兩種方法分別測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量

盧彤宇

（吉林省人民醫(yī)院藥劑科，吉林 長春 130021）

兩種方法分別測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量

盧彤宇

（吉林省人民醫(yī)院藥劑科，吉林 長春 130021）

目的 比較兩種不同方法測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量。方法 采用 NaNO2-Al（NO）3，和差示分光光度法，均以蘆丁為對照品測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量。結(jié)果 采用 NaNO2-Al（NO）3 比色法及差示分光光度法測定的烏腺金絲桃中的總黃酮含量分別為 10.5% 及 8.4%。結(jié)論 以蘆丁為對照品，NaNO2-Al（NO）3 比色法測定的烏腺金絲桃總黃酮中的含量更高，可以作為含量測定的方法。

烏腺金絲桃；總黃酮；分光光度法

烏腺金絲桃[1-2]（Hypericum attenuatum Choisy）為藤黃科金絲桃屬植物，為民間常用中藥。具有止血、鎮(zhèn)痛、通乳等功效，近年來研究表明該植物含有十幾種黃酮及其苷類化合物，黃酮類化合物具有較好的藥理活性。為了開發(fā)利用烏腺金絲桃，了解藥材中總黃酮的含量，我們采用兩種不同的方法測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量。為烏腺金絲桃藥材的進(jìn)一步開發(fā)利用打下基礎(chǔ)?？傸S酮的測定方法有很多種，比色法是最常用的方法之一。比色法有NaNO2-Al（NO）3[3-4]、差示分光光度法和AlCl3比色法。其中以NaNO2-Al（NO）3最為常用，本實(shí)驗(yàn)比較了上述2種方法來測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量，為烏腺金絲桃中成分測定提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

紫外可見分光光度計752N（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；電子天平BS124S（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；蘆丁對照品購于中國食品藥品檢定研究院（批號：100080-200707）。烏腺金絲桃藥材購于藥材公司 ，由長春中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室鑒定。其他試劑均為分析純。

2 方 法

2.1 供試品的制備

取烏腺金絲桃藥材，粉碎，取藥材粉末約1 g，精密稱定，置于100mL量瓶中，加80mL50%乙醇，超聲提取20min，放冷，用50%乙醇補(bǔ)足至刻度，搖勻，即得。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取在105℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品適量，加50%乙醇制成每毫升含1mg 的對照品溶液。

2.3 NaNO2-Al（NO）3比色法

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液1、2、3、4、5mL，置于10 mL量瓶中，加入亞硝酸鈉試液0.3mL，搖勻，放置6min，加入10%硝酸鋁試液0.3mL，加入氫氧化鈉試液 3mL，加50%乙醇定容至刻度，在505nm處測定顯色后溶液的吸光度。以吸光度為縱座標(biāo)，對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為y=31.958x+0.393（R=0.9993）。結(jié)果表明， 蘆丁溶液濃度一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 樣品溶液中總黃酮含量的測定

取供試品溶液5mL，置于10mL量瓶中，按“2.3.1”項(xiàng)下操作，測定505nm處吸光度，計算烏腺金絲桃中總黃酮的含量。

2.4 差示分光光度法

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5mL，各兩份，置10 mL容量瓶中，其中一份加入50%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為參比液。另一份加入2%ZrOCl2·8H2O乙醇溶液1.5 mL，再加50%乙醇稀釋至刻度?；靹?，靜置1 h，在波長為420nm 處測定吸光度。以吸光度為縱座標(biāo)，對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為 y=31.057x+0.340，（R=0.9994）。結(jié)果表明，蘆丁溶液濃度一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4.2 樣品溶液中總黃酮含量的測定

取供試品溶液5mL，置于10 mL量瓶中，按“2.4.1”項(xiàng)下操作，測定420nm處吸光度，計算烏腺金絲桃中總黃酮的含量。

3 結(jié)果與討論

3.1 兩種方法測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量

采用NaNO2-Al（NO）3比色法及差示分光光度法測定的烏腺金絲桃中的總黃酮含量分別為10.5%及8.4%。采用NaNO2-Al（NO）3比色法測定的黃酮含量更高，故對此方法在線性關(guān)系良好的基礎(chǔ)上進(jìn)一步進(jìn)行方法學(xué)考察。

3.2 NaNO2-Al（NO）3比色法的方法學(xué)考察

3.2.1 精密度

精密吸取對照品溶液5mL，置10mL容量瓶中，按“2.3.2”項(xiàng)下方法，在505nm 下連續(xù)5次測定吸光度，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）為1.45%。表明儀器精密度良好。

3.2.2 穩(wěn)定性

精密吸取對照品溶液5mL，置10mL容量瓶中，按“2.3.2”項(xiàng)下方法，在10，20，30，59，60min 在505nm 下測定吸光度，考察其吸光度穩(wěn)定性。結(jié)果表明，供試品溶液在60min內(nèi)穩(wěn)定性良好，吸光度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）為1.51%。

3.2.3 重復(fù)性

準(zhǔn)確稱取同一批次烏腺金絲桃5份，按照“2.3.2”項(xiàng)下操作方法制備5份供試品溶液，精密吸取每份供試品溶液各5mL，置10mL 量瓶中，在505nm下測定吸光度，測得供試品溶液中總黃酮的平均含量為10.32%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）為1.87%。

3.2.4 回收率

精密稱取已知含量的烏腺金絲桃5份，每份0.5g，各加入5mL 對照品（濃度為：1.05 mg /mL），“2.3.2”項(xiàng)下方法制備5份加標(biāo)樣品溶液，分別測定吸光度，計算回收率。平均回收率為99.32%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）為1.79%。結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確度良好。

4 結(jié) 論

本文采用2種常用的分光光度法對烏腺金絲桃中黃酮類化合物含量進(jìn)行了測定，為進(jìn)一步明確烏腺金絲桃中的總黃酮類化合物提供依據(jù)。

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