南海紅樹林內生真菌Gx—4c代謝產物研究

摘要：采用反復硅膠柱色譜法、Sephadex LH-20凝膠色譜法等進行南海紅樹林內生真菌Gx-4c的代謝產物分離純化，并通過理化常數測定和光譜分析鑒定其化學結構。研究結果： 從南海紅樹林內生真菌Gx-4c的菌體中分離得到4個代謝產物，經波譜解析，分離得到的4個化合物分別為：5，7-二羥基-2-甲基色原酮 （1）、 3 -羥基-2-甲基苯酸 （2）、3，4-二氫-8-羥基-3-甲基-1H-2-苯吡喃-1-酮-5-羧酸（3）、3，4-二氫-8-羥基-3，5-二甲基-1H-2-苯吡喃-1-酮（4）；初步藥理活性顯示化合物1對口腔癌細胞KB、KBv200的抗腫瘤活性值分別為7.5和11.2 Mol。研究結果表明：所有化合物均首次從南海紅樹林內生真菌Gx-4c中分離得到。

關鍵詞：紅樹林；內生真菌；代謝產物

中圖分類號：O629文獻標識碼：A文章編號：1003-4374（2013）01-0012-03

紅樹林是指生長在熱帶、亞熱帶潮間帶上部，以紅樹植物為主體的常綠灌木或喬木組成的淺灘濕地木本生物群落，是一種陸地向海洋過渡的特殊生態系統[1] ，紅樹林生態系統中蘊藏著豐富的動植物資源和微生物資源。紅樹林棲息地被證明是真菌新種屬的豐富來源， 形成了海洋真菌第二大生態學亞類。我們實驗小組已從中國南海紅樹林內生真菌的次級代謝產物中分離到大量新穎的有活性結構的化合物[ 2-4] 。

本文對南海紅樹林內生真菌Gx-4c代謝產物進行研究，從菌體中分離得到4個化合物：5，7-二羥基-2-甲基色原酮（1）、3 -羥基-2-甲基苯酸 （2）、3，4-二氫-8-羥基-3-甲基-1H-2-苯吡喃-1-酮-5-羧酸（3）、3，4-二氫-8-羥基-3，5-二甲基-1H-2-苯吡喃-1-酮（4），初步藥理活性顯示化合物1對口腔癌細胞KB、KBv200的抗腫瘤活性值分別為7.5和11.2Mol。

1實驗部分

1.1儀器和試劑

美國Varian公司INOVA-500NB超導核磁共振譜儀和INOVA-300NB核磁共振儀，VG ZAB-HS雙聚焦質譜儀，Thermo DSQ電子轟擊電離質譜儀，Thermo MAT95XP高分辨質譜儀；北京泰克儀器有限公司的X-4數字顯示顯微熔點測定儀。所用試劑均為廣州化學試劑廠生產，化學純、溶劑經重蒸后使用。柱層析硅膠為青島海洋化工廠生產的200-300目硅膠、硅膠H、 薄層硅膠GF254。

1.2菌種培養

紅樹林內生真菌Gx-4c采自中國香港，經鑒定為擬莖點霉菌（Phomopsis sp.），保存于中山大學化學與化學工程學院。發酵培養基為葡萄糖10g/L、蛋白胨2g/L、酵母膏1g/L、粗海鹽2g/L，pH7.0。500mL三角瓶內裝培養基250mL，1.25×105Pa 滅菌20 min后接種120L，在25℃靜置培養35d，分別收集發酵液和菌體。

1.3提取與分離

200L發酵物過濾得菌體和發酵液，發酵液濃縮后用乙酸乙酯充分萃取，菌體用甲醇多次浸泡。提取濃縮物分別以體積比1∶2拌硅膠（200-300目）進行柱層析，以石油醚/乙酸乙酯/甲醇進行梯度加壓洗脫。收集各組分再經反復柱層析、制備薄層層析、重結晶等方法進行純化。從菌體粗提物（約40g）分離得到化合物1 （ 8mg）、2 （10mg）、3 （7mg）、 4 （8mg） 。

1.4細胞毒活性實驗

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