超高效液相色譜—串聯質譜法測定蘋果和土壤中乙嘧酚殘留量

摘要：建立了蘋果和土壤中超高效液相色譜-串聯質譜法（UPLC-MS/MS）檢測乙嘧酚殘留方法，考察了基質效應，并對實際樣品進行了檢測。蘋果和土壤經乙腈振蕩提取后，用MCX柱凈化，采用UPLC-MS/MS正離子掃描分析乙嘧酚。以蘋果和土壤為基質進行3檔添加水平和5 次重復性試驗，結果表明添加濃度為001、005、01 mg/kg的平均回收率為88%～102%，相對標準偏差為21%～87%。本方法在蘋果和土壤中的檢出限為2 μg/kg，定量限為4 μg/kg，在10～300 μg/L范圍內線性關系好（r>0999）。

關鍵詞：乙嘧酚；超高效液相色譜-串聯質譜；殘留；蘋果；土壤

中圖分類號：O657.63文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2013）04-0101-05

目前國內有關乙嘧酚殘留的分析研究較少，多集中于其在黃瓜中的殘留分析，已知其在黃瓜中的最大殘留限量值是1 mol/L[6]，尚未制定出蘋果中乙嘧酚的殘留限量標準。劉康云等（2008）[7]采用高效液相色譜-紫外檢測法分析了乙嘧酚在黃瓜中的殘留量。王蒙岑等（2009）[8]利用高效液相色譜-二極管陣列檢測器建立了乙嘧酚在黃瓜和土壤中的殘留檢測方法，參照國家標準GB/T 20769檢測乙嘧酚，回收率低，且難以達到較低的限量要求。采用超高效液相色譜-串聯質譜法可以提高目標物質的靈敏度和回收率，縮短進樣時間，提高檢測效率。張文童等（2012）[9]研究用高效液相色譜-串聯質譜法測定黃瓜、草莓中乙嘧酚。Pizzutti等（2009）[10]報道了液相色譜-串聯質譜分析葡萄等 6 種農作物中包括乙嘧酚的171 種農藥殘留。

本研究采用Waters的MCX離子柱進行前處理，大大純化了樣品，通過優化液相色譜條件，采用超高效液相色譜-串聯質譜儀（UPLC -MS/MS），建立了乙嘧酚的快速、準確的檢測方法。

1材料與方法

2結果與討論21前處理條件優化

為方便快捷提取分離乙嘧酚，取分別添加了01、05、10 mg/kg乙嘧酚的空白蘋果樣品，用乙腈進行粗提取后，用旋轉蒸發儀蒸發近干，加入2 ml甲醇定容，022 μm濾膜過濾，上液相色譜紫外光譜測定，發現這種方法基本上可以將乙嘧酚和雜質峰分開，但是雜質含量非常高，而且乙嘧酚峰會發生漂移，最大可漂移2 min左右。為解決這個問題，對粗提取液進行凈化處理。

考察Waters Sep-pak C18固相萃取小柱、Waters Oasis MCX固相萃取小柱及調節乙腈提取液酸堿度的方法。取3份添加了05 mg/kg乙嘧酚的空白蘋果樣品，用乙腈進行粗提取后，前2份粗提取液用旋轉蒸發儀蒸發近干，之后分別過Waters Sep-pak C18固相萃取小柱、Waters Oasis MCX固相萃取小柱；另外一份加入10 ml乙腈，先用稀鹽酸調節pH值為4～5，萃取分層取水層，再用弱堿調節pH值為9～10，用乙腈萃取，旋轉蒸干，用2 ml甲醇定容，022 μm濾膜過濾，上機，結果發現，用Waters Sep-pak C18固相萃取小柱進行前處理的樣品回收率只有186%，調節乙腈提取液酸堿度的方法回收率可以達到786%，而Waters Oasis MCX固相萃取小柱的回收率能達到958%。很顯然用Waters Oasis MCX固相萃取小柱前處理的方法提取分離的效果最好。

乙嘧酚的結構含有堿性基團氨基，而羥基在這個結構中不具有酸性，所以該化合物為堿性化合物，而且化合物中含有極性基團羥基及氨基使其極性較大，Waters Sep-pak C18固相萃取小柱不足以使乙嘧酚吸附在小柱上；試驗也證明，提取液通過小柱時，收集提取液，過膜上機檢測，發現含有大量的乙嘧酚。

調節乙腈提取液酸堿度的方法和Waters Oasis MCX固相萃取小柱都能純化分離乙嘧酚，但是調節pH值的方法繁瑣，工作量大，效率低；Waters Oasis MCX固相萃取小柱和調節pH值的方法原理相同，但是Waters Oasis MCX固相萃取小柱更方便、更快捷，回收率好，且乙嘧酚峰不會發生漂移，所以選擇Waters Oasis MCX固相萃取小柱分離純化前處理。

22色譜條件優化

乙嘧酚的測定方法通常是以高效液相色譜為基礎的紫外法。紫外法干擾峰很多，尤其對于基質復雜的樣品，很難滿足較為嚴格的限量要求。液相色譜-質譜聯用方法測定乙嘧酚殘留具有高靈敏度、高選擇性的優勢。

乙嘧酚在C18柱上保留性差，流動相中的極性溶劑含量比較高。比較了甲醇體系和乙腈體系，發現甲醇體系下乙嘧酚是乙腈體系下的10倍。通過試驗確定流動相為甲醇和01%甲酸溶液，采用梯度洗脫程序，既能保證乙嘧酚的靈敏度，又能保證其較好的峰型。

23質譜條件優化

選擇乙嘧酚的加合離子峰為母離子，主要有[M+H]+，在流動相存在的條件下進行質譜條件的優化。當流動相為01%甲酸和乙腈時，[M+H]+靈敏度低；當流動相為01%甲酸和甲醇時，[M+H]+靈敏度高。同時對質譜的毛細管電壓、錐孔電壓、脫溶劑溫度、脫溶劑氣和錐孔氣流量進行了優化，最終確定了質譜條件。再對母離子進行子離子掃描，從而確定子離子及碰撞能量。

乙嘧酚含有氨基集團，具有堿性，易結合氫根變成氨基正離子，因此這種化合物可采用ESI+模式掃描測定。通過母離子掃描（MS Scan），可獲得一級質譜圖，見圖1，兩種化合物的軟電離均以準分子離子峰[M+H]形式存在。