。背部傷口實驗動物模型是研究創傷愈合的主要模型，具有方便，直觀和數據可靠等優點。

苦參堿（matrine）是從寧夏特色回藥材豆科槐屬植物苦豆子（Sophora alopecuroides Linn）中提取的四環喹嗪啶生物堿之一。近年藥理研究表明，苦參堿具有抗炎[2]、降血脂[3]、擴血管[4]、抗心律失常[5]、抗柯薩奇病毒等多種作用。本課題組前期研究表明[6，7]，苦參堿通過降低膽固醇、增強機體抗氧化酶活性、改善高脂血癥大鼠心臟舒縮功能等作用而對高膽固醇血癥大鼠心肌結構與功能的損傷具有保護作用，此外，苦參堿可增強環磷酰胺抑制Lewis肺癌生長的作用[8]。

1材料與方法

1.1材料。

1.1.1動物。昆明種雄性小鼠250只，體重21.0±0.4g，清潔級，由寧夏醫科大學實驗動物中心提供。

1.1.2藥品與試劑。苦參堿，白色粉末，純度>99.8%，購自寧夏紫荊花藥業股份有限公司；其余試劑均為分析純。

1.1.3儀器。電子天平（北京恒科電子有限公司）；分析天平（中國AE100-S）；1130/Biocut超薄切片機（德國）。

1.2實驗方法。

1.2.1藥品的配制。苦參堿配置：準確稱取苦參堿0.8000g溶于100ml濃度為0.9%的生理鹽水得80mg/kg[9]的苦參堿高劑量、取一半體積的80mg/kg苦參堿溶液用生理鹽水等體積稀釋得40mg/kg的苦參堿中劑量、同理得20mg/kg的苦參堿低劑量。麻醉劑的配置：準確稱取0.5000g戊巴比妥鈉溶于100ml 0.9%的生理鹽水中。4%多聚甲醛配置：NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO42.89g，KH2PO40.2g溶于1000ml雙蒸水中，配成0.01mol/L的PBS液（pH：7.2～7.4），將40g多聚甲醛倒入配好的PBS液中，加熱，混勻，溫度控制在60℃以內。

1.2.2傷口制備。250只雄性昆明小鼠給予50mg/kg戊巴比妥鈉腹腔麻醉

后，背部電推去毛，暴露皮膚，用2%碘酒和75%酒精依次消毒，背部中央剪去全層皮膚，制備大小為1.5cm×1.5cm正方形的傷口，半透明

紙描

繪切口邊緣，記錄傷口大小后，動物隨機分為4組，即生理鹽水對照組，苦參堿20、40和80mg/kg劑量組。編號記錄及歸籠飼養。

1.2.3給藥及取材方法。苦參堿組小鼠按20、40和80mg/kg劑量每天灌胃，對照組給予等體積生理鹽水，于第3、5、7、9和11天，用半透明紙描繪記錄其傷口未愈合的面積后，每組分別隨機取出12只小鼠處死，剪下背部未愈合皮膚，1/2組織放入4%多聚甲醛溶液固定，用于進一步病理HE染色分析，另外1/2組織-80℃凍存備用。

1.3檢測指標。

1.3.1小鼠的一般情況。觀察小鼠造模前、后體重，皮毛、運動、進食的變化等。

1.3.2傷口未愈合面積計算。所有小鼠在0，3，5，7，9和11天的傷口未愈合面積，將傷口邊源描繪在半透明紙上，然后采用清華紫光A900掃描儀掃描并用Image—Pro⑧PlusVersion6.0（IPP）圖像分析軟件分析并計算面積。如圖3和4所示：

1.4統計學方法。實驗數據以均值±標準差表示（X±S），采用t檢驗

進行統計學分析，以P<0.05為具有顯著性差異。

2結果

2.1小鼠的一般情況：各組小鼠體重之間無明顯變化，背部毛不斷長長。

苦參堿對傷口小鼠模型體重的影響。

除第3天20mg/kg苦參堿給藥組體重減輕未有統計學差異外，其余各組小組體重在傷口愈合過程中均未見顯著性差異，結果見表1。

2.2小鼠傷口愈合情況。小鼠傷口隨著時間的變化未愈合傷口隨時間變化逐步愈合，傷口面積減小，（見圖5），第11天正常組小鼠傷口的愈合率為88.92%。苦參堿組20、40和80mg/kg劑量組對小鼠傷口愈合具有顯著和促進作用（見表2，圖6）。

3討論

研究表明，組織創傷產生的缺損，人體自身能進行修補恢復，即創傷愈合。創傷愈合一般經歷以下幾個過程：①傷口早期變化：傷口局部有不同程度的組織壞死和血管斷裂出血，數小時內便出現炎癥反應，表現為紅腫。②傷口收縮：2-3日后邊緣的整層皮膚及皮下組織向中心移動，于是傷口迅速縮小，直到14天左右停止。③肉芽組織增生：大約從第3天開始從傷口底部及邊緣長出肉芽組織填平傷口。④表皮及其他增生：創傷24小時內，傷口邊緣的基地細胞即開始增生，并在凝塊下面向傷口中心遷移，形成單層上皮，覆蓋于肉芽組織表面。在創傷愈合中，肉芽組織起著重要作用。肉芽組織是由新生的成纖維細胞，毛細血管和少量炎性細胞所組成。其中含有豐富的血管，所以稍有損傷就容易出血。它們從創傷周圍的正常組織處生長，漸漸向傷口缺損處伸展。而肉芽組織具有抗炎、抗感染保護創面、填補創口等作用。

國外學者[1]以大鼠為實驗動物模型，進行背部大小為（2.0×2.0）cm2全層皮膚切除。本研究采用價格遠低于大鼠的昆明種小鼠為模型，在其背部中央建立大小為（1.5×1.5）cm2的正方形創口，前期預實驗觀察到，小鼠背部傷口完全愈合需13-15天。本次實驗時間為11天，以觀察苦參堿對傷口愈合的促進作用。研究結果表明，生理鹽水對照組小鼠背部傷口自第3天開始愈合，第11天愈合率達81.84%。苦參堿組小鼠分別給予20、40和80mg/kg的苦參堿后，小鼠背部傷口未愈合面積自第3天始具有明顯的促進作用，在第11天時傷口愈合的面積為：88.92%，91.7%和91.69%，提示，苦參堿對傷口的愈合具有促進作用。本實驗首次觀察了苦參堿對傷口愈合的影響的研究，其作用機制有待進一步對組織樣本進行檢測分析與研究。

4結論

苦參堿對皮膚傷口愈合具有促進作用。

參考文獻

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