精制冠心滴丸定性定量方法的研究

張 慧 裴志東姜 歡 欒 陽

遼寧中醫藥大學，遼寧 大連 116600

精制冠心滴丸定性定量方法的研究

張 慧 裴志東*姜 歡 欒 陽

遼寧中醫藥大學，遼寧 大連 116600

目的：建立精制冠心滴丸的定性定量方法。方法：采用TLC法對方中丹參進行定性鑒別，同時采用HPLC法測定制劑中芍藥苷的含量。色譜柱為Agilent TC－C18（4.6mm×250mm，5μm），流動相為0.1%磷酸溶液：乙腈（87：13），檢測波長為230nm，柱溫30℃。結果：定性鑒別薄層色譜特征明顯；HPLC測定質量濃度在0.3648～0.8512μg范圍內呈良好的線性關系（r＝0.9995），平均回收率為99.74%，RSD 1.53%（n＝6）。結論：所建質量標準可用于制劑的質量控制。

精制冠心滴丸；薄層色譜；高效液相色譜；芍藥苷

精制冠心滴丸是由丹參、赤芍、川芎、紅花、降香5味中藥組成。具有活血化瘀等功效。用于瘀血內停所致的胸痹，癥見胸悶、心前區刺痛，冠心病見上述證候者。本品是在其片劑的基礎上改變劑型制成滴丸劑，為控制制劑的質量，本實驗對原有片劑的質量標準進行了提高，建立了丹參的TLC定性方法及芍藥苷的HPLC定量方法，現分述如下：

1 儀器與試藥

Agilent1260高效液相色譜儀；AS3120A超聲波清洗器；薄層層析硅膠G（中國青島海洋化工集團公司出品）；芍藥苷對照品（批號110736－201035）、丹參酮ⅡA（批號110752－200511）、丹參對照藥材（批號120923－200610），均為中國食品藥品檢定研究院提供；精制冠心滴丸自制；甲醇、乙腈為色譜純，其它試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 丹參的薄層鑒別 取本品粉末2.0g，加乙醚5mL，超聲處理5min，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對照藥材粉末1.0g，同法制成對照藥材溶液；再取丹參酮IIA對照品，加乙酸乙酯制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液。再取除去丹參外的其它藥材，按滴丸制備工藝及供試品制備方法制成丹參陰性液。照《中國藥典》2010版一部附錄VIB薄層色譜法試驗［1］，吸取上述4種溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷－乙酸乙酯（6：1）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中。在與對照藥材相應位置顯相同顏色斑點，在與對照品相應位置上顯相同暗紅色斑點，陰性液無干擾。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent TC－C18 C18（200× 4.6mm，5um）；流動相為0.1%磷酸溶液∶乙腈（87∶13）；檢測波長：230nm；流速：1.0ml/min。柱溫：30℃；進樣量10μL。

2.2.2 溶液的制備 取本品粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理20min，放冷，再精密稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，制成供試品溶液。精密稱取芍藥苷對照品6mg，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，再精密量取上述溶液1mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成對照品溶液。取除去赤芍后處方中其它藥材，照上述供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

2.2.3 專屬性試驗 取供試品溶液、對照品溶液及陰性對照溶液，分別注入液相色譜儀，繪制液相色譜圖，由色譜圖提示，在對照品色譜相應的位置上，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰，陰性液在此峰位無吸收，表明測定芍藥苷的含量無干擾，方法專屬性良好。見圖1。

2.2.4 線性關系考察 精密量取芍藥苷對照品溶液（0.608g ·L）0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10μL溶液，注入液相色譜儀，測定色譜峰面積，以進樣濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，經線性回歸，回歸方程為：Y＝49504.91X＋887226.34，相關系數為r＝0.9990。結果芍藥苷進樣量在0.3648～0.8512μg范圍內線性關系良好。

2.2.5 穩定性試驗 取本品粉末約0.5g，精密稱定，制備供試液，精密量取同一供試液，分別在0、3、6、9、12小時間隔，測定色譜峰面積。結果提示，供試液制備后12小時內測定，色譜峰面積無明顯變化，RSD為1.63%，在此時間內，待測組分化學性質穩定。

2.2.6 中間精密度試驗 取本品粉末0.5g，共計6份，分別由三個實驗人員，分別在不同日期、不同儀器上進樣10μL，測定樣品色譜峰面積，計算含量。結果顯示，中間精密度的RSD為1.93%，符合規定。

2.2.7 重復性試驗 取本品粉末0.5g，共計6份，制備供試品溶液，分別進樣10μL，測定峰面積，計算含量，考察重復性。結果顯示，重復性的RSD為0.74%，符合規定。

2.2.8 加樣回收率試驗 分別取已知含量（2.655mg·g）的供試品溶液0.25 g共計6份，分別置25mL容量瓶中，分別加入對照品溶液（0.608mg/ml）1.25mL，按“2.2.2供試品溶液的制備方法”制備，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，測定色譜峰面積，計算回收率，測定結果見表1。結果顯示：本方法回收率在98.72%～101.50%之間，符合有關規定。

2.2.9 樣品含量測定 取三批精制冠心滴丸，研細，按“2.2.2溶液的制備”方法制備供試品溶液和對照品溶液，并分別進樣10μL，測定芍藥苷的峰面積。按外標法計算含量，結果三批樣品的含量分別是2.922、2.846、2.862mg·g。

表1 回收率試驗結果

3 討論

3.1 在薄層鑒別中，曾參考《中國藥典》2010年版一部［1］，對方中降香、紅花進行TCL法鑒別，結果存在陰性干擾問題，因此未建立降香、紅花的TLC鑒別方法。

3.2 在含量測定中，曾采用流動相乙腈－水－磷酸（14∶86∶0.1）［2］、0.1%磷酸溶液：乙腈（80：20）、0.05 mol/L磷酸二氫鉀∶甲醇（60∶40）［3］，結果分離效果欠佳，因此選擇本文中流動相。

3.3 對含量測定的檢測波長進行了考察。取芍藥苷對照品加甲醇制成每1mL含20μg的溶液，在200－400nm的紫外波長范圍內掃描。結果顯示，對照品在230nm下有最大吸收，為此本品的含量測定的檢測波長確定為230nm。

［1］中國藥典.一部［S］.2010：213；141.

［2］黃道秋，賀鋼民，李柏群，等.芩術四物湯中黃芩苷和芍藥苷的含量測定［J］.成都中醫藥大學學報，2012，35（3）：45－47.

［3］謝清春，呂竹芬，陳燕忠，等.補肺活血膠囊中芍藥苷的含量測定［J］.2012，35（8）：1335－1336.

表1 加樣回收試驗測量結果（n＝6）

2.9 樣品測定 按供試液的制備及檢測方法，測定3批清感穿心蓮軟膠囊中脫水穿心蓮內酯含量（mg/粒）分別為1.46、1.37、1.52。

3 討論

3.1 對脫水穿心蓮內酯對照品溶液進行紫外掃描，結果其在254nm處有最大吸收，故確定檢測波長為254nm。參照文獻［1，2］脫水穿心蓮內酯含量測定方法，以甲醇－水為流動相，考察多個比例，最后確定甲醇－水（62∶38）的比例較為適合。

3.2 采用超聲處理30min、加熱回流1h、索氏提取2h進行提取方法考察，結果三者提取結果相差不大，但超聲處理更簡便、快捷，故采用超聲處理法。采用甲醇、50%甲醇、無水乙醇作提取溶劑進行考察，用甲醇提取所得含量比高，且雜質較少，故采用甲醇作為提取溶劑。以超聲處理15min、30min、45min，進行提取時間考察，超聲處理15min，測得結果較低，超聲處理30min、45min，兩者無明顯差別，故超聲處理時間定為30min。

參考文獻

［1］張靜，琚小龍，李治坤.HPLC法測定穿心蓮軟膠囊中脫水穿心蓮內酯的含量［J］.安徽醫藥，2003，7（6）：453－454.

［2］田軍，陸宇.HPLC測定消炎利膽軟膠囊中脫水穿心蓮內酯的含量［J］.中成藥，2006，28（3）：451－452.

（收稿日期：2013.01.26）

Study on the Quality and Quantity Methods of Jingzhi Ganxin Dripping Pills

ZHANG Hui，PEI Zhi-dong，JIANG Huan，LUAN Yang
（The Liaoning Universitiy of Chinese Traditional Medicine，Dalian 116600，China）

Objective：To establish the methods for the quantification and quantitation of Jingzhi Ganxin dripping pills.Method：Salviae Miltiorrhizae radix was identified by TLC.The content of paeoniflorin was determined by HPLC.HPLC method was performed on a Agilent TC－C18（4.6mm×250mm，5μm）column with a mobile phase of 0.1%phosphoric acid solution－acetonitrile（87：13）.The wavelength of detector was 230 nm and the column temperature was set at 30℃.Result：Characteristics of identification were very obviously.The linear range of paeoniflorin was 0.3648～0.8512μg（r＝0.9995）with an average recovery of 99.74%（RSD1.53%，n＝6）.Conclusion：The method can be used for the quality and quantity control of Jingzhi Ganxin dripping pills.

Jingzhi Ganxin dripping pills；TLC；HPLC；Paeoniflorin

R284.1

A

1007－8517（2013）06－0019－02

2013.02.05）

張慧（1970－），女（漢族），吉林通化人，副教授，碩士研究生導師，博士/博士后，研究方向：中藥品質評價。