C反應蛋白方法學相關性分析

梁丹荔

（廣西壯族自治區永福縣中醫院檢驗科 541800）

C反應蛋白（creation protein，CRP）是機體一種重要的急性期蛋白，由肝臟合成并釋放入血液，在健康人血液中含量極微，當機體細菌感染和組織損傷時，CRP的濃度顯著增高，因而是體內各種炎癥和組織損傷的敏感性指標［1］。近年來隨著越來越多的檢測方法相繼問世，CRP的測定已廣泛應用于臨床疾病的早期診斷和鑒別診斷［2－3］。本檢驗科近3年來也開展了CRP檢測，并且根據不同需要開展了兩種方法學的檢測，深受臨床醫生歡迎。現對本科室開展的免疫比濁法（使用全自動生化分析儀）和免疫熒光干式定量法（使用免疫熒光分析儀）進行相關性探討，報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 收集本院2012年3～4月門診和住院的125例做CRP檢測患者的新鮮血清，其中男73例，女52例，年齡2～80歲，取同份血清用兩種方法測定CRP濃度。

1.2 儀器與方法

1.2.1 免疫比濁法 試劑1（R1）甘氨酸緩沖液，試劑2（R2）兔抗人C反應蛋白致敏膠乳顆粒。校準品：為以混合人血清為基質的液體形式的C反應蛋白校準品1～5，濃度分別為5、20、40、160、320mg／L。C反應蛋白校準品賦值的計量學溯源性為IRMMCRM470。在長春迪瑞CS-600型全自動生化分析儀進行檢測。其反應類型：兩點終點法反應，反應方向：吸光度上升的反應，溫度37℃，光經1cm、主波長570nm。

1.2.2 免疫熒光干式定量法 將檢測緩沖液和血液樣本在檢測瓶中進行混合，緩沖液中的熒光標記抗CRP抗體和血液中的CRP抗原結合形成抗原抗體復合物。當混合樣本被放到反應板的樣本位上并通過毛細血管作用擴散到硝化纖維基質的測試帶上，該復合物被檢測帶上的抗CRP抗體所捕獲。因此，血液樣品的CRP越多，測試帶上的復合物聚集得越多。熒光抗體的信號強度反映了被捕獲的CRP的數量，經過i-CHROMA Reader免疫熒光分析儀的處理，能夠反映出血液樣本中CRP的濃度。試劑盒：（1）反應板 25／50／100／200人份／盒；（2）檢測緩沖液25／50／100／200管／盒（每管500μL）；（3）取樣器25／50／100／200個／盒；（4）ID芯片1個／盒。反應板含有固化了的鼠抗人CRP單克隆抗體的檢測線和固化了兔IgG的控制線。預分裝在管子里的檢測緩沖液含有熒光標記的抗人CRP（鼠單克隆），熒光標記的抗兔IgG的凝膠作為穩定劑，疊氮化鈉。試劑準備 ：從冰箱中取出檢測緩沖液后需要在室溫環境中放置10min，使其恢復至室溫后方可使用。

2 結 果

對125例患者的同分血清作CRP的免疫比濁法和免疫熒光干式定量法的測定結果，進行線性回歸分析，以免疫比濁法結果為橫坐標X，免疫熒光干式定量法為縱坐標Y（檢測范圍0.1～200mg／L），結果顯示：Y＝1.12 X－0.53（r＝0.92，P＜0.05），證明兩種方法具有良好相關性。

3 討 論

C反應蛋白是一種急性時相蛋白，在急性和慢性感染、心肌梗死、創傷、腫瘤時濃度急劇上升，檢測CRP對臨床診斷具有重要參考價值［4］，現在越來越受到臨床醫生的關注。

免疫比濁法的檢測原理：C反應蛋白試劑是大小均一的聚苯乙烯乳膠顆粒懸液，顆粒表面包被有兔抗人C反應蛋白抗體，樣品中C反應蛋白與之結合后，立即發生凝集反應，并產生濁度改變。該濁度與樣品中C反應蛋白濃度成正比，通過在570nm處測定吸光度的變化值，即可測得樣品中C反應蛋白的濃度。在全自動生化分析儀上檢測，檢測結果恒定，較適合大樣本量的工作。而免疫熒光干式定量法的工作原理為：免疫熒光分析儀使用激光作為激發光源，在檢測中熒光染料的發射光被收集并被轉化為電信號，電信號的強弱和代表熒光染料分子的斑點的數量嚴格相關。當經緩沖稀釋后的檢測樣本加入到檢測板后，檢測板被插入免疫熒光分析儀中，被分析物的濃度通過一個預編程的定標過程被檢測出來，所以熒光免疫分析法測定快速簡便，更適合單一的標本檢測。由于這兩種方法學具有高度的相關性，給檢測工作帶來很大的便捷，給臨床提供了很好的服務。

［1］ 李瑤，劉潔，羅春燕，等.C反應蛋白在兒科感染性疾病中的臨床應用［J］.云南醫藥，2009，30（1）：28-29.

［2］ Duelos TW.Function of C-reactive Protein［J］.Ann Med，2007，32（11）：274-278.

［3］ Volanakis JE.Humam C-reactive Protein：expression，Strix-ture，and function［J］.Mol Lmmuno，2006，38（10）：189-197.

［4］ 王慧，羅煒，陳濤.免疫透射比濁法CRP檢測試劑盒的性能評價［J］.中國熱帶醫學，2006，6（8）：1479-1480.