樹突狀細(xì)胞在部分乳腺癌中的表達(dá)及意義

成 媛，羅文彥，王翀奎，王 榮，張 梁，趙 松

（1.河北醫(yī)科大學(xué)西山校區(qū)護(hù)理基礎(chǔ)部病理教學(xué)組，河北石家莊050228；2.河北醫(yī)科大學(xué)西山校區(qū)教務(wù)處，河北石家莊050228；3.河北醫(yī)科大學(xué)西山校區(qū)護(hù)理基礎(chǔ)部護(hù)理教研組，河北石家莊050228；

4.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，河北石家莊050017）

·論 著·

樹突狀細(xì)胞在部分乳腺癌中的表達(dá)及意義

成 媛1，羅文彥1，王翀奎2，王 榮3，張 梁1，趙 松4*

（1.河北醫(yī)科大學(xué)西山校區(qū)護(hù)理基礎(chǔ)部病理教學(xué)組，河北石家莊050228；2.河北醫(yī)科大學(xué)西山校區(qū)教務(wù)處，河北石家莊050228；3.河北醫(yī)科大學(xué)西山校區(qū)護(hù)理基礎(chǔ)部護(hù)理教研組，河北石家莊050228；

4.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，河北石家莊050017）

目的通過測定乳腺癌組織中樹突狀細(xì)胞的計(jì)數(shù)，探討其與乳腺癌臨床病理特征（病理分類、組織分化程度、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、患者年齡、月經(jīng)狀況）的關(guān)系，闡明乳腺癌中樹突狀細(xì)胞的分布表達(dá)與其臨床預(yù)后的相關(guān)性。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）方法檢測60例乳腺癌組織中樹突狀細(xì)胞的表達(dá)。結(jié)果樹突狀細(xì)胞主要分布于腫瘤間質(zhì)中，少量散布于腫瘤細(xì)胞之間，呈卵圓形或不規(guī)則形，胞漿豐富，細(xì)胞表面突起較短或無突起，與淋巴細(xì)胞相伴浸潤。樹突狀細(xì)胞計(jì)數(shù)隨著乳腺癌組織分化程度增高而增多，高分化與中分化、低分化之間樹突狀細(xì)胞計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；樹突狀細(xì)胞計(jì)數(shù)在患者年齡、月經(jīng)狀況、病理學(xué)分類及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。乳腺癌患者樹突狀細(xì)胞數(shù)目與預(yù)后呈正相關(guān)（r=0.280，P＜0.05）。結(jié)論樹突狀細(xì)胞的計(jì)數(shù)隨著乳腺癌組織分化程度增高而增多，其數(shù)目與乳腺癌患者生存期呈正相關(guān)。

乳腺腫瘤；樹突細(xì)胞；免疫組織化學(xué)

乳腺癌是危害女性健康常見的惡性腫瘤。腫瘤微環(huán)境中的免疫狀態(tài)比外周血免疫狀態(tài)更能反映出宿主的抗瘤免疫狀態(tài)。乳腺癌的免疫應(yīng)答反應(yīng)以細(xì)胞免疫為主，腫瘤間質(zhì)中免疫細(xì)胞的表達(dá)和浸潤程度與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移關(guān)系更為密切。樹突狀細(xì)胞（dentric cells，DC）是參與乳腺癌局部免疫的細(xì)胞之一，其在機(jī)體的抗腫瘤免疫應(yīng)答中發(fā)揮了重要作用。本研究采用免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）染色方法，分析乳腺癌組織中DC的表達(dá)情況，探討其在乳腺癌組織浸潤過程中的分布特點(diǎn)及與乳腺癌的臨床病理特征的關(guān)系，旨在闡明DC的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院病理科2005年7月—2006年7月病歷資料完整的存檔蠟塊60例，所有患者均為初次手術(shù)，術(shù)前均未接受過放療、化療及免疫治療。患者均為女性，年齡38～74歲，中位年齡50.5歲。年齡≤45歲13例，＞45～60歲37例，＞60歲10例。所有患者中未絕經(jīng)者30例，絕經(jīng)者30例。60例乳腺癌病理切片均經(jīng)高年資病理醫(yī)師診斷復(fù)核，組織學(xué)類型根據(jù)WHO分類分為導(dǎo)管內(nèi)癌14例，浸潤性導(dǎo)管癌27例，浸潤性小葉癌19例（浸潤性乳腺癌中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例）。組織分化程度包括高分化19例，中分化22例，低分化19例。隨訪時(shí)間5～60個(gè)月。

標(biāo)本均經(jīng)10％中性緩沖福爾馬林固定，常規(guī)取材、脫水、石蠟包埋切成4μm厚，連續(xù)切片5張，貼于涂有0.05％多聚賴氨酸的載玻片備用，為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果評估的準(zhǔn)確性，所有病例均經(jīng)2名有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)師經(jīng)行光鏡觀察共同確診并對乳腺癌進(jìn)行組織學(xué)分型。

1.2 試劑：兔抗人CD14多克隆抗體（美國Proteintech集團(tuán)有限公司）；兔抗人CD40多克隆抗體（北京博奧森生物公司）；兔抗人CD127多克隆抗體（北京博奧森生物公司）；DAB顯色試劑盒（北京中杉生物技術(shù)有限公司）；S-P試劑盒（北京中杉生物技術(shù)有限公司）。

1.3 IHC染色方法：采用S-P法。切片經(jīng)常規(guī)脫蠟，用3％過氧化氫甲醇溶液室溫下避光孵育15min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，微波爐抗原修復(fù)。染色按S-P試劑盒提供的說明書進(jìn)行。同步設(shè)有陽性和陰性對照。用已知陽性組織切片作為陽性對照，陰性對照采用PBS代替一抗，其余操作

步驟同實(shí)驗(yàn)片。

1.4 IHC結(jié)果判定：CD40標(biāo)記的DC以細(xì)胞膜和（或）細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性細(xì)胞。陽性細(xì)胞的計(jì)數(shù)方法，對每張切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野（×400），計(jì)數(shù)每個(gè)視野陽性細(xì)胞的數(shù)量，求其均值為該病例的陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)［1］。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以±s表示，分別采用F檢驗(yàn)和q檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 DC檢測結(jié)果：CD40陽性染色顆粒定位于T細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、DC、上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、及乳腺癌細(xì)胞。通過形態(tài)學(xué)觀察排出除DC以外的CD40+表達(dá)細(xì)胞。

CD40+DC胞漿與胞膜呈棕黃色或棕褐色，主要分布于腫瘤間質(zhì)中，少量散布于腫瘤細(xì)胞之間，呈卵圓形或不規(guī)則形，胞漿豐富，細(xì)胞表面突起較短或無突起，與淋巴細(xì)胞相伴浸潤（圖1～5）。

2.2 DC計(jì)數(shù)與乳腺癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系：浸潤性導(dǎo)管癌與浸潤性小葉癌之間DC計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；未絕經(jīng)者與絕經(jīng)者DC計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；各年齡段（≤45歲、＞45～60歲、＞60歲）DC計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者DC計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；DC計(jì)數(shù)隨著乳腺癌組織分化程度增高而增多，其中高分化者與中分化、低分化組者DC計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），而中分化者與低分化者DC計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.3 相關(guān)性分析：乳腺癌患者DC數(shù)目與預(yù)后呈正相關(guān)（r=0.280，P＜0.05）。

表1 DC計(jì)數(shù)與乳腺癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系 （±s，個(gè)）

表1 DC計(jì)數(shù)與乳腺癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系 （±s，個(gè)）

臨床病理參數(shù)例數(shù)計(jì)數(shù)年齡≤45 13 2.30±1.00＞45～60 37 2.19±1.36＞60 10 2.15±1.68月經(jīng)狀況未絕經(jīng)30 2.29±1.08絕經(jīng)30 2.12±1.56病理分類浸潤性導(dǎo)管癌27 1.78±1.16浸潤性小葉癌19 1.77±0.84

*P＜0.05與高分化比較（q檢驗(yàn)）

3 討 論

DC是Steinman等［2］從小鼠的脾和淋巴器官中分離發(fā)現(xiàn)的，其形狀可呈樹突樣。DC起源于骨髓CD34+造血干細(xì)胞，廣泛分布于除腦以外的全身各個(gè)組織與器官，數(shù)量甚微，約占外周血單核細(xì)胞0.5％～1.0％。DC是目前已知的體內(nèi)功能最強(qiáng)的專職抗原提呈細(xì)胞，具有攝取、處理和提呈抗原至T細(xì)胞的功能。處于不同分化階段的DC具有不同的功能。未成熟的DC高表達(dá)補(bǔ)體受體、Fc受體等與吞噬有關(guān)的受體，具有較強(qiáng)的抗原內(nèi)吞和加工處理能力，其在向淋巴組織T區(qū)遷移過程中可能誘導(dǎo)免疫耐受；成熟的DC高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物（major histocompatibility complex，MHC）Ⅰ、Ⅱ類分子和CD40、CD80、CD86等共刺激分子及黏附分子，具有較強(qiáng)的抗原提呈和激活初始型T細(xì)胞的能力，它通過處理、提呈抗原從而介導(dǎo)機(jī)體的免疫應(yīng)答。

CD40是由Koho等［3］在人的膀胱癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的。它是一種相對分子質(zhì)量為45 000～50 000的Ⅰ型跨膜糖蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員，CD40在B細(xì)胞、成熟DC、上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血小板等［4］上均有表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)CD40還可表達(dá)于一些腫瘤細(xì)胞上，如乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌等［5］。本研究采用CD40作為DC的表面標(biāo)記，結(jié)合其形態(tài)學(xué)特點(diǎn)來檢測乳腺癌組織中DC的表達(dá)情況。

本研究結(jié)果顯示DC主要分布于乳腺癌間質(zhì)中，少量散布于腫瘤細(xì)胞之間，細(xì)胞呈卵圓形或不規(guī)則形，表面突起較短或無突起。這不同于正常成熟DC的形態(tài)特點(diǎn)，這種差異與DC表面分子低表達(dá)或不表達(dá)有關(guān)。羅小玲等［6］在淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)DC胞漿突起與腫瘤細(xì)胞密切接觸，認(rèn)為DC可以在腫瘤細(xì)胞間移行，且借助突起直接攝取腫瘤相關(guān)抗原。

本研究結(jié)果顯示DC計(jì)數(shù)隨著乳腺癌組織分化程度增高而增多，高分化者與中分化、低分化者之間的DC計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。提示DC可能會(huì)影響乳腺癌的增殖與分化。這與曹榮華等［7］、馮瑞娥等［8］的研究結(jié)果一致。谷彥軍等［9］卻

得出了相反的結(jié)論。機(jī)體產(chǎn)生的免疫反應(yīng)是否會(huì)隨著腫瘤惡性度增高而增強(qiáng)有待進(jìn)一步證實(shí)。本研究淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者與無淋巴結(jié)者DC計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。提示DC可能不參與乳腺癌的轉(zhuǎn)移。

本研究還發(fā)現(xiàn)DC的表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后呈正相關(guān)。這與相關(guān)腫瘤的研究結(jié)果一致［10-11］。DC抗腫瘤免疫機(jī)制為DC捕獲腫瘤抗原后，通過細(xì)胞表面的MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ類分子提呈腫瘤抗原給T細(xì)胞（抗原）受體。同時(shí)，DC提供高水平的共刺激分子、黏附分子激活T細(xì)胞。DC與T細(xì)胞結(jié)合后可通過分泌白細(xì)胞介素12來誘導(dǎo)T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等產(chǎn)生腫瘤壞死因子γ、穿孔素和顆粒酶，增強(qiáng)對靶細(xì)胞的溶解作用。DC可反映機(jī)體的免疫狀態(tài)，尤其是腫瘤灶局部的DC即腫瘤浸潤性DC更能反映宿主的抗瘤免疫狀態(tài)。腫瘤細(xì)胞可以通過釋放白細(xì)胞介素10、血管內(nèi)皮生長因子及轉(zhuǎn)化生長因子β1等免疫抑制因子抑制DC的成熟，降低DC表面分子的表達(dá)。MHC-Ⅱ類分子的不表達(dá)或低表達(dá)提示DC提呈外源性抗原的能力低下，而DC表面的共刺激分子、黏附分子的低表達(dá)或不表達(dá)也可以導(dǎo)致DC的抗原提呈能力低下，從而使DC無法有效地識別和殺傷腫瘤細(xì)胞［12］。馬靜等［13］提出可采用DC作為疫苗載體（或稱佐劑），以腫瘤抗原體外沖擊使其致敏，不僅可以保證腫瘤抗原被有效地?cái)z取，而且可以提供所需的共刺激信號，從而實(shí)現(xiàn)腫瘤的免疫治療。

總之，DC的計(jì)數(shù)隨著乳腺癌組織分化程度增高而增多，其數(shù)目與乳腺癌患者生存期呈正相關(guān)。提示乳腺癌中DC的計(jì)數(shù)可作為評估患者預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立因素。（本文圖見封三）

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（本文編輯：劉斯靜）

R737.9

B

1007-3205（2013）06-0683-03

2012-12-24；

2013-01-25

成媛（1982-），女，河北新樂人，河北醫(yī)科大學(xué)西山校區(qū)助教，醫(yī)學(xué)碩士，從事病理學(xué)教學(xué)與科研工作。

*通訊作者。E-mail：abcxph@163.com

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.06.022