激素對黑莓‘Kiowa’葉片愈傷組織誘導的影響

摘要：以黑莓品種‘Kiowa’無菌苗的葉片為外植體，研究了外源生長調節(jié)劑對愈傷組織誘導的影響。結果表明：不同激素種類、濃度及其配比誘導‘Kiowa’的葉片都可以產生愈傷組織，并且誘導率都為100%，但愈傷組織的狀態(tài)和生長量有顯著差異。其中添加2，4-D產生的愈傷組織質量較好，生長素和細胞分裂素組合使用時有抑制愈傷組織誘導的作用；添加10 mg/L 2，4-D的MS培養(yǎng)基誘導的愈傷組織多，質地疏松，呈嫩黃色顆粒狀。

關鍵詞： 黑莓‘Kiowa’；葉片；愈傷組織；懸浮培養(yǎng)

中圖分類號：S663.204+.3文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2013）04-0051-04

黑莓（Rubus spp）是薔薇科懸鉤子屬的一種多年生漿果類果樹[1]，原產于北美，其果實為聚合果，營養(yǎng)豐富，富含糖、果酸及多種維生素，有防衰老和提高人體免疫力等功效，是近年來國內外興起的第三代水果之一[2，3]，具有很高的經濟價值。

黑莓中富含維生素E[4]。以黑莓葉片為外植體誘導產生愈傷組織，再通過細胞懸浮培養(yǎng)快速產生大量的含維生素E的細胞，是一種快速增殖天然維生素E的方法。目前國內對黑莓愈傷組織誘導的研究較少，更沒有利用愈傷組織進行懸浮培養(yǎng)獲得高產維生素E的報道。本試驗以黑莓品種‘Kiowa’的葉片為外植體，研究了激素種類、濃度以及激素配比對愈傷組織誘導的影響，目的是篩選適于懸浮培養(yǎng)的愈傷組織的最佳誘導方法，為利用黑莓細胞懸浮培養(yǎng)獲得高產維生素E奠定基礎。

1材料與方法

11材料

本試驗于2012年3～6月進行。黑莓品種‘Kiowa’無菌苗的葉片，取自中國科學院植物研究所組織培養(yǎng)實驗室（南京）。取葉齡30～40天的黑莓組培苗從上往下數第2～5片葉，剪去葉尖及葉緣，剪成05 cm×05 cm左右的方塊作為接種材料。接種時，使葉片背面接觸培養(yǎng)基。

12方法

121激素種類對‘Kiowa’葉片愈傷組織的誘導 將‘Kiowa’組培苗的無菌葉片分別接種于附加10 mg/L 2，4-D、NAA、IAA、IBA、6-BA、KT、TDZ、ZT的MS培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)20天后觀察、統(tǒng)計結果，比較不同激素種類對愈傷組織誘導的影響。

1222，4-D濃度對‘Kiowa’葉片愈傷組織的誘導將‘Kiowa’組培苗的無菌葉片分別接種于附加不同濃度2，4-D（05、10、15、20、30、50 mg/L）的MS培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)20天后觀察、統(tǒng)計結果，比較不同2，4-D濃度對愈傷組織誘導的影響。

123生長素和細胞分裂素組合對‘Kiowa’葉片愈傷組織的誘導將‘Kiowa’組培苗的無菌葉片分別接種于附加不同濃度生長素（2，4-D）與不同濃度細胞分裂素（6-BA或TDZ）組合的MS培養(yǎng)基上（見表3、表4），暗培養(yǎng)20天后觀察、統(tǒng)計結果，比較生長素和細胞分裂素組合對愈傷組織誘導的影響。

以上所有處理的基本培養(yǎng)條件是：MS培養(yǎng)基中蔗糖濃度為25 g/L，瓊脂為56 g/L，pH值58～60，培養(yǎng)溫度為（25±2）℃。每個處理接種葉片20個，重復3次。

124愈傷組織誘導率的計算愈傷組織誘導率（%）=（形成愈傷組織的外植體個數/接種外植體總數）×100。

2結果與分析

21激素種類對‘Kiowa’葉片愈傷組織誘導的影響

激素種類是影響植物離體器官愈傷組織發(fā)生的關鍵因素，在其培養(yǎng)中起著極為重要的調節(jié)作用[5]。由表1可以看出，當激素濃度為10 mg/L時，不同的生長素類和細胞分裂素均可誘導‘Kiowa’的葉片產生愈傷組織，且誘導率為100%，出愈時間基本一致，一般為7～10天，但是愈傷組織的狀態(tài)和生長量有顯著差異。其中2，4-D和TDZ誘導的愈傷組織質地疏松，且前者是顆粒狀，顏色比后者更為嫩黃，總體質量也比較好，其它生長素類激素NAA、IAA、IBA雖然也能誘導出愈傷組織，但顏色和質量均不符合目標性狀的要求。比如NAA誘導的愈傷組織為翠綠色，IAA、IBA誘導的為黃綠色，且呈塊狀、質地緊密，后期很容易生根，不利于后續(xù)的懸浮培養(yǎng)。細胞分裂素類激素6-BA、KT、ZT誘導的愈傷組織不僅質地緊密，且愈傷量很少，其中6-BA、KT誘導出的愈傷組織呈顆粒狀黃綠色，ZT誘導出的愈傷組織呈塊狀黃色。由此分析認為，只有添加2，4-D的培養(yǎng)基誘導出的愈傷組織才最適于后續(xù)的細胞懸浮培養(yǎng)。