新型卟啉化合物測定不孕不育癥精漿鋅介紹

精漿鋅通過干擾垂體分泌促性腺激素，降低性腺功能而影響精液質量和精子代謝[1]，因此是診斷男性不孕癥的重要微量元素指標。目前，臨床上測定鋅的方法主要有原子吸收光譜法、電化學法等[2]，但這些方法均需要特殊的儀器和特定的工作環(huán)境，設備昂貴，試劑成本高。本課題依據(jù)張志華等[3]的報道卟啉吡啶季銨鹽分光光度法測定水中痕量銅原理用于測定精漿鋅離子，經(jīng)過多例臨床實驗表明，該方法靈敏度高，準確性好，簡便、價廉、快速，克服了現(xiàn)有臨床測鋅方法的缺點。

關鍵詞：卟啉；精漿鋅 ；分光光度法

中圖分類號：R271.14 文獻標識碼：C 文章編號：1005-0515（2013）5-139-01

1 原理

溴化5-[4-N-（對硝基）芐銨基吡啶基]-10，15，20-三（4-N-吡啶基）卟啉在酸性介質中與鋅反應，產(chǎn)生可溶于有機溶劑的有色復合物，與同樣處理的鋅標準液比色，求得其含量。

2. 材料與方法

2.1 主要儀器：

2.1.1 UV-900分光光度計；

2.1.2普析通用MB5血液元素分析儀；

2.2 試劑

2.2.1：鋅標準液（0.15mmol/L）

2.2.2： 卟啉顯色劑溶液：稱取一定量溴化5-[4-N-（對硝基）芐銨基吡啶基]-10，15，20-三（4-N-吡啶基）卟啉溶于N，N-二甲基甲酰胺（DMF）中，配成濃度為1.998mmol/L溶液；

2.2.3鄰苯二甲酸氫鉀-鹽酸緩沖溶液：pH=1.2；

2.2.4鎂遮蔽液： 稱取10g 十二烷基硫酸鈉溶于約500 ml 蒸餾水中， 再加入氟化銨10g， 待溶解用蒸餾水稀釋至900ml。

2.3病例

正常生育男性精液200例，選自至少已生育過一個小孩的男子，年齡在28～38歲間；男性不育癥患者210例，年齡24～40歲，平均28歲（不育組），身體健康，性生活正常，均為婚后2年以上未育，均進行詳細的體格檢查，排除生殖器官先天性異常、遺傳、內分泌障礙，以及損傷、感染等引起的器質性的病變；兩組病例均禁欲5天以上采用手淫法收集精液，于2小時內送檢，離心分離精漿，-20℃保存。

2.4 操作[3]

2.4.1 吸光光度法

（1）取三支5ml試管，分別標明空白管、測定管、標準管。

（2）在測定管中，加入精漿20μl，空白管加重蒸餾水20μl，標準管中加鋅標準液20μl。

（3）各管加pH=1.2的鄰苯二甲酸氫鉀-鹽酸緩沖溶液0.5ml，卟啉溶液0.5ml，鎂遮蔽液1ml，搖勻，37℃水浴15min，加重蒸餾水2ml，用UV-900分光光度計，0.5cm比色杯，438.0nm波長，空白管調零，測定標準管、測定管吸光度。

（4）計算

2.4.2 原子吸收法 按普析通用MB5血液元素分析儀標準操作文件操作。

2.4.3 兩組標本均用上述兩種方法測定。

2.5 統(tǒng)計學方法

實驗數(shù)據(jù)用X士SD表示，采用t檢驗，以P<0.05為具有統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1與原子吸收法比較 200例正常生育男性精漿用分光光度法檢測結果均值為（2.14±87.10）mmol/L，用原子吸光譜法測得均值為（2.16±69.23 mmol/L）， 二者關系數(shù)r= 0.9986。

3.2正常生育男性組與不孕癥組比較 不孕癥組精漿鋅均值為（1.65±5.71） mmol /L。與正常生育男性組（2.14±87.10mmol/L）相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

3.3 重復性： 取n = 30，每份測定4次，變異系為為2.6 %。

4.討論

人類精液鋅包括精漿鋅及精子鋅兩部分，精液鋅能與琉基結合可逆性地抑制精子核染色質解聚，延長精子壽命[4]。其對精子獲能也有影響，高濃度的鋅對精子頂體酶活性有抑制作用，從而抑制頂體反應發(fā)生。因此，精液鋅減少可影響精子功能。

據(jù)報道，鋅元素對維持性器官的發(fā)育和正常功能具有非常重要的作用，缺鋅影響垂體分泌促性腺激素，可導致性功能減退，睪丸縮小、重量減輕、精子數(shù)量減少，重者可使精子生成陷于停止[5]。

目前測微量元素鋅有原子吸收法和分光光度法，但前者需大型儀器和特殊的設施，基層醫(yī)療機構受經(jīng)濟條件所限無法購買大型設備，該方法很難推廣。本法采用分光光度法，操作簡便，試劑價格低廉， 又能避免鎂離子的干擾，與公認的原子吸收法比較，方法誤差在允許范圍，結果準確等優(yōu)點，易被基層醫(yī)療衛(wèi)生機構接受。我室采用該方法已對210例男性不育癥患者進行精漿鋅的測定，為患者診治提供了準確的依據(jù)。

參考文獻：

[1]王雪楠 牛煥付 劉曉鐘. 少精患者精漿鋅酸性磷酸酶的檢測及意義[J].濟寧醫(yī)學院學報.2007，2（30）：133.

[2]高榜華 葉英，精漿鋅的簡易測定方法[J]. 四川醫(yī)學，1998，9 （3）：165-166

[3]張志華，韓士田，卟啉吡啶季銨鹽分光光度法測定水中痕量銅 [J].理化檢驗，2010，46（2）：120-121

[4] 李永海.精液鋅與精子功能[J].男性學雜志，1996，3（4）：183-185[5]孫輝臣，吳軍，董志英等[J].北京軍區(qū)醫(yī)藥，2001，2（13）：83-85

基金項目：河北省科學技術研究與發(fā)展指導計劃資助項目（12277707）

作者簡介：李妤蓉（1964- ），女，漢族，河北省邢臺市人，邢臺醫(yī)專第二附屬醫(yī)院，教授，主任檢驗師，研究方向為臨床檢驗。