血清高遷移率族蛋白B1檢測在T3N0M0期前列腺癌冷凍治療后復發中的意義

胡 萍，司同國，郭 志

前列腺癌是老年男性常見的泌尿系惡性腫瘤，近年發病率直線上升且呈年輕化趨勢[1]。經皮穿刺前列腺癌氬氦冷凍消融治療具備操作簡單、微創、療效確切等優點，由根治術或放療后復發的補救治療手段發展為早期局限性前列腺癌的一線治療手段[2]。與放射治療、外科手術治療一樣，前列腺癌氬氦冷凍治療亦有局部復發的風險，而T3期前列腺癌患者更是局部復發的高危人群。早期發現復發的前列腺癌患者，及時予以補救治療，可顯著提高生存率。目前，常用血清前列腺特異抗原（prostatespecific antigen，PSA）進行隨訪指導穿刺病理活檢，但其對于局部復發的診斷敏感度偏低，探討新的血清標志物是目前研究的熱點和難點。多項研究發現高遷移率族蛋白B1（high-mobility group box 1 protein，HMGB1）在前列腺癌中呈高表達，與腫瘤形成、進展和轉移相關[3]。同時，血清HMGB1對于腫瘤的診斷價值已在結腸癌、宮頸癌等多種腫瘤中進行研究。本文檢測前列腺癌氬氦冷凍治療的T3期患者術前血清HMGB1和PSA水平，結合臨床檢測疾病復發的金標準，評價HMGB1預測前列腺癌患者治療后復發的臨床價值。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

收集2005年1月—2011年6月在我科診治的T3N0M0前列腺癌患者65例，年齡65～80歲，中位年齡72歲。所有患者均經前列腺穿刺活檢確診，病理均為腺泡癌，Gleason評分5～9分，術前均行前列腺MRI檢查、全身骨掃描、胸部CT檢查，排除其他合并腫瘤，術前均未接受內分泌及其他治療。選擇同期30例前列腺良性增生門診患者作為對照組，取血48 h內不做直腸指檢。兩組患者年齡分布具可比性（P ＞ 0.05）。

1.2 方法

1.2.1 血清HMGB1檢測 所有患者術前晨起抽取空腹靜脈血 5 ml，1 h 內離心（300 g× 5 min，5000 g×5 min），去除細胞成分取上清，等量分裝置-80℃超低溫冰箱保存。采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA，R&D公司）檢測血清HMGB1水平。板條室溫平衡20 min后使用，標準品孔各加不同濃度標準品50 μl；樣本孔加待測樣本10 μl（樣本室溫平衡20 min后進行檢測），空白孔不加樣本。除空白孔，各孔加辣根過氧化物酶標記抗體100 μl，封板膜封孔，置37℃恒溫箱中溫育60 min；棄液體，洗板、拍干（重復 5次）；加底物 50 μl于 37℃避光孵育 15 min；各孔加終止液，15 min內于波長450 nm處測吸光度（A）值，通過線性回歸方程計算樣本濃度。實驗重復3次取均值。

1.2.2 冷凍治療 采用美國Endocare公司氬氦冷凍治療設備，低位硬膜外麻醉或全身麻醉下取膀胱截石位，留置三腔氣囊導尿管，38～39℃生理鹽水常壓下循環保護尿道。BK1101型超聲雙平面直腸探頭，軸面、矢狀面導引下定位穿刺，根據腫瘤大小，選擇2～6個2 mm的冷凍器。冷凍消融治療始于腹側，依次向背側進行。根據冰球擴展速度及范圍，調整輸出功率，控制溫度在-45～-80℃，持續18～20 min后氦氣迅速復溫，完成2個循環的冷凍-復溫治療。操作均在超聲、心電監護下進行。術后局部壓迫穿刺點10～15 min；維持尿道循環灌注大于30 min，持續膀胱沖洗大于24 h，留置導尿管14 d。

1.2.3 隨訪 所有前列腺癌患者，術后每月定期復查 PSA，若 PSA ＞0.5 μg/ml，1周內行 MRI檢查及超聲引導下穿刺組織病理檢查。對PSA＜0.5 μg/ml患者，術后1、3、6個月行前列腺MRI檢查，影像學異常者行病理穿刺活檢。對于PSA、MRI或CT結果無異常患者，于術后12個月行超聲引導下穿刺活檢病理檢查。術后病理活檢證實腫瘤細胞存活者，定義為術后局部復發。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 兩組術前血清HMGB1、PSA檢測結果

術前血清HMGB1水平在前列腺癌組為（55.28±29.37）ng/ml，明顯高于對照組的（34.61±13.15）ng/ml，組間差異有統計學意義（P=0.004）；對照組和前列腺癌組術前PSA分別為（3.65±1.95）μg/L和（26.7±8.3）μg/L，兩組間差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 冷凍治療后臨床隨訪

65例前列腺癌患者冷凍術后3年內局部復發15例，遠處轉移4例，無進展生存46例。局部復發組中 11例為 PSA 生化復發（PSA ＞ 0.5 μg/L），4例PSA生化無復發而活檢證實局部復發；遠處轉移組4例患者為MRI及全身骨顯像提示盆腔淋巴結及遠處轉移（無原位復發）；無進展組中2例出現非特異性PSA升高，活檢、MRI、腹部CT及全身骨顯像均未見原位復發及明顯轉移灶。

2.3 HMGB1在前列腺癌各亞組患者中的表達水平

將65例前列腺癌患者按治療后有無復發分為局部復發、遠處轉移和無進展生存亞組。在無進展生存組，患者術前血清HMGB1平均值為（55.49±7.12）ng/ml。在局部復發組，患者血清HMGB1平均值為（73.13±7.89）ng/ml，其中 11例 PSA 生化復發患者術前血清HMGB1平均值為（81.91±17.67）ng/ml，4例PSA生化無復發患者血清HMGB1均值為（62.75±5.87）ng/ml。在遠處轉移組，患者血清HMGB1平均值為（94.23±17.91）ng/ml。 局部復發組和遠處轉移組術前血清HMGB1顯著高于無進展生存組（P=0.003），而遠處轉移組亦明顯高于局部復發組，差異有統計學意義（P＜0.001）。局部復發組中4例局部復發而PSA生化無復發患者的術前血清HMGB1水平亦明顯高于無進展生存組（P＜0.001）。無進展生存組中2例術后PSA非特異性升高患者術前血清HMGB1平均值為50.04 ng/ml。

3 討論

T3期前列腺癌具有獨特的生物學特性，具有潛在治愈性，對這部分不適合行外科根治術治療的患者采取前列腺癌氬氦冷凍治療，可達到與根治術類似的治療效果。但是，由于T3期前列腺癌患者病理Gleason評分較高，有較高的復發和遠處轉移風險。對于前列腺癌局部氬氦冷凍治療術后復發的患者，再次補救治療仍有較好的療效。因此，對于經冷凍治療后復發的前列腺癌患者，早期診斷至關重要[4-5]。目前，血清PSA、骨 ECT、MRI、強化 CT等為常用的局部復發或遠處轉移的診斷方法，對于隨訪異常患者，最終可經穿刺病理活檢確診。血清PSA雖然在前列腺癌的診斷、監測和隨訪中應用廣泛，但其敏感度高、特異度低[6]。而且，PSA對于前列腺癌的分期及有無遠處轉移提示意義不大。美國腫瘤放療協會（ASTRO）建議前列腺癌放療后前2年每3～4個月檢測1次，以后每6個月1次，PSA降至最低點，連續檢測3次逐漸升高，將復發時間定為最低點至第1次升高的中點[7]；而新的Phoenix生化復發定義為術后PSA水平超過PSA谷值加2。通常，臨床中將PSA生化復發以0.5 ng/ml為標準。在我國，前列腺癌患者多數確診時即為中晚期，局部治療后復發患者很多PSA水平并未升高。既往報道，血清PSA對于前列腺癌局部治療后復發診斷的敏感度和特異度分別為72%和83%[7]。因此，單一血清PSA對于監測前列腺癌復發價值有限，需要探討新的腫瘤標志物。

HMGB1是一種分布廣泛、進化高度保守的非組蛋白核蛋白，因在瓊脂糖凝膠電泳中高遷移率而得名。研究發現，壞死癌癥細胞分泌到細胞外的HMGB1可能有助于癌細胞的存活、增殖和侵襲[8]。HMGB1在多種人類惡性腫瘤和動物模型中呈過表達，盡管其與腫瘤相互作用的具體機制尚不清楚，但其作為預測腫瘤侵襲性和預后的標志物已在多種腫瘤的免疫組化和免疫測定過程得到很好的研究，包括胃癌、結腸癌、乳腺癌、宮頸癌等[9-10]。 最近，HMGB1在前列腺癌中的作用受到廣泛關注，發現雄激素剝脫可導致前列腺癌細胞分泌HMGB1[3]。有研究報道HMGB1過表達預示前列腺癌根治術后預后差[11]。該研究亦發現，在前列腺癌細胞系中HMGB1高表達，同時對168例前列腺癌切除標本進行免疫組化染色，發現HMGB1陽性染色與生化無復發存活差明顯相關，同時是根治術后生化無復發存活的獨立預測因子。

對于血清HMGB1表達在前列腺癌患者中的診斷意義目前尚少見報道。本研究中，前列腺癌組患者血清HMGB1比對照組明顯升高。此外，局部復發及遠處轉移者血清HMGB1明顯升高，提示HMGB1可能與腫瘤的形成、轉移相關，而HMGB1通過何種機制促進腫瘤轉移，尚需進一步研究。此外，4例術后PSA隨訪陰性的局部復發患者，血清HMGB1明顯升高。同時，2例PSA非特異性升高的未復發患者，血清HMGB1未見升高，提示HMGB1在預測前列腺癌冷凍治療后復發方面可彌補PSA隨訪的不足。因此，在一定程度上血清HMGB1可作為一種新的腫瘤標志物，作為局部治療后高復發患者的篩查指標。由于本研究樣本量較小，存在一定局限性，要進一步探討HMGB1與前列腺癌預后的關系還需要大樣本的臨床對照研究。

[1]Tanaka N，Fujimoto K，Hirayama A，et al.Trends of the primary therapy for patients with prostate Cancer in Nara urooncological research group（NUORG）： a comparison between the CaPSURE data and the NUORG data [J].Jpn J Clin Oncol，2010，40：588-592.

[2]Lian H，Guo H，Gan W，et al.Cryosurgery as primary treatment for localized prostate Cancer [J].Int Urol Nephrol，2011，43：1089-1094.

[3]Ishiguro H，Nakaigawa N，Miyoshi Y，et al.Receptor for advanced glycation end products（RAGE）and its ligand，amphoterin are overexpressed and associated with prostate Cancer development[J].Prostate，2005，64： 92-100.

[4]郭 志.關注冷凍消融治療前列腺癌的若干問題 [J].中華醫學雜志，2010，84：2959-2961.

[5]郭 志，王海濤，邢文閣，等.冷凍消融治療T3N0M0期前列腺癌的初步臨床觀察 [J].中華醫學雜志，2004，90：2815-2819.

[6]朱 剛，劉 明，萬 奔，等.早期前列腺癌的診斷和治療[J].中華男科學雜志，2005，11： 693-696.

[7]Kuban DA，Levy LB，Potters L，et al.Comparison of biochemical failure definitions for permanent prostate brachytherapy [J].Int J Radiat Oncol Biol Phys，2006，65： 1487-1493.

[8]Kuniyasu H，Chihara Y，Kondo H，et al.Amphoterin induction in prostatic stromal cells by androgen deprivation is associated with metastatic prostate Cancer[J].Oncol Rep，2003，10： 1863-1868.

[9]Chen J，Liu X，Zhang J，et al.Targeting HMGB1 inhibits ovarian Cancer growth and metastasis by lentivirus-mediated RNA interference[J]J Cell Physiol，2012，227： 3629-3638.

[10]Lee H，Song M，Shin N，et al.Diagnostic significance of serum HMGB1 in colorectal carcinomas [J].PLoS One，2012，7：e34318.

[11]Li T，Gui Y，Yuan T，et al.Overexpression of high mobility group box 1 with poor prognosis in patients after radical prostatectomy[J].BJU Int，2012，110： e1125-1130.