HPLC測(cè)定阿魏酸含量的研究

秦迎春秦衛(wèi)紅

（1 湖南省張家界市食品藥品檢驗(yàn)所，湖南 張家界 427000；2 湖南省張家界市人民醫(yī)院藥劑科，湖南 張家界 427000）

HPLC測(cè)定阿魏酸含量的研究

秦迎春1秦衛(wèi)紅2

（1 湖南省張家界市食品藥品檢驗(yàn)所，湖南 張家界 427000；2 湖南省張家界市人民醫(yī)院藥劑科，湖南 張家界 427000）

目的 研究高效液相色譜法在測(cè)定阿魏酸含量方面的進(jìn)展情況。方法 通過(guò)對(duì)阿魏酸測(cè)定和提取等多種不同的方法進(jìn)行比較研究。結(jié)果 高效液相色譜法在測(cè)定阿魏酸含量方面具有自己獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。結(jié)論 采用高效液相色譜法進(jìn)行阿魏酸含量的測(cè)定研究，具有深遠(yuǎn)的意義。本文以期為后期的高效液相色譜法在測(cè)定阿魏酸含量方面的研究提供依據(jù)。

HPLC；阿魏酸；含量研究

高效液相色譜法是目前用于測(cè)定物質(zhì)含量的一種新型的方法。阿魏酸具有多種藥學(xué)功能，研究表明，其具有一定的抗氧化和抗衰老功能，還具有一定的免疫學(xué)價(jià)值。隨著醫(yī)學(xué)研究的不斷深入，開(kāi)發(fā)一種高效的用于治療心腦血管等疾病的藥物具有深遠(yuǎn)意義。阿魏酸具有來(lái)源廣泛，毒副作用小，易于提取純化，且藥效價(jià)值明顯，因此被廣泛研究。本文從多個(gè)方面分析了阿魏酸的研究?jī)r(jià)值，對(duì)其物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行總結(jié)，在藥學(xué)藥理上的作用效果進(jìn)行分析，并對(duì)阿魏酸的提取測(cè)定方法進(jìn)行探究[1]。在進(jìn)行阿魏酸的含量測(cè)定時(shí)，有多種方法，經(jīng)比較后得出，高效液相色譜法是一種測(cè)定阿魏酸含量的較有效的方法，值得進(jìn)一步研究。

1 高效液相色譜法概述

高效液相色譜法，英文縮寫(xiě)為HPLC，是一種新型的測(cè)定物質(zhì)含量的方法。該方法在用于物質(zhì)含量的測(cè)定時(shí)，具有很多自己的獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。該方法測(cè)定時(shí)速度快，效果好，操作簡(jiǎn)單。然而，在進(jìn)行新的物質(zhì)鑒定時(shí)，涉及到一個(gè)實(shí)驗(yàn)成本的問(wèn)題。高效液相色譜儀主要是由色譜柱、進(jìn)樣器、檢測(cè)器、記錄器等部分組成。在工作的時(shí)候，需要樣品液和標(biāo)準(zhǔn)液，首先要制得標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線制備后，進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到物質(zhì)的含量。其工作原理是根據(jù)物質(zhì)的相似相容原理進(jìn)行的，在不斷的解析和再分配的過(guò)程中進(jìn)行物質(zhì)的分離和測(cè)定[2]。最后經(jīng)由記錄儀顯示，轉(zhuǎn)換為液相圖譜進(jìn)行儲(chǔ)存和記錄。HPLC法在測(cè)定的時(shí)候，只需要物質(zhì)能夠制備成為溶液即可，不必受物質(zhì)本身的影響，因此測(cè)定范圍更加廣泛。而目前研究更多的則是液質(zhì)聯(lián)用的使用。這樣不僅實(shí)現(xiàn)了物質(zhì)的提取分離純化，還實(shí)現(xiàn)了物質(zhì)結(jié)構(gòu)的鑒定，為更進(jìn)一步的深入研究提供依據(jù)。

2 高效液相色譜法在測(cè)定阿魏酸含量方面的應(yīng)用研究

2.1 阿魏酸研究進(jìn)展

阿魏酸是目前研究較多的一種芳香酸，其英文名字為ferulic acid，化學(xué)學(xué)名為4-羥-3-甲氧基肉桂酸或3-（4-羥基-3-甲氧苯基）-2-丙烯酸，研究表明其相對(duì)分子質(zhì)量是194.19。阿魏酸屬于肉桂酸的衍生物，具有一定的免疫學(xué)活性，能夠抑制血小板的集結(jié)作用，醫(yī)學(xué)上常被用作止痛藥。在一些常見(jiàn)的藥品如太太口服液中等，都含有阿魏酸。該物質(zhì)還被用作抗氧化和抗衰老的美容保健物質(zhì)。阿魏酸屬于木栓質(zhì)中的一種芳香酸。阿魏屬于一種植物，從阿魏中提出出來(lái)的一種物質(zhì)之一，被命名為阿魏酸。阿魏酸的化學(xué)式為C10H10O4。

阿魏酸在空間構(gòu)象上包括順式構(gòu)象和反式構(gòu)象，對(duì)于順式構(gòu)象，其外形顏色表現(xiàn)為黃色，是一種油狀物質(zhì)，而反式構(gòu)象則是一種晶體存在。阿魏酸的熔點(diǎn)在174℃，其屬于極性物質(zhì)，可溶于熱水，常見(jiàn)的有機(jī)溶劑，而在乙醚中為微溶，在苯與石油醚中則為難溶性物質(zhì)。阿魏酸最常用的功效之一就是阿魏酸具有一定的藥效作用，在臨床醫(yī)學(xué)上常被應(yīng)用。阿魏酸多用于治療一些心腦血管疾病。阿魏酸主要是用于抑制血小板和聚集。在一些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，已經(jīng)證實(shí)，阿魏酸能夠有效的大鼠的血小板聚集。對(duì)于三磷酸腺苷和膠原蛋白有一定抑制效果。阿魏酸的鈉鹽在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，能夠抑制由于缺血而造成的中風(fēng)來(lái)改變血液粘度，達(dá)到治療的效果。阿魏酸還能夠提高benzoic acid所引起的皮膚不良現(xiàn)象。阿魏酸屬于醫(yī)藥原料和中間體，并不能直接入藥，需要進(jìn)行進(jìn)一步的加工和處理。阿魏酸早起形成于植物的葉子中，在植物的種子中也有發(fā)現(xiàn)，阿魏酸在植物中是普遍存在的。含量最多的地方如阿魏、酸棗仁、升麻中等。在一些食品原料里面，也發(fā)現(xiàn)有阿魏酸的成分，多見(jiàn)于咖啡、米糠等食物中。

研究表明，阿魏酸具有一定的鎮(zhèn)靜作用，對(duì)治療心腦血管等疾病有很好的療效[3]。阿魏酸還具有抗早孕的功效。由于阿魏酸本身具有抗氧化性，其結(jié)構(gòu)顯示其抗氧化性效果良好。

2.2 高效液相色譜法測(cè)定阿魏酸含量

對(duì)于阿魏酸的含量測(cè)定，有多種方法。一般常用的方法有微波輔助提取法和超臨界二氧化碳萃取法等，采用高效液相色譜法對(duì)阿魏酸進(jìn)行提取和含量測(cè)定，能夠在短時(shí)間內(nèi)得到準(zhǔn)確的結(jié)果，而且操作起來(lái)比較容易，精密度高，重現(xiàn)性好。研究表明，在進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定阿魏酸的含量時(shí)，流動(dòng)性的選擇很重要，多采用酸系統(tǒng)進(jìn)行。研究資料顯示，在測(cè)定復(fù)方銀杏口服液時(shí)，流動(dòng)相選擇的是甲醇-冰醋酸[4]。測(cè)定阿魏酸還有一些其他的方法，比如薄層掃描法、薄層分光光度法等。高效液相色譜法測(cè)定阿魏酸含量的理論依據(jù)是在一定條件下，有固定的吸收波長(zhǎng)，通過(guò)對(duì)波長(zhǎng)的測(cè)定，讀取吸光值，得到阿魏酸的含量。進(jìn)行阿魏酸的測(cè)定，要選擇合適的色譜柱，調(diào)節(jié)好柱溫，流速，流動(dòng)相等多個(gè)條件，才能夠得到準(zhǔn)確的結(jié)果。

黃羅生等對(duì)高效液相色譜法測(cè)定阿魏酸的含量進(jìn)行了探討。其研究結(jié)果表明，在進(jìn)行阿魏酸含量的測(cè)定時(shí)，選取紫外檢測(cè)器，其色譜條件需在實(shí)驗(yàn)時(shí)根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行，選取的色譜條件是Shimpack CLC- ODS（150mm×6mm）色譜柱，流動(dòng)相為甲醇乙腈磷酸三乙胺水按適當(dāng)比例進(jìn)行，檢測(cè)波長(zhǎng)選擇324nm，流動(dòng)相流速為1.0mL/min。經(jīng)由單因素實(shí)驗(yàn)，得到最佳的測(cè)定條件。測(cè)定阿魏酸的方法雖然很多，而且常用的提取溶劑多為甲醇和乙醇，而實(shí)際上，這樣的選擇是有一定的局限性的。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，將溶解阿魏酸的溶劑進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，能夠有效的改善阿魏酸的降解情況，使得測(cè)定條件穩(wěn)定，數(shù)據(jù)可靠。而且在進(jìn)行該試驗(yàn)的時(shí)候，要盡量的做到避光實(shí)驗(yàn)和溫度適當(dāng)，不能夠見(jiàn)光以及溫度不能夠過(guò)高。該試驗(yàn)結(jié)果還顯示，對(duì)于一些藥物的測(cè)定，選用的溶劑不合適的話，會(huì)造成雜質(zhì)量加大，破壞色譜柱，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，還提高了實(shí)驗(yàn)成本。該試驗(yàn)通過(guò)多次驗(yàn)證，得到了最佳的配比組合，使得阿魏酸在測(cè)定時(shí)有一個(gè)準(zhǔn)確的溶劑配比。其對(duì)其他藥材也具有一定的參考價(jià)值。其還得到了阿魏酸含量最高的當(dāng)歸產(chǎn)地，對(duì)其含量進(jìn)行比較，明確地區(qū)對(duì)物質(zhì)中阿魏酸的含量有明顯的差異性這一現(xiàn)象。

王衛(wèi)鋒等對(duì)婦月康膠囊中的阿魏酸含量采用了高效液相色譜法進(jìn)行了測(cè)定。其色譜條件選取美國(guó)進(jìn)口紫外檢測(cè)器，TIAN-250C18（4.6mm×250mm，5m）的色譜柱，選擇spectra system P4000型泵，采用購(gòu)買的對(duì)照品制備對(duì)照品溶液，流動(dòng)相選取甲醇和1%冰醋酸水溶液按一定比例配制而成，流動(dòng)相的流速控制在1.0mL/min，色譜柱溫度為常溫，選取320nm為檢測(cè)的波長(zhǎng)，這個(gè)和黃羅生等人的研究檢測(cè)波長(zhǎng)稍有出入。其經(jīng)過(guò)試驗(yàn)驗(yàn)證，得到阿魏酸在該條件下的實(shí)驗(yàn)線性關(guān)系良好，能夠代表阿魏酸的具體含量測(cè)定。該試驗(yàn)研究還進(jìn)行了精密度和重復(fù)性、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)的精密度在可信度范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性良好，試驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定，具有可信性和可操作性。

呂海濤等采用高效液相色譜法研究了當(dāng)歸中阿魏酸的穩(wěn)定性。其色譜條件選取的是Eclipse XDB-C18（4.6mm×150mm）色譜柱，選取甲醇和水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為325 nm，流速控制在1.0mL/min范圍內(nèi)。繪制好標(biāo)準(zhǔn)曲線后，選取溶劑和光照為影響因素，研究阿魏酸的穩(wěn)定性。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，阿魏酸在見(jiàn)光條件下容易分解，其穩(wěn)定性相對(duì)略差，在加熱的條件下，阿魏酸也容易分解。由此可見(jiàn)，阿魏酸的保存方法應(yīng)該是選擇在避光陰暗處保存，而且溫度不能夠太高。

2.3 高效液相色譜法測(cè)定阿魏酸方法討論

高效液相色譜法測(cè)定阿魏酸的含量，是一個(gè)新型的技術(shù)。在采用該方法的時(shí)候，需要注意的問(wèn)題有很多。主要需要注意的問(wèn)題包括色譜柱的選擇，色譜條件的確定，標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作，標(biāo)樣的制備，等等。多個(gè)因素綜合影響了實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。阿魏酸是醫(yī)學(xué)上常用的一種藥物，其生理功能有很多。梁娜等研究表明，阿魏酸具有抗氧化性，具有抗血栓的作用，還能夠抗血糖，抗血脂，預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化，還具有抗菌消炎的功效，還有的研究表明，阿魏酸能夠在一定程度上抑制癌細(xì)胞的發(fā)生，對(duì)預(yù)防腫瘤等疾病有很好的療效。

3 結(jié)束語(yǔ)

阿魏酸是一種具有多種功能的藥學(xué)用物質(zhì)。對(duì)于阿魏酸的研究，具有很深遠(yuǎn)的意義。在提取和測(cè)定阿魏酸的時(shí)候，有多種方法。隨著科技的進(jìn)步，醫(yī)學(xué)事業(yè)的不斷的發(fā)展，高效液相色譜法逐漸的被應(yīng)用到醫(yī)學(xué)方面的測(cè)定中，對(duì)醫(yī)學(xué)的提高和進(jìn)步是有很大的推動(dòng)作用的。人們對(duì)醫(yī)學(xué)的重視也在逐漸的深化，如何更好的進(jìn)行阿魏酸含量的測(cè)定，是一個(gè)值得研究的問(wèn)題。

[1]趙淑杰.高效液相色譜法測(cè)定消痛液藥酒中阿魏酸的含量[J].藥物分析雜志,1992,12(2): 119.

[2]陳漢平,劉素香,李桂梅,等.高效液相色譜法測(cè)定當(dāng)歸及其炮制品中的阿魏酸含量[J].中草藥,1988,19(10):15-16.

[3]張娟,金青哲,王興國(guó),等.阿魏酸及其衍生物合成及藥理研究進(jìn)展[J].糧食與油脂,2007,20(1):43-45.

[4]徐自升,蔡寶昌,張弦,等.中藥川芎中阿魏酸穩(wěn)定性的研究[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2004,18(2):25-27.

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