觀察吡喹酮對(duì)血吸蟲(chóng)病肝纖維化的治療作用

孫躍安

（常德安鄉(xiāng)縣血防醫(yī)院，湖南 常德 415600）

觀察吡喹酮對(duì)血吸蟲(chóng)病肝纖維化的治療作用

孫躍安

（常德安鄉(xiāng)縣血防醫(yī)院，湖南 常德 415600）

目的 觀察吡喹酮對(duì)血吸蟲(chóng)病肝纖維化的治療作用。方法 2010 年 3 月至 9 月，選取健康狀況正常其相同的 60 只小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，將其隨機(jī)平均分為對(duì)照組、模型組以及治療組。對(duì)模型組和治療組的小鼠進(jìn)行腹部皮膚感染血吸蟲(chóng)誘導(dǎo)肝纖維化，治療組小鼠在感染第八周之后行吡喹酮治療。至第十六周測(cè)試三組小鼠血清中 AST 和 ALT；觀察三組小鼠各自的肝臟形態(tài)，以及蟲(chóng)卵肉芽腫的面積，同時(shí)采用HE 染色監(jiān)測(cè)肝纖維化病理組織的變化；測(cè)定肝臟Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)。結(jié)果 吡喹酮可以有效地降低被感染小鼠血清中 AST 和 ALT，以及小鼠的肝臟指數(shù)，可以改善小鼠肝臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)，降低蟲(chóng)卵肉芽腫的面積和肝臟Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)。結(jié)論 吡喹酮對(duì)血吸蟲(chóng)病肝纖維化有良好的治療效果。

吡喹酮；血吸蟲(chóng)；肝纖維化

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

昆明種小鼠60只、雄性、體質(zhì)量19～23g，健康狀況良好，實(shí)驗(yàn)前3d給予自由飲水和喂食。從本省血吸蟲(chóng)病防治站購(gòu)陽(yáng)性釘螺，在實(shí)驗(yàn)溫度24～28℃下，采用常規(guī)方法逸出尾蚴。武漢康銅實(shí)際醫(yī)藥有限公司提供的吡喹酮，純度高達(dá)99%。AST和ALT試劑盒由南京建成生物技術(shù)公司提供。Ⅰ、Ⅲ型膠原試劑盒由上海銳聰有限公司提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

選取健康狀況正常其相同的60只小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，將其隨機(jī)平均分為對(duì)照組、模型組以及治療組。血吸蟲(chóng)尾蚴感染方法：將小鼠仰臥置于鼠板上，除去小鼠下腹部一小塊皮毛，用生理鹽水擦拭除去皮毛的皮膚。在顯微鏡下放置30條尾蚴于蓋玻片上，將該蓋玻片貼于裸露皮膚處，持續(xù)時(shí)間約10min，小鼠裸露皮膚處呈現(xiàn)點(diǎn)狀充血表明血吸蟲(chóng)感染成功。

對(duì)照組：不予以感染血吸蟲(chóng)尾蚴，常規(guī)飼養(yǎng)16周；模型組：感染血吸蟲(chóng)尾蚴，常規(guī)飼養(yǎng)16周；治療組：感染血吸蟲(chóng)尾蚴，第8周后行吡喹酮治療2d，劑量500mg/（kg·d）、0.5mL/d，之后繼續(xù)常規(guī)飼養(yǎng)8周。

三組小鼠在第16周末，禁食16h，稱量其體質(zhì)量，取血液中血清，測(cè)定血清中的AST和ALT。頸椎脫臼處死小鼠，取肝組織中葉，使用4%多聚甲醛固定，在脫水、包埋、切片、HE染色、封固等一系列操作之后，在顯微鏡下觀察小鼠肝組織的病理變化。

1.3 觀察指標(biāo)

根據(jù)病情程度可將肝纖維化分為4級(jí)。0級(jí)：正常；Ⅰ級(jí)：膠原纖維包繞肉芽腫且插入其中；Ⅱ級(jí)：小葉間有少量的纖維化，匯管區(qū)有大量的纖維化；Ⅲ級(jí)：顯微組織較多地延伸到小葉之間。

?《魏書》卷六七《崔光傳》，中華書局1974 年版，第1487 頁(yè);同書卷六〇《韓顯宗傳》，第1342頁(yè)。

肝臟Ⅰ、Ⅲ級(jí)膠原表達(dá)：將肝臟免疫組化染色切片放置于物鏡20倍的視野下，在每組中隨機(jī)地選擇20各視野，采用自動(dòng)彩色圖像分析方法計(jì)算細(xì)胞內(nèi)棕黃色顆粒的平均吸光度值。

采用3.2分析軟件計(jì)算HE染色切片蟲(chóng)卵肉芽腫面積，并對(duì)每一個(gè)樣本連續(xù)切片計(jì)算的面積取平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本次所有研究資料均采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，計(jì)量資料采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示（χ—±s），計(jì)數(shù)資料采用t檢驗(yàn)，組間對(duì)比采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有顯著性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 觀察肝臟形態(tài)學(xué)

對(duì)照組小鼠的肝臟表面光滑、顏色紅潤(rùn)、質(zhì)地柔軟、包膜完整、邊緣銳利，并且沒(méi)有肝纖維化病理改變的現(xiàn)象。模型組小鼠肝臟腫大、顏色呈現(xiàn)暗褐色、質(zhì)脆、表面分布顆粒狀突起、包膜緊張。治療組小鼠肝臟大小和質(zhì)地相比較模型組有顯著的改善，肝臟呈現(xiàn)褐色，且表面分布顆粒狀突起。

2.2 吡喹酮對(duì)AST和ALT含量的影響

對(duì)照組、模型組和治療組的AST分別為（51±12）、（143± 12）、（109±13）IU/L；ALT分別為（77±13）、（159±17）、（135±10）IU/L，數(shù)據(jù)表明，小鼠被血吸蟲(chóng)感染后血清中的AST和ALT含量上升（P＜0.05），同時(shí)，治療組血清中的AST和ALT含量相比較于模型組偏低（P＜0.05）。

2.3 肝組織的病理變化

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組小鼠的肝組織沒(méi)有發(fā)生病理變化，而模型組和治療組肝組織中發(fā)現(xiàn)較多的慢性蟲(chóng)卵肉芽腫，蟲(chóng)卵包繞著梭形細(xì)胞和膠原纖維，同時(shí)也可以看到一部分急性的蟲(chóng)卵肉芽腫，匯管區(qū)存在較多的浸潤(rùn)炎性細(xì)胞；小靜脈旁邊膠原纖維束及肉芽腫向小葉周圍延伸。與模型組相比，治療組在病變范圍及病變程度上都較輕（P＜0.05）。根據(jù)肝纖維化評(píng)分可得，對(duì)照組20例均是0級(jí)；模型組Ⅰ級(jí)2例、Ⅱ級(jí)13例、Ⅲ級(jí)15例；治療組Ⅰ級(jí)6例、Ⅱ級(jí)19例、Ⅲ級(jí)5例。

2.4 經(jīng)吡喹酮治療后，小鼠肝臟內(nèi)蟲(chóng)卵肉芽腫面積變化情況

與模型組相比，治療組小鼠肝臟內(nèi)蟲(chóng)卵肉芽腫面積降低（P＜0.05）。

2.5 肝臟Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)的變化

Ⅰ、Ⅲ型膠原為密集片狀，且呈現(xiàn)棕黃色，其主要分布在匯管區(qū)和蟲(chóng)卵肉芽腫里面。對(duì)照組肝內(nèi)沒(méi)有膠原著色，Ⅰ型膠原表達(dá)0.08991 ±0.0031、Ⅲ型膠原表達(dá)0.0901±0.0021；模型組Ⅰ型膠原表達(dá)0.2391 ±0.0211、Ⅲ型膠原表達(dá)0.2109±0.0239，模型組的Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)與對(duì)照組相比有不同程度的增加（P＜0.05）。治療組Ⅰ型膠原表達(dá)0.2051±0.0216、Ⅲ型膠原表達(dá)0.1809±0.0223，與模型組相比偏低（P＜0.05）。

3 討 論

近年來(lái)，我國(guó)血吸蟲(chóng)病流行嚴(yán)重、分布廣泛、流行因素復(fù)雜，加上國(guó)家的退耕還湖政策，血吸蟲(chóng)感染率有所增加[1]。常見(jiàn)的血吸蟲(chóng)患者臨床上常表現(xiàn)為肝纖維化，逐步發(fā)展最終會(huì)引起肝硬化等。經(jīng)國(guó)內(nèi)外肝病學(xué)者臨床經(jīng)驗(yàn)論證，肝纖維可以逆轉(zhuǎn)，但是肝硬化卻不可逆轉(zhuǎn)，因此如何有效地防止血吸蟲(chóng)病引起的肝纖維化是當(dāng)前重要的研究課題[2]。根據(jù)本文實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)感染血吸蟲(chóng)尾蚴8周后，會(huì)出現(xiàn)肝纖維早期病變，同時(shí)開(kāi)始形成慢性的蟲(chóng)卵肉芽腫，此時(shí)患者及時(shí)接受治療可以有效地逆轉(zhuǎn)肝纖維化。

本文研究表明短期使用吡喹酮治療，可以縮小蟲(chóng)卵肉芽腫的面積，同時(shí)抑制血吸蟲(chóng)卵肉芽腫，這可能與吡喹酮促使肝組織可溶性蟲(chóng)卵抗原減少有密切的關(guān)系。為了明確吡喹酮是否能夠在血吸蟲(chóng)病肝纖維化早期抑制血吸蟲(chóng)病肝纖維化[3]，本文采取血吸蟲(chóng)感染第8周，在慢性蟲(chóng)卵肉芽腫及肝纖維化形成的早期行吡喹酮治療，之后連續(xù)觀察8周，最后實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，肝功能得到改善，與模型組相比，肝纖維化程度降低，這就表明了血吸蟲(chóng)病肝纖維化形成后采用吡喹酮進(jìn)行治療可以有效地減少肉芽腫的面積，降低肝纖維化程度，同時(shí)也表現(xiàn)出了獨(dú)立的抗肝纖維化的作用，但因?yàn)檫拎嵌唐谥委煟圆荒苤苯舆_(dá)到抑制肝纖維化的功效，綜上來(lái)看，主要還是抑制蟲(chóng)卵肉嚴(yán)重的產(chǎn)生來(lái)抑制肝纖維化[4]。

根據(jù)幾十年來(lái)的血吸蟲(chóng)病肝纖維化的防治實(shí)踐和科學(xué)研究，當(dāng)前制訂了防治血吸蟲(chóng)病的策略和措施，并提出了血吸蟲(chóng)病防治要因地制宜，綜合治理、科學(xué)防治的方針。吡喹酮作為其中的一種治療方法因吡喹酮的低廉及不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用，更進(jìn)一步研究吡喹酮的抗肝纖維化機(jī)制具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。

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[2]許永良,李洪軍,黃一心.吡喹酮對(duì)血吸蟲(chóng)卵肉芽腫與肝纖維化作用的研究Ⅱ吡喹酮對(duì)小鼠肺部血吸蟲(chóng)卵肉芽腫內(nèi)細(xì)胞的影響[J].中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志,2010,22(2):105-111.

[3]王俊杰,吳海燕,段小毛,等.吡喹酮治療血吸蟲(chóng)病肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究[J].山東醫(yī)藥,2010,50(32):34-36.

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