不同濃度血液保存液對速率法檢測ALT結(jié)果的影響

田國萍 閆曉紅

（吉林省遼源市紅十字中心血站，吉林 遼源 136200）

不同濃度血液保存液對速率法檢測ALT結(jié)果的影響

田國萍 閆曉紅

（吉林省遼源市紅十字中心血站，吉林 遼源 136200）

目的 研究不同濃度血液保存液對速率法檢測ALT結(jié)果的影響。方法 對50例獻血者的血清樣本和血袋導(dǎo)管樣本進行檢驗，按照隨機的原則選擇3份ALT異常血樣，用復(fù)方枸櫞酸鈉注射液（血液CPD保存液）進行梯度稀釋，每個濃度檢測20次，比較分析檢測結(jié)果。結(jié)果 混入CPD保存液＞1.5%（1∶64）時檢測結(jié)果變化有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），混入CPD保存液＜1∶128時，檢測結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 不同濃度血液保存液對速率法檢測ALT結(jié)果有一定的影響，在實際工作中，需要檢驗人員加強責(zé)任心，提高業(yè)務(wù)能力及時發(fā)現(xiàn)問題，解決異常情況，為臨床提供可靠的診斷依據(jù)。

血液保存液；速率法；影響

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）主要分布在肝細胞內(nèi)，當(dāng)肝細胞收到損害時，大量ALT進入血漿中，使血液內(nèi)ALT活性顯著升高，故ALT常被臨床用于肝膽疾病的診斷[1-2]，ALT的檢測方法為比色法和速率法，速率法因其簡單方便，本血液中心在對獻血員進行ALT檢測時多采用此方法。本文進行了對比研究，具體內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

2008年2月至2009年3月來本血液中心無償獻血標本50份，采集方法嚴格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第3版進行，在標本采血前排除藥物、飲食、運動等對ALT的影響，排除嚴重脂血、溶血、黃疸患者。

1.2 主要材料與儀器

OLYMPUS AU640全自動生化分析儀（日本），MM-1型微量振蕩器（江蘇省姜堰市醫(yī)療器材廠生產(chǎn)）ALT速率法試劑盒（浙江東歐生物工程有限公司，批號20091102），血液保存液（取自長春泰爾茂醫(yī)用器具有限公司生產(chǎn)的血袋，批號：20061123X），真空采血管及采血針購自江蘇康健醫(yī)療用品有限公司，所有材料和試劑均有檢定合格標識和報告，并在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法

做好儀器每天的維護及保養(yǎng)，使儀器處于最佳狀態(tài)，嚴格按照儀器的操作規(guī)程進行操作，從50份血液樣本中隨機選擇3份ALT異常血樣，用復(fù)方枸櫞酸鈉注射液（血液CPD保存液）進行梯度稀釋，每個濃度檢測20次，比較分析檢測結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

通過對3份ALT異常的血液樣本用復(fù)方枸櫞酸鈉注射液（血液CPD保存液）進行梯度稀釋后發(fā)現(xiàn)：混入CPD保存液＞1.5%（1∶64）時檢測結(jié)果變化有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），混入CPD保存液＜1∶128時，檢測結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討 論

血液和其他體液標本酶濃度的測定可以作為醫(yī)師對疾病診斷的依據(jù)，尤其是丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）作為一種重要的催化酶，存在于肝細胞中[3-4]，當(dāng)有肝類疾病時，ALT就會有相應(yīng)的變化，所以在臨床上測定ALT的指數(shù)常常作為醫(yī)師對肝膽疾病診斷的重要依據(jù)，為了防止經(jīng)血傳播病毒性肝炎的發(fā)生，保障用血安全，ALT是GBl8467-2001中規(guī)定對獻血者必檢的項目之一。

速率法檢測ALT的基本原理是根據(jù)測定區(qū)域單位時間內(nèi)酶作用底物溶液的吸光度變化與酶濃度成比例，ALT酶促反應(yīng)中產(chǎn)生的丙酮酸偶聯(lián)LD催化丙酮酸還原乳酸使NADH變?yōu)镹AD+的指示酶反應(yīng)[5-7]，其廣泛存在于肝臟、心肌、骨骼肌、腎、腦、胰、肺、白細胞和紅細胞中，臨床上常用來檢測對肝臟、心肌等疾病的檢查，其利用NAD+在340nm處有特異吸光度的特異性連續(xù)監(jiān)測，NADH被氧化成NAD+的速率（吸光度下降的速率一△A340nn∥△t）其速率與ALT成正比，從而測得ALT的濃度，當(dāng)樣品中酶的含量特別高時，高含量的標本在反應(yīng)的延遲期內(nèi)已大量消耗基質(zhì)或基質(zhì)耗盡，使反應(yīng)期內(nèi)△A/min很小而產(chǎn)生錯誤的結(jié)果，在到達測定區(qū)域前底物已經(jīng)耗盡，在到達測定區(qū)域時酶反應(yīng)曲線已成為一條平坦的直線，說明吸光度基本上沒有變化，從而測定結(jié)果很低甚至為負值，酶速率法分析時一定要觀察各標本反應(yīng)的起始吸光度，起始吸光度過低或過高和對提示無反應(yīng)區(qū)間的標本應(yīng)稀釋后再重新測定防止高值漏檢，速率法檢測ALT一般經(jīng)過4個步驟，即預(yù)孵育期，遲滯期、線性期和偏離線性期，4個步驟相輔相成，其檢測方法省時、省力、操作簡單、結(jié)果準確，在加上近年來全自動生化分析儀等精密儀器的運用，使其可以一次性處理大批量的標本，使其廣泛應(yīng)用于血站系統(tǒng)對獻血者的初級篩查。

本文通過分析，匯總各項數(shù)據(jù)后結(jié)果顯示：混入CPD保存液＞1.5%（1∶64）時檢測結(jié)果變化有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），混入CPD保存液＜1∶128時，檢測結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。說明不同濃度血液保存液對速率法檢測ALT結(jié)果有一定的影響，此外血脂和黃疸對ALT的測定也有影響。有些患者血清標本呈奶油狀，黏稠狀，而血脂中的大量的乳糜微粒對入射光產(chǎn)生散射，使生化分析儀失靈，無法準確測定吸光度的改變，使測定的結(jié)果出現(xiàn)誤差或者根本無法測定，黃疸血清膽紅素值超過正常范圍后也影響正常的吸光度值，黃疸標本在340nm處有較強的吸光峰，這類的標本中高含量的ALT會導(dǎo)致底物耗盡而在340nm處仍維持較高的吸光度值，應(yīng)稀釋后才能檢測到最準確的結(jié)果。綜上所述，ALT檢測結(jié)果的影響因素較多，為保證檢測結(jié)果的準確性，檢驗人員要加強責(zé)任心，嚴格按照儀器和試劑的說明書進行操作，認真對待每個病人的結(jié)果，善于觀察異常結(jié)果和異常反應(yīng)曲線，及時解決分析前、分析中和分析后出現(xiàn)的異常情況，多學(xué)習(xí)臨床知識，加強對獻血者獻血前的宣傳教育，獻血前獻血者應(yīng)該保證充足的睡眠和充分的營養(yǎng)，檢驗時將檢驗與臨床結(jié)合起來，為臨床提供真實可靠的診斷依據(jù)，確保血液質(zhì)量，避免浪費血液資源的現(xiàn)象發(fā)生。

[1] 吳敏,朱薦,何亞琴.快速全血生化分析儀用于ALT快速初篩的評價[J].中國輸血雜志,2009,17(1):27-28.

[2] 王凱,溫濤.自動化酶免分析系統(tǒng)對ALT含量的檢測分析[J].中國誤診學(xué)雜志,2010,3(8):1190-1191.

[3] 李伍升,方建華,劉玉振.微飯丙酮酸氧化酶及賴氏法與速率法檢測ALT的比較[J].中國誤診學(xué)雜志,2010,6(17):3348-3349.

[4] Marion ER,Ragnhid O,Marsh WL.The clinical significance of alloantibodies of blood group system[J].Semin Hematol,2009,37(2):197.

[5] 汪小華,龍子淵,王英桃.獻血者ALT檢測的影響因素分析[J].臨床輸血與檢驗,2009,7(1):160-161.

[6] Konopka W,Pawlaczyk-Luszczynska M,Straszynski P,et al.Assessment of acoustic environmeng and its effect on hearing in jet engine technical personnel[J].Med Pr,2011,55(12):329-335.

[7] 顧麗芳.2003～2006年常熟市無償獻血者血液檢測結(jié)果的回顧性分析[J].臨床輸血與檢驗,2010,10(1):69-70.

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1671-8194（2013）35-0112-02