中藥逆轉腫瘤多藥耐藥機制研究

李亞楠，孟靜巖

(天津中醫藥大學，天津 300193)

多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)是腫瘤細胞免受化療藥物攻擊的最重要防御機制，也是導致化療失敗的主要原因之一。目前認為了解腫瘤耐藥機制，有助于提高臨床腫瘤化療效果。現將對中醫藥逆轉腫瘤多耐藥機制的研究，總結如下。

1 腫瘤多藥耐藥機制

1.1 P-糖蛋白(P-gp) P-gp的過度表達使藥物外排能力增強，降低細胞內藥物濃度,從而引起MDR[1]。Januchowski等[2]發現卵巢癌的主要耐藥機制是耐藥細胞株P-gp的過度表達和拓撲替康耐藥細胞株BCRP的過度表達。

1.2 多藥耐藥相關蛋白(MRP) MRP屬于ABC轉運蛋白，發現于小細胞肺癌H69AR中，該基因主要存在于細胞膜上，細胞漿中也有分布[3]。可轉運親水性分子及有機陰離子，MRP的轉運往往要有GSH的存在，能識別和轉運GSH的耦合底物(如長春新堿、阿霉素等)，從而導致耐藥。

1.3 乳腺癌耐藥蛋白(BCRP) BCRP作為ABC轉運家族成員之一的ABCG2是近年發現的與腫瘤多藥耐藥有關的新的藥物排出泵。該基因是一種含有655個氨基酸殘基、16個外顯子和15個內顯子，相對分子質量為74.6KD的跨膜轉運蛋白，特異底物為阿霉素、拓撲替康等[4]。

1.4 谷胱甘肽轉移酶 谷胱苷肽硫轉移酶(Glutathione S-tran-sferase,GST)和谷胱甘肽(GSH)與腫瘤耐藥密切相關，GSH在GSTs的催化下能與某些抗腫瘤藥物形成復合物，作為MRP1的底物被轉運出細胞外，從而產生耐藥。

1.5 蛋白激酶C(PKC) PKC是一類Ca2+、磷脂依賴性的蛋白激酶，在跨膜信號傳遞過程中起著重要作用。PKC通過催化多種蛋白質上Ser/Thr磷酸化，調節多種細胞的代謝、生長、增殖和分化。GST的非特異性結合可協助藥物通過P-gp泵出細胞外[5]。有研究表明GSTP1可被PKC和PKA磷酸化進而提高催化性，導致耐藥[6]。

1.6 拓撲異構酶Ⅱ(TopoⅡ) TopoⅡ是細胞內的一種重要核酶,是目前抗癌藥物重要的作用靶點，主要與Topo的磷酸化水平提高、Topo酶水平下降及Topo基因位點突變或缺失有關[7]。研究[8]發現TopoⅡ含量與活性的下降可能與多藥耐藥有關。

1.7 DNA的修復 當腫瘤細胞的DNA受損時，不僅影響其復制和轉錄功能，而且還能引起細胞死亡。DNA是很多抗癌藥物和放療的靶點，如烷化劑和鉑類劑，O6烷基鳥嘌呤DNA烷基轉移酶，能修復烷化劑類抗癌藥物誘導形成的O6烷基鳥嘌呤DNA合成物，使腫瘤細胞產生耐藥性[9]。

2 中醫藥逆轉腫瘤耐藥

2.1 中藥單體

2.1.1 青蒿素 余和平等[10]通過流式細胞術測定青蒿素聯合ADR對MCF-7/ARD細胞P-gp表達的影響，結果顯示青蒿素逆轉MCF-7/ARD細胞耐藥的機制可能是通過影響細胞質和細胞膜之間的P-gp交換，降低細胞膜上P-gp表達水平，從而提高藥物在細胞內的聚集，增強藥物對細胞的殺傷作用。

2.1.2 大黃素 丘禹洪等[11]用蛋白印跡法檢測細胞中ERCC1蛋白的表達，研究結果發現大黃素可通過下調ERCC1的表達水平而逆轉MCF-7/Adr細胞多藥耐藥，并與大黃素濃度和作用時間有一定相關性。

2.1.3 姜黃素 曹仕瓊等[12]研究發現姜黃素具有逆轉肝癌細胞多藥耐藥的作用，其機制可能與下調多藥耐藥相關蛋白MRP1、LRP、P-gp以及上調凋亡相關蛋白PDCD5表達有關。

2.1.4 人參皂甙 王艷等[13]通過細胞膜流動性實驗檢測人參皂甙(Rg3)對A549/DDP細胞膜流動性的改變，發現通過上調caspas-3的表達，降低細胞膜的流動性，從而達到逆轉耐藥的作用。

2.1.5 漢防己甲素 顧建華等[14]用Wstern-blot法檢測漢防己甲素(Tel)應用前后SW1990-GEM細胞P-gp的表達，結果發現通過增加腫瘤細胞內化療藥物濃度逆轉SW1990-GEM細胞多藥耐藥性從而增強化療藥物抗腫瘤作用，其逆轉機制與抑制P-gp功能有關。

2.1.6 川芎嗪 余緒明等[15]研究表明川芎嗪能顯著降低人肝癌多藥耐藥細胞BEL-7402/ADM細胞表面P-gp表達，增加阿霉素等化療藥物對BEL-7402/ADM細胞毒性作用，從而增加對腫瘤細胞的抑制率。

2.1.7 黃芩苷 王術華[16]用MII法研究黃芩苷對人肝癌多藥耐藥細胞的逆轉作用，結果發現黃芩苷可能通過抑制MDR1部分基因產物P-gp、MRP、GSH/GST的表達和誘導細胞凋亡逆轉Bel-7402/ADM的多藥耐藥性。

2.1.8 浙貝母堿 唐曉勇等[17]用細胞免疫熒光法檢測細胞中的人肺耐藥蛋白(LRP)，結果浙貝母堿可逆轉肺癌A549/DDP細胞株多藥耐藥，其作用機制可能與促進耐藥細胞凋亡、下調LRP蛋白表達有關。

2.1.9 五味子素 金秀東等[18]用堿性磷酸酶免疫組織化學法和Westert blot檢測復方五味子素B對THC-8307/OXA細胞GST-n蛋白水平的影響，結果顯示,復方五味子素B具有逆轉耐奧沙利鉑人結腸癌細胞的MDR作用，其機制與下調GST-n表達有關。

2.2 中藥復方

2.1.1 腸胃清 鮑文磊等[19]用流式細胞術研究腸胃清方對大腸癌耐藥細胞株HCT-8/V的逆轉作用及抑制P-gp的表達，結果表明，經腸胃清血清作用后,P-gp表達顯著降低，可能是逆轉人大腸癌多藥耐藥的作用機制之一。

2.2.2 健脾解毒方 李琪等[20]通過Western Blot檢測健脾解毒方藥物血清對P-糖蛋白(P-gp)以及c-Jun氨基端激酶(JNK)信號通路中c-Jun63/73磷酸化水平，探討健脾解毒方(JPJD)介導JNK/SAPK信號通路對人結腸癌細胞多藥耐藥的調節機制。結果顯示，健脾解毒方通過降低c-Jun的Ser63/73磷酸化，抑制JUN信號通路的激活，降低P-gp的表達，從而逆轉HCT-8/V細胞的多藥耐藥。

2.2.3 至真方 張旭等[21]用不同濃度至真方含藥血清作用24 h后，發現HCT-8/VCR細胞NF-κB/p65、MDR1 mRNA及NF-κB/p65、P-gp蛋白表達均降低，呈濃度依賴性，且至真方含藥血清可明顯抑制HCT-8/VCR細胞生長。

2.2.4 益氣養陰解毒方 嚴魯萍等[22]用流式細胞儀檢測移植瘤耐藥細胞P糖蛋白(P-gp)與bcl-2的表達情況，結果表明,益氣養陰解毒方具有部分逆轉白血病K562/A02移植瘤多藥耐藥性的作用，其逆轉機制與降低bcl-2表達、促進耐藥細胞凋亡有關。

3 結語

根據耐藥譜可分為原藥耐藥(PDR)和多藥耐藥(MDR)。PDR只對誘導的原藥產生耐藥,而對其他藥物不產生交叉耐藥。而MDR是一種藥物誘發,而同時對其他多種結構和作用機制完全不同的抗癌藥物產生交叉耐藥。如何通過逆轉MDR提高腫瘤治療的臨床療效,已成為國內外研究的熱點之一。

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