山·羊·腸·毒·血·癥·的·診·斷

史麗華

（遼寧醫學院畜牧獸醫學院，遼寧 錦州 121001）

2011年5月下旬，義縣某養羊戶有7只山羊羔突然發病，數分鐘內死亡2只，2～4h內死亡3只，2天內又死亡2只，病死率100%。死亡的山羊是膘情較好的2月齡大羔。死亡分散在圈舍、放牧途中和放牧地。發病后畜主自行購入阿莫西林進行治療，但無效果。該群山羊膘情較好，以往沒見任何疾病，也沒打過任何疫苗和驅過蟲。羊只平時采食良好，全天放牧不補料，飲水即在溝塘邊的積水坑。

1 臨床癥狀

羊群在放牧過程中有的山羊羔突然發病，病初相繼出現2只山羊離群倒地抽搐，很快死亡，無明顯癥狀。有2只山羊，肌肉抽搐，磨牙，口涎增多，眼球轉動，倒地，四肢做劃泳運動，隨后頭頸顯著抽縮，2～4h內死亡。有1只山羊早期癥狀為步態不穩，以后臥倒，并有感覺過敏，流涎，上下頜“咯咯”作響，繼而昏迷，角膜反射消失，3～4h內死亡。有2只山羊精神不振，全身無力，病初步態不穩，以后倒臥，繼而昏迷，在2天內衰竭死亡。

2 病理剖檢變化

死亡的山羊尸體腐敗迅速，腹部臌脹，可視黏膜發紺。剖檢3只，真胃膨滿，充滿食糜，在胃底腺區有出血，黏膜壞死、潰瘍。小腸黏膜出血，特別是漿膜下嚴重出血，漿膜表面呈暗紅色，似血腸，切開腸管見黏膜呈暗紅色血樣，腸黏膜壞死。腸系膜淋巴結腫大、出血。腎腫大、軟化有波動感，有2只是一側性，另1只是兩側性的。心包液、胸腔液、腹腔液增多，滲出液呈澄黃色透明，暴露在空氣后不久凝結呈膠凍狀，心臟擴張，心肌柔軟，心內膜、心外膜呈點狀或斑狀出血。有1只羔羊的肺充血、水腫，肺的被膜下有出血點。膽囊擴張，積有多量淡綠色稍黏稠的膽汁。

3 實驗室診斷

3．1 試驗材料 無菌條件下采集病死羊的心血、肝、脾、腎臟等病料。

革蘭染色液、葡萄糖血液瓊脂平板培養基、肝片肉湯培養基、綿羊血瓊脂平板培養基、牛乳培養基，上述染色液和培養基按常規方法制備。微量糖發酵管，購自上海醫化所，產氣莢膜梭菌定型血清，購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所。試驗動物用豚鼠，購置醫學院動物中心。

3．2 試驗方法

3．2．1 細菌形態學檢查 無菌采集病死羊心血、肝、脾、腎，進行涂片和觸片，進行革蘭染色，鏡檢。

3．2．2 細菌分離培養 將無菌采集的心血、肝、脾、腎病料分別接種在肝片肉湯及葡萄糖血液瓊脂平板上，在厭氧環境中，置于37℃恒溫箱中培養8～24 h，觀察細菌培養特性。取上述培養物涂片鏡檢，觀察細菌形態特征。

3．2．3 純培養 釣取葡萄糖血液瓊脂平板上典型菌落，劃線接種于綿羊血瓊脂平板上，37℃培養8～12h。

3．2．4 生化試驗 將綿羊血瓊脂平板上細菌分別移種于葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、果糖、淀粉發酵管及牛乳培養基，37℃培養8～12h后觀察結果。

3．2．5 腸毒素檢查 取病死羊回腸的內容物100 mL，加4倍生理鹽水稀釋，充分混合后，3 000r／min離心10min，取其上清液分別給2組豚鼠腹腔注射0．2mL，0．5mL，每組5只。觀察其發病死亡情況，以判斷是否有腸毒素存在。同時設3只豚鼠為對照組，分別注射生理鹽水0．5mL。

3．2．6 毒素定型試驗 用前述回腸內容物上清液各0．4mL分別與A、B、C、D型產氣莢膜梭菌定型血清各0．1mL混合，置于37℃恒溫箱內中和50 min。其后分別給5只試驗豚鼠腹腔注射。同時另外給3只豚鼠單獨注射0．4mL回腸內容物之上清液作對照。

3．3 試驗結果

3．3．1 細菌形態學檢查 經100倍油鏡檢查，涂片上均見有兩端鈍圓，革蘭陽性大桿菌，單個存在或2～3個菌體相連的短鏈，有莢膜。

3．3．2 細菌分離培養特性 肝片肉湯培養基 經37℃培養8h后，肝片肉湯渾濁，有氣泡產生；培養24h，管底形成白色沉淀物。葡萄糖血液瓊脂平板培養基 經37℃培養8h后，形成圓形或圓盤形中央隆起的淺灰色菌落，有溶血環或雙溶血環。取上述培養物涂片鏡檢，可見革蘭陽性大桿菌，與病料涂片上的細菌形態一致。

3．3．3 生化試驗結果 能發酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、果糖，產酸產氣，不分解甘露醇、淀粉。在牛乳培養基上產生“暴烈發酵”現象。上述生化反應結果符合產氣莢膜梭菌的生化特性。

3．3．4 腸毒素檢查結果 注射病死羊回腸內容物上清液的2組豚鼠分別于4h和10h后死亡，對照組健活。說明病死羊腸內有腸毒素存在。

3．3．5 毒素定型試驗結果 注射A、B、C型血清（抗毒素）＋腸內容物（腸毒素）的豚鼠和只注射腸內容物的對照組豚鼠均先后死亡，只有注射D型血清＋腸內容物的豚鼠存活。據此可判斷腸毒素為D型。

4 小結與討論

4．1 根據流行病學、臨床癥狀、病理剖檢及實驗室檢驗，診斷本次疫情為由D型產氣莢膜梭菌引起的山羊腸毒血癥。

4．2 當羊群中出現本病時，立即轉移到高燥的地區放牧。避免喂食蛋白質過多的飼草、飼料，及鮮嫩多汁牧草，避免在沼澤地或水田放牧，放牧時避免飲坑溝中不清潔積水。

4．3 在常發病地區，應定期注射羊腸毒血癥菌苗。