中藥配方顆粒劑質量控制研究現狀及展望

陳 昭 畢曉黎* 邱宏聰 孫冬梅

1.廣東省中醫藥工程技術研究院，廣東 廣州 510095;2.廣西壯族自治區中醫藥研究院，廣西 南寧 530022

1 緒論

作為中華民族傳統文化的瑰寶，中醫藥為改善人類生活及健康狀況，預防和治療各類疾病做出了其獨特、長遠而重大的貢獻。中藥作為一種多組分、多靶點、低毒副作用的治療藥物，以其整體性和系統性，越來越得到國內外研究者、醫務工作者和患者的肯定。近年來，針對中藥及天然藥物的研究方興未艾。在藥物分析領域，大量中藥材及其活性成分的質量控制與藥代動力學研究見諸各類專業及大眾媒體。相關標準化和現代化研究，也催生了多種多樣與現代技術相結合的中成藥制劑[1～3]。

配方顆粒劑便是其中較為成熟安全，應用較為廣泛的品種[4～6]。它在保持原有藥物功效及作用的前提下，實現了藥物便捷使用、順利服用和高效作用。通過現代制劑工藝將提取液制備成固體顆粒，不但可以提高中藥的接受程度，也為質量控制和有效成分分析提供了極大的便利。

目前，對于配方顆粒劑的質量控制，主要集中在鑒別及含量測定等關乎藥物安全性、有效性、穩定性和可控性的內容之上。從技術層面看，分析方法主要有:薄層色譜法 (TLC/HPTLC)，紫外法 (UV)，紅外法 (IR)及高效液相色譜法 (HPLC)、氣相色譜法 (GC)與毛細管電泳法(CE)等等[1～3，8，9]。這些方法的確較為全面、客觀、高效地完成了質量控制的各項任務，但其中仍存在大量改進的空間。例如，在現有品種中，仍有相當數量并無完整的活性成分確證及含量測定方法;部分品種雖然對其中某些標志性成分進行了分離和含量測定，但其中仍有大量具有一定藥理活性的化合物沒有涉及或在提取截斷就被棄去。如此一來，不但可能影響藥物質量控制的全面、科學和客觀性，也可能忽視其中某些毒性成分，造成質量標準中遺留安全隱患。

此外，對于中藥和天然藥物而言，由于內部存在大量活性成分與干擾組分，對檢測的靈敏度和分離度提出了更高的要求。特別是在進行血藥濃度測定和體內藥代動力學研究的情況下，血漿或其它體液中存在著大量蛋白和干擾離子，此時，一些傳統方法的局限性更為突出[10～12]。

綜上所述，將中藥為代表的復雜體系制成顆粒劑后，在一定程度上排除了干擾，提高了藥物治療的特異性。但對于這里藥物及其所選藥材的質量控制，更需要謹慎、客觀和全面的進行考察和評估。特別是注重對于藥材成為制劑后可能產生的配伍與活性成分的變化，可能消除或引入的雜質，制備前后各組分的含量變化等。本文將從配方顆粒劑質量研究的整個環節，即提取分離、鑒別測定以及后續的血藥濃度檢測與藥代動力學研究入手，評估目前進入實用化階段的各項技術在該領域的特點及應用狀況，試圖探尋全面提升研究效率，使相關檢測與研究更為全面、客觀的技術與方法。

2 通行技術方法綜述

與中藥相似，配方顆粒劑也存在著復雜的成分及干擾。同時，即使單味藥材，活性成分也往往為一系列結構類似物，這就給這些藥物的分離與測定帶來了相當的難度。為實現全面、準確、高效的中藥及其制劑質量控制，需要使用多種技術、多種方法，以提升分離度、選擇性和專屬性。

2.1 高效液相色譜技術 作為現行分析技術中較為可靠、高效且用途廣泛的手段，高效液相色譜技術 (HPLC)已經成功運用于對以中藥、天然藥物為代表的各類復雜體系之中。通過其反向分離機理，不同類型甚至同一類型不同結構、不同官能團的化合物都能被區分開來。因此，只要色譜條件適宜，大多數中藥的活性成分都可以使用HPLC及相關方法進行檢測[13－15]。然而，在HPLC中藥分析的報道中存在兩種趨勢:一是選取藥材中1－3種 (不超過4種)活性成分，對其進行分離與測定[13－16];二是盡可能多地收集藥材中的成分信息，即優化色譜條件使得其中更多成分洗脫并實現基線分離，而后采用化學計量學的方法 (如主成份分析)對搜集得來的數據進行全面評估[17，18]。兩種方法均有各自的優勢和特色，但也存在不可忽視的問題。例如，前者為保證分離度及柱效，往往會選擇盡可能少的目標化合物，降低了質量研究的全面性與系統性;而后者則存在數據量過大，針對性較差等問題，影響了藥物的快速、準確和高效檢測。

2.2 氣相色譜法，氣相色譜－質譜聯用法 此類方法使用高溫氣體作為流動相，主要用于分析氣態或揮發性成分，常見于中藥材中所含揮發油類成分，或是制劑提取過程中的溶劑殘留[19，20]。氣相色譜法在應用上存在較多局限，如準備時間長，載氣消耗大，靈敏度、選擇性不盡如人意等，外加對于不揮發性成分較難進行檢測，故應用不甚廣泛。氣相色譜－質譜聯用技術 (GC/MS)一定程度上解決了靈敏度和干擾上存在的問題，但仍無法克服GC技術本身效率和適用性不佳的問題。對于中藥而言，集中進行揮發油、溶劑、農藥及其他揮發性有機成分的研究，或為GC及GC/MS技術最好的應用方向。

2.3 毛細管電泳/電色譜法 作為微分析技術的一種，毛細管電泳/電色譜 (CE/CEC)法具有其獨特的技術優勢及分離機制，它是一類以毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅動力的新型液相分離技術。毛細管電泳正是利用這種機理實現了待測物的分離。近年來，隨著檢測技術和柱技術的發展，此類技術得到了突飛猛進的發展和研究者的廣泛關注[21－23]。

近年來，隨著毛細管電泳/電色譜技術在復雜體系分離分析中的應用更為廣泛，并在中藥和天然產物活性成分分離測定研究方面取得了一定進步[24，25]。同時，由于新型柱技術的引入，毛細管電色譜不再局限于分離測定某些傳統分析技術無法檢測的藥物，而是已經能夠部分甚至全部替代傳統技術。各種柱技術使得毛細管電色譜具有電泳－色譜雙重分離機理，使得原本依靠電性差異無法分離的各種化合物能夠被毛細管柱內的填料或多孔聚合物分開，大大提升了CEC的應用范圍。此外，毛細管電色譜可以將較高的電壓 (10－30kV)加在相對密集 (50－100μm內徑，30－70cm長度)的空間內，大大提升了分析速度和分離度，對于成分復雜，干擾較多的中藥配方顆粒具有較好的應用前景。

2.4 提取與前處理技術

作為復雜體系樣品，如果能夠實現高純度、富集甚至實時、在線分析，并在計算機控制下完成全部操作，能夠大量節約了時間與勞動，對于配方顆粒劑這樣體系較為復雜的樣品的質量研究將會起到巨大的推動作用。本節將著重介紹兩種與中藥分析和微分析關系密切的前處理技術。

2.4.1 加速溶劑萃取技術 (ASE) 加速溶劑萃取是一種高速、高效、高自動化的提取和純化新技術。通過一整套的自動化機械和智能化操作系統實現全自動提取，并通過其核心技術——高壓萃取實現萃取效率的大幅提升[26，27]。在ASE提取過程中，系統全程采用高氣壓輔助 (1000～3000psi)，保證了萃取溶劑在整個萃取過程中所施加的高溫(50～200℃)下仍舊呈液態。如此一來，溶劑分子的表面張力和粘度下降，擴散及質量轉移增加。使得它們與樣品基質之間的相互滲透和相互作用更為頻繁，萃取效率也得到大幅度提升。此外，在高壓下，高溫的溶劑依舊保持液態，中藥里各活性成分的溶解度得到大幅提升，相比傳統分析技術而言，ASE的提取的活性成分含量更大，保證了較高的提取效率。

ASE的另一特點就是全自動的提取、采樣和純化操作，整個過程由程序控制，可以同時處理大量樣品，所得提取液無論純度還是濃度，均符合直接進樣要求。如此一來，便可以大大節省提取分離及前處理的時間。當然，為獲得雜質更少的樣品，或是為了特異性提取其中某一活性成分，則仍需要諸如制備液相色譜或大孔樹酯洗脫等技術手段完成進一步的分離與制備。

2.4.2 微透析采樣技術 作為一種植入性在線取樣技術，微透析不僅可以作為生物體內活動的實時監測工具[28]，也能夠用于對生物體液中各種內源性和外源性物質進行檢測[29，30]。將其和毛細管電色譜相結合，從技術特點上看，微透析借助其體系中的半透膜將體液分為兩個部分，細胞外空間和生理緩沖液，而后者相較前者更為純凈和濃集。通常情況下，后者才收集后可直接使用HPLC、CE或其他分析技術進行測定。因此，微透析通過將體液分層的手段，為持續、直接和自動的生物體液分析提供了可能，同時也因其集約型和小型化，大大提高了研究的效費比。

3 配方顆粒劑質量研究的展望

除了活性成分及質量標準外，配方顆粒劑的標準化仍然存在一些障礙。包括:安全性、毒性及不良反應，顆粒劑藥效與傳統中藥水煎劑的對比等。此外，配方顆粒劑仍需要對其功能主治、代謝過程及療效進行全面而有針對性的評估。然而，中藥配伍成分復雜，基質、雜質和各活性成分之間的干擾及相互作用機理較為模糊;研究顆粒劑的活性成分含量，進而對其藥代動力學及藥效學參數進行深入研究，對于分析方法及儀器技術的要求則更為復雜和高深。當對顆粒劑的研究深化到其血藥濃度測定及藥代動力學研究時，所檢測樣品的復雜性將大幅提升。如血漿和體液、組織液樣品，由于樣品基質中大量存在的蛋白、干擾離子和其他成分，影響藥物的提取，降低分析方法的靈敏度和選擇性;更何況，藥物在體內也未必以游離態存在。因此，對于體內生物樣品的分離、純化和富集，而后進行有針對性的檢測，是擺在藥物分析工作者面前的難題。

分離分析復雜體系需要更為快速、靈敏、高效和專屬性較高的檢測技術和分析方法，也刺激了儀器分析和相關技術及方法學研究與應用的進步。時至今日，高效液相色譜法 (HPLC)、液相色譜－質譜聯用法 (LC/MS)和紫外分光光度法 (UV)依舊是分析配方顆粒劑樣品最為成熟可靠的手段[31－33]。

3.1 新方法、新技術在配方顆粒劑研究中的應用前景分析

從上面的敘述中可知，在研究配方顆粒劑時，應當更加注重藥材特別是其中某些活性成分體內血藥濃度監測及藥代動力學參數獲取。研究血藥濃度與時間的關系，探尋目標成分的代謝途徑。將中藥飲片或藥材制成顆粒劑之后，對于其配伍、藥效、毒性、吸收與代謝是否發生變化，目前在藥物分析及中藥研究領域仍就存在較大空白。因此，更需要選擇高靈敏度、高選擇性，同時擁有成熟商品化儀器的提取分析方法。除各種儀器技術外，在具體的分析之中，還有一些方法能夠克服復雜體系分離分析中存在的雜質干擾多、樣品信號相對較低的缺陷。

3.1.1 信號增強方法 由于液相色譜提高響應值多依靠檢測器的改進，通過設定和操作得到的提升效果有限，主要涉及毛細管電泳/電色譜分析中靈敏度的提升方法。場放大堆積技術 (FASS)是其中一種常用且有效的方法，它能夠在毛細管區帶電泳 (CZE)的條件下大幅提高靈敏度。在先前的文獻中，該項技術曾經成功用于待測物的信號增強[34]，可以解釋為利用運行緩沖液和樣品溶劑之間電導的差異，意味著樣品的響應可以通過擴大這種差異而得到提升。正如文獻所報道的一般，有機溶劑誘導的場放大堆積能夠實現對樣品響應的大幅度改善[35]。這一點，不但對于中藥材及顆粒劑內各種有效成分的檢測與分析更為有利，在檢查某些微量甚至痕量的毒性化合物時，也能使用該方法完成分析測定。

3.1.2 雜質排除方法 除技術部分所介紹的提取和采樣技術外，對于復雜體系，也可以聯用某些分析檢測技術，將整個分析劃為一、二相 (甚至第三相)。第一相為初步篩選或分離，即將感興趣的成分與干擾性成分分隔開來，通過柱切換技術將前者導入第二相，而后繼續分離[36]。類似的方法，還曾出現在毛細管電泳－質譜聯用技術中，利用CE的高效、快速，與MS的高靈敏度和分辨率相結合。此外，還也對毛細管內壁進行一些修飾和改性，增強其適應性和分離效能[37]。

多相分離機理的引入，能夠很大程度提高復雜體系分離分析的選擇性和效率。同時，對于顆粒劑的質量控制與機理分析，由于無關物質的排除，分離分析其中目標成分的技術改進空間也會大幅提升。僅有感興趣的化合物進入第二相之中，干擾的減少使得分離分析的難度大大降低。

4 結論

鑒于國家對中醫藥的高度重視，以及配方顆粒劑標準化研究的逐步推進，相關研究機構及生產企業，必然面對更為繁重和復雜的質量標準研究、確立與提高等工作。另外，對其藥效、毒理及藥代動力學的研究，也會隨著這一過程的深化而逐步開展。

[1]胡鈞.不同產地白芷中有效成分歐前胡素的含量比較[J].中國新醫學論壇，2008，8(4);50

[2]肖建春，陳帥，袁崇均.HPLC法同時測定陳皮中4個黃酮類成分的含量[J].四川中醫，2012，3O(7):55－57

[3]雷霖，何健飛.高效液相色譜法測定桑葉中蘆丁的含量[J].中國衛生檢驗雜志，2012，22(3):468－469

[4]孫冬梅，畢曉黎，羅文匯.佛手配方顆粒的現代質量控制研究[J].中成藥2009，31(10):1550－1554

[5]程學仁，羅文匯，孫冬梅.巴戟天藥材高效液相指紋圖譜初步研究[J].中國藥業2010，19(13):8－9

[6]羅文匯，李養學，孫冬梅.陳皮配方顆粒中多糖含量測定研究[J].中國當代醫藥，2011，18(2):32－33

[7]余琪，姜艷，周丹英.杭白菊提取物中活性成分及總黃酮的含量測定[J].中國現代應用藥學，2011，28(6):530－532

[8]王磊磊，陳軍輝，王虹.赤芍與白芍藥材高效毛細管電泳指紋圖譜方法學研究[J].時珍國醫國藥，2008，19(10):2341－2345

[9]Wen Liu，Hua－lin Cai，Huan－de Li.High performance liquid chromatography－electrospray ionization mass spectrometry(HPLC－MS/ESI)method for simultaneous determination of venlafaxine and its three metabolites in human plasma[J].Journal of Chromatography B，2007，50(8)405–411.

[10]Xue Qiao，Min Ye.，Cheng Xiang，Qing Wang Analytical strategy to reveal the in vivo process of multi－component herbal medicine:A pharmacokinetic study of licorice using liquid chromatography coupled with triple quadrupole mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A，2012，58(12)84–93

[11]Haifeng Wu，Jian Guo，Shilin Chen Recent developments in qualitative and quantitative analysis of phytochemical constituents and their metabolites using liquid chromatography– mass spectrometry[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2013，72(2):267 –291.

[12]高秋濤，畢開順.HPLC法測定甘草附子湯中甘草苷和香豆素的含量[J].沈陽藥科大學學報，2003，20(6):439－441

[13]古麗娜·沙比爾，郭洪祝，郭慧.HPLC法測定羌活中阿魏酸、羌活醇、苯乙基阿魏酸酯和異歐前胡素[J].中草藥，2006，37(6):937－940

[14]Min Yang，Jianghao Sun，Zhiqiang Lu，Phytochemical analysis of traditional Chinese medicine using liquid chromatography coupled with mass spectrometry Journal of Chromatography A，2009，16(12):2045–2062.

[15]Yunqiu Yu，Peilan Ding，Daofeng Chen Determination of quinolizidine alkaloids in Sophora medicinal plants by capillary electrophoresis[J].Analytica Chimica Acta，2004，23(5)15–20.

[16]郭延生，華永麗，杜天璽.基于化學計量學的HPLC指紋圖譜在當歸炮制品質量控制和識別中的應用[J].中國中藥雜志，2010，35(12):1551－1555.

[17]王旋，郝海平，王廣基.化學計量學在中藥復方整體研究中的應用研究進展[J].中國天然藥物，2009，7(3):234－240

[18]郭萬周，賈荷麗，楊媛媛.毛細管氣相色譜法測定南陽道地藥材唐半夏的有機氯農藥殘留[J].中醫學報，2012，27(2):201－202

[19]張錚.不同產地蒼術中β－桉葉醇含量的測定[J].中國藥事，2012，26(1):64－65，73

[20]Claudia Desiderio，Antonella De Rossi，Massimo Sinibaldi，Analysis of flavanone－7－O－glycosides in citrus juices by short－end capillary electrochromatography[J].Journal of Chromatography A，2005，81(10):99–104.

[21]Markus Ganzera Quality control of herbal medicines by capillary electrophoresis:Potential，requirements and applications [J].Electrophoresis，2008，29(10):3489–3503.

[22]周潔宇，章獅瑋，許學書.毛細管電泳法手性拆分橙皮苷對映體[J].食品科學，2006，27(5):202－205.

[23]Zhao Chen，Jiajing Wang，Danxia Chen，Guorong Fan，Yutian Wu Sodium desoxycholate－assisted capillary electrochromatography with methacrylate esterbased monolithic column on fast separation and determination of coumarin analogs in Angelica dahurica extract[J].Electrophoresis，2012，33(10):2884 –2891.

[24]Guoxiang Xie，Aihua Zhao，Wei Jia Fingerprint analysis of Rhizoma chuanxiong by pressurized capillary electrochromatography and high－performance liquid chromatography[J].Biomed.Chromatogr.2007 21(4):867–875.

[25]陳軍輝，楊佰娟，李文龍.加速溶劑萃取技術在中藥有效成分分析中的應用[J].色譜，2007，l25(5):628～632.

[26]楊運云，黃深惠，馮鋒.加速溶劑萃取/HPLC－MS對毛冬青藥材中Ilexgenin A與Ilexsaponin A1含量的測定[J].分析測試學報，2009，128(18):966－969.

[27]R.K.Verbeek.Blood microdialysis in pharmacokinetic and drug metabolism studies[J].D Advanced Drug Delivery Reviews 2000，45(1):217–228.

[28]Benita Hyllbrant，Niklas Tyrefors，Bengt Langstrom.On the use of liquid chromatography with radio－and ultraviolet absorbance detection coupled to mass spectrometry for improved sensitivity and selectivity in determination of specific radioactivity of radiopharmaceuticals[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，1999，20(2):493 –501.

[29]Elizabeth C.M.de Lange，Bert A.G.de Boer，Douwe D.Breimer，Microdialysis for pharmacokinetic analysis of drug transport to the brain[J].Advanced Drug Delivery Reviews 1999，36(:1):211–227.

[30]胡慧媛，孟舒，孫雪菲，等.HPLC法測定導赤沖劑中異牡荊苷和異葒草苷的含量[J].中國藥事，2012，26(6):617－619.

[31]王慧，王亮，李福杏.RP－HPLC法測定“加味白頭翁”顆粒中鹽酸小檗堿的含量[J].中國農學通報，2012，28(17):87－91.

[32]吳巧鳳，戴曉燕，文欣欣.祛瘀清熱顆粒劑中苦杏仁苷和甘草酸成分的含量測定[J].中成藥，2012，34(5):857－861.

[33]Zak K.Shihabi Stacking in capillary zone electrophoresis Journal of Chromatography A，2000，90(2)107–117.

[34]Zakariya K.Shihabi Transient pseudo－isotachophoresis for sample concentration in capillary electrophoresis[J].Electrophoresis，2002，23(8):1612－1617.

[35]Ji Li，Li Wang，Zhao Chen.Development and validation of a rapid HPLC method for the determination of cefdinir in beagle dog plasma integrated with an automatic on－line solid－phase extraction following protein precipitation in the 96－well plate format[J].Journal of Chromatography B，2012，88(1)83 －88.

[36]Christian W.Klampfl Recent advances in the application of capillary electrophoresis with mass spectrometric detection[J].Electrophoresis，2006，27(1):3–34.