慢性乙肝患者體內HDL和HBV DNA水平相互關系的研究

張 琳

（鄭州大學第五附屬醫院 檢驗科，河南 鄭州 450052）

乙肝的感染可以分為急性感染和慢性感染。慢性乙肝感染引起氧化應激繼而引起肝炎，最終引起肝纖維化、肝硬化和肝癌。雖然宿主自身的因素被認定為在其中起到關鍵作用，但是決定病毒感染復制和結局的因素并不是完全清楚［1］。在這些因素中，高密度脂蛋白（HDL）具有一定的生物活性，包括抗氧化和抗炎癥作用，都在非特異性免疫反應中起到實質性的作用［2］。慢性乙肝患者血清HDL的濃度和促炎反應及肝損傷的進程呈負相關［3］。HDL在慢性乙肝引起的肝損傷中的作用還不是很清楚。為了證明HDL在治療慢性乙肝中的作用及其作用機制，我們檢測了血清中HBV DNA的復制水平和HDL的濃度及一些相關指標，以揭示HDL影響HBV DNA復制水平的機制。

1 對象與方法

1.1 研究對象 152例成年患者，男性83例，女性69例，年齡為19－75歲，平均年齡40.3歲。乙肝表面抗原和HBV DNA陽性，肝功能異常（ALT＞40 mmol／L），e抗原、HCV、HDV 和 HIV抗體均為陰性，均未患肝硬化、肝癌、心血管疾病、腫瘤和糖尿病。所有人均無治療史。

1.2 實驗方法

1.2.1 血清ALT、HDL水平檢測 患者夜里禁食12 h，早晨抽取患者靜脈血3 ml，分離血清，檢測血清中ALT、HDL水平，檢測儀器為美國貝克曼DXC800全自動生化分析儀，試劑由美國貝克曼公司提供，嚴格按照試劑說明書進行操作。

1.2.2 血清HBV－DNA檢測 早晨空腹抽取患者靜脈血，分離血清，應用熒光定量PCR的方法檢測患者血清中HBV DNA的水平，檢測儀器為美國ABI公司7500型熒光定量PCR儀，檢測試劑由廣州達安基因診斷試劑有限公司提供，嚴格按照試劑說明書進行操作。

1.2.3 血清IL－10水平檢測 早晨空腹抽取患者靜脈血，分離血清，應用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）的方法檢測血清IL－10的水平，IL－10 ELISA檢測試劑盒由深圳晶美生物有限公司提供，酶標儀為奧地利CliniBio 128型酶標儀，嚴格按照試劑說明書進行操作。

1.2.4 外周血中CD4＋CD25＋T細胞水平的檢測取患者外周全血2 ml，密度梯度法分離單個核細胞，并調整細胞濃度為2×106／ml，加入FITC標記的抗CD3抗體、PE標記的抗CD4抗體及APC標記的抗CD25抗體，染色30 min，用流式細胞儀進行檢測CD4＋CD25＋T細胞的濃度，儀器為美國BD FACS Calibur流式細胞儀，流式抗體由美國BD公司提供。

1.3 統計學處理 結果用均數±標準差（±s）表示，數據采用SPSS15.0統計軟件行分析，組間比較采用方差分析，HDL、HBV－DNA、IL－10及 CD4＋CD25＋T細胞水平相關性分析采用Pearson相關性分析，P＜0.05作為判定統計學差異的標準。

2 結果

2.1 HBV DNA水平與HDL水平相關關系分析根據HBV DNA的檢測結果，將患者分為A、B和C三組，HBV DNA水平＜1×103IU／ml定為A組，HBV DNA水平在1×103～1×106為B組，HBV DNA＞1×106為C組。各組檢測結果如表1所示。由表1的結果可以看到，隨著HBV DNA水平的不斷增高，HDL水平則逐漸降低，A組與B組、A組與C組相比較均具有統計學差異（P值均＜0.05），但是B組與C組相比較沒有統計學差異（P＝0.062）。HBV DNA水平與HDL做相關性分析可知，兩者呈現負相關關系（r＝－0.63，P＜0.05）。

表1 HBV DNA、HDL、IL－10及CD4＋CD25＋T細胞水平檢測結果

2.2 HBV DNA、HDL與IL－10、CD4＋CD25＋T細胞水平水平相關關系分析 如表1所示，隨著HBV DNA水平的不斷增高，IL－10的水平則逐漸降低，A組與B組、A組與C組及B組與C組之間相比較均具有統計學差異（P值均＜0.05）。HBV DNA水平與IL－10水平做相關性分析可知，兩者呈現負相關關系（r＝－0.59，P＜0.05）。

如表1所示，隨著HBV DNA水平的不斷增高，CD4＋CD25＋T細胞的水平則逐漸降低，A組與B組、A組與C組及B組與C組之間相比較均具有統計學差異（P值均＜0.05）。HBV DNA水平與CD4＋CD25＋T細胞水平做相關性分析可知，兩者呈現負相關關系（r＝－0.52，P＜0.05）。

此外，HDL與IL－10水平做相關性分析可知，兩者呈現正相關關系（r＝0.72，P＜0.05）。HDL與CD4＋CD25＋T細胞水平做相關性分析可知，兩者呈現正相關關系（r＝0.55，P＜0.05）。

3 討論

HBV DNA高水平復制是患者發展為肝硬化及肝細胞癌的指標。監測HBV DNA水平在慢性乙肝感染的結局中起著非常重要的作用，其可以被宿主的因素所影響。有研究表明，在感染性疾病、流行性感冒感染時均會伴隨HDL水平的降低，而高水平的HDL對病人的治療效果較好［4］。有文獻報道，HDL對于亞洲慢性丙肝患者體內病毒負載早期降低有明顯的作用［5］。也有很多研究均表明，在慢性乙肝患者體內HDL的水平較低。HDL可能是天然免疫系統的成員，具有抗感染的能力［6］。因此，我們檢測慢性乙肝患者體內HBV DNA和HDL的水平，結果證實了HDL和HBV DNA之間存在負相關關系，HDL可能通過某種機制達到其抗感染的能力來降低病毒感染。

為了進一步研究HDL的抗病毒機制，我們檢測了患者外周血IL－10的水平。有文獻表明，慢性乙肝患者體內HBV DNA的水平和IL－10水平呈負相關［7］。通過檢測結果，我們分別分析了 HBV DNA、HDL和IL－10之間的關系，結果表明，HBV DNA水平與IL－10水平呈現負相關，而HDL和IL－10的水平是呈正相關關系的。IL－10主要是由CD4＋T細胞分泌的，在Th2細胞免疫反應中起到調節免疫反應的作用，Th2免疫反應過程中大量T細胞分化為CD4＋CD25＋調節T細胞，此調節T細胞能夠分泌大量IL－10來起到免疫調節的作用［8］。因此，我們進一步檢測了患者外周血中CD4＋CD25＋T細胞的水平，結果表明，HBV DNA水平與CD4＋CD25＋T細胞的水平呈負相關關系，而HDL水平與CD4＋CD25＋T細胞呈正相關關系。分析結果提示在慢性乙肝患者體內，HDL的抗病毒作用很可能是通過誘導T細胞分化為CD4＋CD25＋T細胞，并通過該細胞產生大量IL－10來達到其抗病毒的作用的。我們的結果進一步印證了文獻中所述HDL可能是天然免疫系統的成員，具有抗感染的能力。

綜上所述，通過研究得出HDL具有抗病毒的能力，其機制可能是通過誘導T細胞分化為CD4＋CD25＋T細胞，該細胞活化后產生大量IL－10來達到其抗病毒的作用的，但是機體的免疫系統是極其復雜的網絡，細胞免疫與體液免疫共同作用，多種免疫細胞及免疫分子參與其中。HDL可能是天然免疫系統的成員，其抗病毒的機制可能有多種細胞及因子參與。在ALT正常的慢性乙肝患者體內HDL與HBV DNA會呈現怎樣的關系，還有待進一步實驗。因此我們后期需要做更多的研究來弄清楚HDL抗病毒的機制，以使其達到更好的抗病毒療效。

［1］Maddrey WC.Hepatitis B：an important public health issue［J］.J Med Virol，2000，61：362.

［2］Thursz M.Genetic susceptibility in chronic viral hepatitis［J］.Antiviral Res，2001，52：113.

［3］Siagris D，Vafiadis G，Michalaki M，et al.Serum adiponectin in chronic hepatitis C and B［J］.J Viral Hepat，2007，14：577.

［4］Kontush A，Chapman MJ.Functionally defective high－density lipoprotein：a new therapeutic target at the crossroads of dyslipidemia，inflammation，and atherosclerosis［J］.Pharmacol Rev，2006，58：342.

［5］Hsu CS，Liu CH，Liu CJ，et al.Factors affecting early viral load decline of Asian chronic hepatitis C patients receiving pegylated interferon plus ribavirin therapy［J］.Antivir Ther，2009，14：45.

［6］Perez－Morga D.Trypanolytic factor of human serum［J］.Bull Mem Acad R Med Belg，2006，161：309－315.

［7］Schlaak JF，Tully G，Lohr HF，et al.HBV－specific immune defect in chronic hepatitis B is correlated with a dysregulation of pro－and anti－inflammatory cytokines［J］.Clin Exp Immunol，1999，115：508.

［8］D＇Orazio TJ，Niederkorn JY.A novel role for TGF－beta and IL－10 in the induction of immune privilege［J］.J Immunol，1998，160：2089.