LC-MS分析早薹對白花前胡根化學成分的影響

陳存武， 韓邦興

（皖西學院 生物與制藥工程學院/植物細胞工程安徽省工程技術研究中心，安徽 六安237012）

前胡為傳統中藥，始載《名醫別錄》，列為中品[1]。中國藥典規定:中藥前胡唯一來源于傘形科前胡屬植物白花前胡Peucedanum praeruptorum Dunn的根，具宣散風熱，降氣祛痰之功[2]。主治風熱感冒、上呼吸道感染、咳喘、痰多等證。近年來隨著市場需求的增大，白花前胡野生資源日漸枯竭，已開展野生變家種工作[3]。白花前胡為多年生一次性開花植物。野生白花前胡生長3年以上抽薹開花，栽培者第一年進行營養生長，第二年抽薹開花[4]。白花前胡抽薹后根木質化，俗稱 “公前胡”，“公前胡”不能藥用[5]。因此，現在商品前胡都當年采收[6]。雖然有學者應用HPLC/MS/MS技術鑒定了中藥白花前胡成分[7]，但尚無進行早薹對白花前胡根的化學成分影響的研究。作者在前期應用HS-GC-MS技術分析開花對白花前胡揮發性化學成分影響的基礎上[8]，通過液相色譜質譜聯用（LC-MS）技術分析早薹對白花前胡非揮發性化學成分的影響，以期闡明早薹前胡不能藥用的原因，為臨床應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

早薹與未早薹白花前胡采自安徽省寧國市同一地塊，經安徽中醫學院王德群教授鑒定為傘形科植物白花前胡P.praeruptorum Dunn的根。

1.2 實驗儀器

日本島津LC-MS 2010 EV單四極桿質譜檢測系統，SPD 10 A檢測器。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品溶液制備 精密稱取白花前胡根粉末0.5 g，置具塞錐形瓶中；精密加入三氯甲烷25 mL，稱定質量，超聲處理10 min，放置5 min后，再稱定其質量，用三氯甲烷補足減失的質量，搖勻，濾過；精密量取濾液5 mL，蒸干，蒸干后殘留物加甲醇溶解20 min后轉移至25 mL的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試樣品溶液[2]。

1.3.2 液相色譜條件 流動相為v（甲醇）∶v（水）=75∶25，色譜柱為 KF-C18（4.6×150 nm，7 μm），檢測波長為321 nm，體積流量1.0 mL/min，柱溫為室溫[2]。

1.3.3 質譜條件 液質聯用時，進質譜儀的體積流量為400 μL/min。根據預實驗結果，ESI采用陽離子模式，質譜條件如下:鞘氣壓力60 arb，輔助氣壓力20 arb，毛細管溫度280℃，毛細管電壓4.5 V[7]。

2 結果與分析

2.1 LC-MS圖譜分析

白花前胡樣品在上述分析條件下得到HPLC和TIC圖，如圖1所示。根據質譜圖數據、各峰保留時間，以及文獻資料[7]比對來確定各化合物，峰面積歸一法計算各化合物相對含量，見表1。

由表1可知，早薹前后白花前胡主要成分種類沒有發生變化，均含Pd-Ⅰb、PeucedanumarinⅡ、白花前胡甲素、PeucedanumarinⅠ、白花前胡丁素、Pareruptorin E等6種成分，各峰面積之和占總峰面積92%左右，其中，未早薹野生前胡高達97.9%。

圖1 白花前胡HPLC和TIC圖Fig.1 HPLC and TIC of P.praeruptorum

表1 白花前胡部分峰保留時間、相對含量及鑒定的化合物Table 1 reserve time and conposition of Peucedanum praeruptorum

2.2 各成分之間的比例關系與分析

各前胡樣品分別以Pd-Ⅰb的相對含量為1，則上述6種成分之間的含量比例關系如表2所示。可以看出，早薹使得各成分之間的比例關系發生了明顯變化。白花前胡甲素、PeucedanumarinⅠ和Pareruptorin E比例均下降，白花前胡丁素的比例上升。

Pd-Ⅰb和白花前胡甲素的比例 （下同，均以Pd-Ⅰb為1）由栽培未早薹者的1∶32下降到早薹者的1∶18，由野生未早薹者的1∶62下降到早薹者的1∶36；同時，野生樣品的白花前胡甲素的平均比例為1∶49，遠高于栽培者的 1∶25。

白花前胡丁素由栽培未早薹者的1∶16上升到早薹者的1∶34，由野生未早薹者的1∶20上升到早薹者的1∶46；同時，野生樣品的白花前胡甲素的平均比例為 1∶33，高于栽培者的 1∶25。

PeucedanumarinⅠ和Pareruptorin E與白花前胡甲素有類似的比例變化規律，但變化不甚劇烈。

表2 白花前胡部分成分的比例Table 2 Chemical composition of P.praeruptorum

3 結語

實驗中以HPLC-MS技術分析了早薹對前胡化學成分的影響，并探討了野生與栽培前胡的化學成分含量比例差異。研究結果表明:所有前胡樣品均含 Pd-Ⅰb、PeucedanumarinⅡ、白花前胡甲素、PeucedanumarinⅠ、白花前胡丁素、Pareruptorin E等6種主要成分，但各成分之間的比例關系發生了顯著變化。

白花前胡甲素和白花前胡丁素在前胡早薹前后的比例發生顯著變化，早薹前后兩者的比例關系一降一升，且變化幅度都在2倍左右。目前普遍認為前胡早薹后根部木質化，不能藥用[5]，盡管目前對白花前胡進行了很多研究[6-9]，但由于前胡藥效物質基礎不甚明確[10]，故亦無法闡明早薹前胡不能藥用的合理性及科學根據。本實驗結果提示，白花前胡早薹前后主要成分之間的比例關系變化可能是早薹前胡不能藥用的原因。

從本實驗結果還可看出，野生白花前胡的白花前胡甲素和白花前胡丁素含量比例均高于栽培者；PeucedanumarinⅡ、PeucedanumarinⅠ、Pareruptorin E的含量比例也發生了一定的變化。現多認為野生前胡質量好于栽培者，本實驗結果亦提示，野生前胡質量與栽培者有異，其原因可能也在于前胡主要成分之間的比例關系發生改變[10]。

藥用植物在生長發育不同時期，活性成分具有高度動態性[11]，中藥的藥效與活性成分動態變化密切相關。因此，下一步研究重點將放在前胡成分之間的比例關系變化與其藥效的相關性上，以期從成分組合動態變化的角度闡釋前胡的藥效物質基礎、早薹前胡不宜藥用的更進一步科學說明，以及野生前胡質量優良的原因。

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