丹紅注射液對大鼠慶大霉素腎毒性的保護作用及其機制的研究

張 淵，黎七雄 （武漢大學醫學院，湖北 武漢430071）

眾所周知氨基糖苷類抗生素主要的副作用是腎臟毒性，占所有急性腎功能損傷的10%～15%［1］。研究表明，慶大霉素 （GM）治療的病人中30%存在腎損傷［2］。已有實驗研究報道，丹紅注射液對大鼠腎缺血再灌注損傷、糖尿病腎病均有保護作用，并且認為其作用機制與抑制氧化應激有關［3］。本實驗通過建立健康SD大鼠的慶大霉素腎毒性動物模型，應用丹紅注射液進行預防和治療干預，觀察丹紅注射液對慶大霉素腎損傷的保護作用，為臨床上丹紅注射液治療腎臟疾病提供理論依據。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 實驗動物 雄性SD大鼠40只，體質量180～240g，SPF級，由武漢大學實驗動物中心提供。

1．1．2 藥物與試劑 丹紅注射液 （濟南步長制藥有限公司）；慶大霉素注射液 （湖北天藥藥業股份有限公司）；尿素氮 （BUN）、肌酐 （Scr）、丙二荃 （MDA）、超氧化物歧化酶 （SOD）、過氧化氫酶（CAT）試劑盒均購于南京建成生物制品研究所。

1．2 方法

1．2．1 動物分組、造模及給藥 SD大鼠40只，隨機分為空白對照組 （C組）、慶大霉素模型組（G組）、丹紅注射液低劑量組 （DHL組，GM＋丹紅注射液2．5ml／kg）、丹紅注射液中劑量組 （DHM組，GM＋丹紅注射液5ml／kg）、丹紅注射液高劑量組 （DHH組，GM＋丹紅注射液10ml／kg），每組8只。于造模前4d，以上各給藥組每天腹腔注射丹紅注射液1次，連續給藥10d，對照組和模型組則給予生理鹽水1．5ml。給藥第5天開始，模型組及各給藥組分別腹腔注射GM 100mg／kg（4ml／kg），同時空白對照組腹腔注射同體積生理鹽水，連續10d。大鼠末次給藥稱重后異氟醚麻醉，斷頭處死。

1．2．2 檢測指標 ①各組給藥24h后經下腔靜脈取血2ml，全自動生化分析儀測定血清尿素氮和肌酐水平。②各組給藥24h后取腎組織勻漿進行SOD、CAT、MDA測定，分別按試劑盒說明書進行操作、檢測和計算。③腎組織HE染色行形態學觀察。

1．3 統計學分析

2 結 果

2．1 各組血肌酐和血尿素氮檢測結果

各組大鼠血肌酐和血尿素氮水平見表1。與慶大霉素模型組 （G組）比較，丹紅注射液各劑量組 （DHL組、DHM組、DHH組）血肌酐和血尿素氮水平顯著降低 （P＜0．01），表明丹紅注射液干預可有效降低慶大霉素引起的血肌酐和血尿素氮的升高。

2．2 各組SOD、CAT、MDA水平

各組大鼠腎臟組織SOD、CAT、MDA水平見表2。經各組均數間的多重比較，與慶大霉素模型對照組 （G組）相比，丹紅注射液中劑組和高劑量 組 （DHM 組、DHH 組）腎臟組織SOD和CAT水平顯 著 升 高 （P＜ 0．01），MDA水平顯著降低 （P＜0．01），表明中劑量及高劑量丹紅注射液干預對慶大霉素腎損傷有保護作用。

表1 各組大鼠血肌酐、血尿素氮水平

2．3 形態學觀察

空白對照組腎組織層次清晰，細胞排列整齊，腎小球、腎小管、腎間質結構清楚可辨，無明顯充血、腫脹。慶大霉素模型組組織層次結構不清晰，細胞排列紊亂，近端腎小管上皮細胞水腫，腎小管出現強嗜酸性團塊，可見大量脫落的上皮細胞以及崩解的細胞碎片，腎小管片狀壞死，以腎髓質外側帶近端腎小管最為嚴重。丹紅注射液低劑量組組織層次尚清晰，可見近端腎小管上皮細胞水腫，腎小管管腔擴張。丹紅注射液中劑量組組織層次清晰，細胞排列整齊，腎小球、腎小管、腎間質結構清楚，無充血腫脹，與空白對照組接近。丹紅注射液高劑量組組織層次清晰，細胞排列整齊，腎小球、腎小管、腎間質結構清楚，無充血腫脹，與空白對照組接近。

表2 各組SOD、CAT、MDA水平

3 討 論

慶大霉素是臨床上治療革蘭氏陰性菌感染的有效藥物，由于其化學性質穩定，殺菌作用快而成為臨床上的第一線治療藥。慶大霉素腎毒性作用引起腎功能損傷，血清肌酐和血尿素氮升高，出現蛋白尿，腎小球濾過率下降，最終致腎功能障礙［4-5］。慶大霉素腎毒性作用引起結構異常：腎小球萎縮，腎小管壞死，腎小管纖維化，近端小管內皮細胞水腫，腎小球肥大，血管周圍水腫和炎癥反應，腎小球阻塞，伴有細胞脫落［6］。文獻報道有多種機制參與了慶大霉素腎毒性作用。慶大霉素引起巨噬細胞滲透增加，TGF-β水平升高，進一步導致腎小管間質性腎炎［7］。另外，溶酶體磷脂質病和細胞凋亡也在慶大霉素的腎毒性作用中發揮了重要作用［8］。本研究發現，慶大霉素模型組SOD和CAT明顯降低，MDA顯著升高，進一步證實了腎臟由慶大霉素所致的腎毒性是由于腎皮質活性氧自由基產生增加所導致的。

丹紅注射液主要為丹參和紅花的復合制劑，具有活血祛瘀，擴張血管，抗血小板積聚、抗凝，抗血栓作用。能改善微循環，降低血管壁的通透性，提高心肌鈣離子泵活性，抑制慢通道鈣離子內流，促進細胞膜上鈣鈉離子交換，降低血管內皮細胞鈣離子濃度，使腎動脈血管擴管，改善腎血流［9］。已有研究表明，丹紅注射液可通過下調ICAM-1表達，減輕炎癥反應對大鼠移植腎臟的缺血-再灌注損傷。He等［10］研究發現，缺血-再灌注損傷大鼠給予丹紅注射液治療，顯著增強腦組織SOD活性，降低MDA水平。本研究發現，丹紅注射液引起MDA的降低，升高SOD和CAT的水平，抑制氧化應激過程，提高腎臟組織抗氧化應激能力，有效地保護慶大霉素所致的腎損傷。

［1］Shifow AA，Kumar KV，Naidu MUR，et al．Melatonin a pineal hormone with antioxidant property protects against gentamicin-induced nephrotoxicity in rats ［J］．Nephron，2000，85：167-174．

［2］Farombi EO，Ekor M．Curcumin attenuates gentamicin-induced renal oxidative damage in rats ［J］．Food and Chemical Toxicology，2006，44：1443-1448．

［3］周志群，羅娟，李瓊 ．丹紅注射液對糖尿病腎病大鼠腎臟的保護作用及其機制 ［J］．中國全科醫學，2008，11（10）：865-867．

［4］Romero F，Perez M，Chavez M，et al．Effect of uric acid on gentamicin-induced nephrotoxicity in rats-role of matrix metalloproteinases 2and 9 ［J］．Basic Clin Pharmacol Toxicol，2009，105 （6）：416-424．

［5］Soliman KM，Abdul-Hamid M，Othman AI．Effect of carnosine on gentamicin-induced nephrotoxicity ［J］．Med Sci Monit，2007，13（3）：R73-R83．

［6］Abdel-Raheem IT，El-Sherbiny GA，Taye A．Green tea ameliorates renal oxidative damage induced by gentamicin in rats ［J］．Pak J Pharm Sci，2010，23 （1）：21-28．

［7］Bledsoe G，Crickman S，Mao J，et al．Kallikrein／kinin protects against gentamicin-induced nephrotoxicity by inhibition of inflammation and apoptosis ［J］．Nephrol Dial Transplant，2006，21 （3）：624-633．

［8］Ali B H．Gentamicin nephrotoxicity in humans and animals：some recent research ［J］．Gen Pharmacol，1995，26 （7）：1477-1487．

［9］王保中，張丹梅，馮艷杰，等 ．丹紅注射液對腎病綜合征血脂及血流變學的影響 ［J］．中國實用醫藥，2009，4（11）：164-165．

［10］He Y，Wan H，Du Y，et al．Protective effect of Danhong injection on cerebral ischemia-reperfusion injury in rats ［J］．J Ethnopharmacol，2012，144 （2）：387-394．