XS-800i血細胞分析儀顯微鏡復檢規則的建立與評價

孫 燕，鮮玉萍

（四川省成都市第六人民醫院檢驗科 610051）

近年來，隨著分析技術的不斷發展，血常規檢測的準確性、靈敏度和檢測效率均大大提高。同時，全自動血細胞分析儀的使用也使細胞數量及形態學分析的參數不斷增多，為臨床提供了更多的診療依據。但由于血細胞分析儀尚不具備識別細胞形態的能力，因此，在形態學檢查方面只能作為篩選的手段。對于可疑或異常的標本進行顯微鏡復檢很有必要［1］。目前五分類血細胞分析儀的檢測篩檢標準在國內外無統一規定，如果不在本室制定嚴格的復檢規則可能會導致錯誤的檢測報告發放及一些疾病的漏檢［2］。2005年國際血液學復檢專家組通過對13 289例血液標本進行分析后，推薦了41條自動血細胞分析和分類復檢規則［3］。但這只是通則，對于不同的實驗室并無針對性。因此，本科室根據本實驗室的具體情況及Sysmex XS-800i血細胞分析儀的性能特點，參考41條復檢規則，與臨床醫生討論，制訂了適合本實驗室的顯微鏡復檢規則，并對復檢規則進行了驗證，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 2011年9月11～20日共收集1 002例標本，均來自于本院住院及門診患者的靜脈血抗凝標本（抗凝劑為乙二胺四乙酸二鉀），用Sysmex XS-800i血細胞分析儀按常規進行血細胞檢測。

1.2 儀器與試劑 XS-800i全自動血細胞分析儀、原裝配套試劑、質控物均由日本Sysmex公司提供。顯微鏡為日本Olympus產品。

1.3 方法

1.3.1 人員培訓 根據《全國臨床檢驗操作規程》和《白細胞分類計數參考方法》中制定的操作程序（SOP）［4－5］，對參與人員進行培訓。儀器操作和結果判斷由1名有經驗的主管技師負責，涂片染色和鏡下檢查分別由另外4名主管技師負責，進行雙盲檢驗。

1.3.2 儀器準備 由Sysmex公司工程師對儀器進行校準，每天的室內質控監測必須在控。

1.3.3 檢測方法 每例標本制備1張血涂片，寫好編號，風干后用瑞氏染液進行染色，保證涂片和染色良好。由有經驗的檢驗人員按培訓方法進行鏡檢。內容包括：（1）白細胞（WBC）分類計數每人每張血涂片分類200個 WBC，并觀察形態；（2）WBC和血小板（PLT）數量估計；（3）紅細胞（RBC）及PLT 的大小、形態；（4）有無巨大PLT及PLT聚集；（5）有無有核RBC及血液寄生蟲。

2 結 果

2.1 復檢規則建立的依據 利用Sysmex XS-800i血細胞分析儀自身的報警系統，根據儀器報警提示對 WBC、RBC、PLT的數量異常和形態異常進行判斷，參照“國際41條規則”，與臨床醫生討論，結合本科室工作量大的具體情況，制訂出復檢規則17條。

2.2 判斷標準

2.2.1 儀器結果陽性判斷標準 儀器檢測結果符合17條顯微鏡復檢規則中任一條即為陽性。

2.2.2 涂片鏡檢陽性判斷標準 由國內血液學復檢專家小組將國際制定的12條鏡檢陽性規則進一步量化完善，統一了評估標準［6］。（1）RBC明顯大小不均（大小相差1倍以上），中空淡染（大于1／2淡染區的RBC＞30% ）；（2）巨大PLT＞15%；（3）見到PLT聚集；（4）有Dohle小體的粒細胞大于1%；（5）有中毒顆粒的中性粒細胞大于10%；（6）空泡變性粒細胞大于10% ；（7）原始和幼稚細胞大于或等于1% ；（8）早幼和中幼粒細胞大于或等于1% ；（9）晚幼粒細胞大于2%；（10）異型淋巴細胞大于5% ；（11）NRBC大于或等于1%；（12）漿細胞大于或等于1%。鏡檢結果符合上述12條中任何一條即為陽性。

2.2.3 真陽性、假陽性及真陰性、假陰性判斷標準 真陽性為儀器及鏡檢結果均為陽性；假陽性為儀器結果為陽性，鏡檢結果為陰性；真陰性為儀器及鏡檢結果均為陰性；假陰性為儀器結果為陰性，鏡檢結果為陽性。

2.3 驗證

2.3.1 1 002例標本的驗證情況 根據上述判斷標準，將人工顯微鏡鏡檢結果與儀器報警信息進行比較，1 002例標本中真陽性率6.7%（67／1 002），假陽性率15.7%（157／1 002），真陰性率75.1%（753／1 002），假陰性率2.5%（25／1 002）。

2.3.2 1 002例標本中真陽性、假陽性情況分析 1 002例標本中需復檢標本數為224例，將224例中各項的真陽性與假陽性進行了分類分析結果見表1。

2.3.3 17條復檢規則在實際工作中的應用情況 2011年10月至2012年1月本科室每月的復檢率分別為24.6%、21.9%、23.5%、21.3%，4個月的平均復檢率為22.8%，與驗證結果相符。

3 討 論

為了彌補血細胞分析儀對細胞形態識別能力的不足，需要建立適合本實驗室的顯微鏡復檢規則，并進行必要的顯微鏡復檢。復檢規則建立后，需對其科學性及實用性進行驗證。本實驗室制訂Sysmex XS-800i全自動血細胞分析儀17條顯微鏡復檢規則遵循的原則：（1）根據該儀器對細胞形態的識別能力；（2）該儀器均能提供復檢規則涉及的參數；（3）復檢范圍涵蓋了儀器的所有參數及形態學特征；（4）在確保病理細胞不漏檢，保證篩選質量的基礎上盡量降低復檢率，使患者能在較短的時間內獲得正確的檢驗報告；（5）假陰性是制定復檢規則的關鍵參數，具有診斷意義的重要參數不能出現假陰性，其他參數的假陰性率應小于5%，國際血液學復審協作組認為5%是為保證患者檢測結果安全性的最大可接受的假陰性率；（6）在較低假陰性率的前提下降低假陽性率，假陽性率過高會增加工作量，延遲報告發放時間；（7）白血病患者及臨床醫生提出閱片需求的必須鏡檢［7］。疾病的正確診斷需要了解患者的病史，進行體格檢查及實驗室檢查。無論儀器有無異常提示，只要臨床醫生要求人工鏡檢，就必須進行。涂片鏡檢可確切反映白血病細胞特征，在白血病診治過程中起關鍵作用，因此，對白血病患者的標本必須進行鏡檢。

按照本實驗室制訂的復檢規則，通過1 002例標本進行驗證，總符合率為81.8%（真陽性加真陰性）。其中假陰性25例。2例幼稚細胞漏檢，但并非白血病患者，該病例均為癌癥化療患者，白細胞總數正常，分類200個白細胞中中幼粒細胞只見到2個（僅占1% ），處在早幼粒、中幼粒大于或等于1%鏡檢陽性臨界值附近。出現這種情況與人工鏡檢分類計數的變異率有關，比例越低，變異越大，而未見到其他幼稚細胞。另外在1 002例標本中2例白血病復檢均為陽性，未漏檢。

復檢以規則統計，血小板（規則13、15）復檢率最高，占總復檢率的41.1%，但其假陽性率高達71.7%。其主要原因可能是乙二胺四乙酸抗凝劑和靜脈采血過程欠規范造成。白細胞報警（規則14））次之，占總復檢率32.1%；白細胞（規則2～7）第3，約占總復檢率22.8%，后二者假陽率雖然分別高達81.9%、52.9%，但為了防止白血病幼稚細胞漏檢是必要的。其他規則雖然復檢率低，但復檢陽性率高，其復檢尤為重要。

按照上述復檢規則，在這次驗證過程中，儀器檢測結果需要復檢的有224例，復檢率為22.4%，后經本科室使用4個月統計，復檢率分別為24.6%、21.9% 、23.5% 、21.3%；平均復檢率為22.8%。通過1 002例標本進行分析，對該17條復檢規則進行驗證，經統計分析得出真陽性率為6.7%，假陽性率為15.7%，真陰性率為75.1%，假陰性2.5%。2.5%的假陰性率符合國際血液學復審協作組關于假陰性率小于5.0%的規定，22.4% 的復檢率是合理的。

［1］ 彭黎明，邱廣斌，趙威，等.自動血細胞計數和白細胞分類計數的復檢規則［J］.中華檢驗醫學雜志，2007，30（4）：377.

［2］ 孫芾，王厚芳，于俊峰，等.血細胞顯微鏡復檢標準的制定及臨床應用［J］.中華檢驗醫學雜志，2005，28（2）：155-157.

［3］ Barnes PW，McFadden SL，Machin SJ，et al.The International Consensus Group for Hematology Review：suggested criteria for action following automated CBC and WBC diferential analysis［J］.Lab Hematol，2005，11（1）：83-90.

［4］ 葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程［M］.3版.南京：東南大學出版社，2006：133.

［5］ 中華人民共和國衛生部.白細胞分類計數參考方法［M］.北京：人民衛生出版社，2005：4.

［6］ 中華檢驗醫學雜志編輯委員會.全國血液學復檢專家小組工作會議紀要暨血細胞自動計數復檢標準釋義［J］.中華檢驗醫學雜志，2007，30（3）：380.

［7］ 叢玉隆，王昌富，樂家新.血細胞自動化分析后血涂片復審標準制定的原則與步驟［J］.中華檢驗醫學雜志，2008，31（6）：731.