清心片質量標準研究

楊白玉,苗艷萍，范曉青

(長春中醫藥大學藥學院，長春 130117)

清心片是以丹參、槐花、川芎、三七、紅花、降香、赤芍等中藥加工而成的片劑。其主藥為丹參，丹參為唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根和根莖。主產于四川、山東、江蘇、安徽等省。味苦，微寒，歸心、肝經。有活血祛瘀，通經止痛，清心除煩，涼血消痛。用于胸痹心痛，脘腹脅痛， 瘕積聚，熱痹疼痛，心煩不眠，月經不調，痛經經閉，瘡瘍腫痛等功效[1-2]。丹參素是清心片中發揮藥理活性的主要成分，因此，清心片中丹參素含量是評價清心片質量優劣的重要指標。

1 實驗材料

島津高效液相色譜儀，LC-10ATvp 溶劑輸送泵，SPD-10Avp 紫外—可見檢測器。PV ODS(150×4.6) 色譜柱。島津紫外—可見分光光度計：UV-1601(PC)S 型。甲醇：美國新澤西Fisher化學藥品，高效液相色譜純。水：超純水。冰乙酸：北京化工廠產品，優級純(G.R)；丹參素鈉對照品：購于中國藥品生物制品檢定所， 供含量測定用，批號：110855-200506。

2 方法與結果

采用薄層色譜法進行定性鑒別，用高效液相色譜法，對制劑中的丹參素進行含量測定[3-4]。

2.1 定性鑒別

2.1.1 取本品3 g，加甲醇30 mL，超聲處理5 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。另取槐花對照藥材1 g，加水50 mL，煎煮30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇20 mL，超聲處理5 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取供試品溶液10 μL，對照藥材溶液2 μL，分別點于同一以0.6%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜的相應位置上，顯一相同顏色的斑點。

2.1.2 取本品鑒別(2.1.1)項下的供試品溶液作為供試品溶液。另取赤芍對照藥材1 g,加水50 mL，水煎1 h，濾過，濾液濃縮，蒸干，殘渣加乙醚20 mL，超聲處理20 min，濾過，藥渣揮去乙醚，自“加甲醇20 mL起”依法制成對照藥材溶液，再取芍藥苷對照品,加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一以0.6%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜及對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

定性鑒別合格后，采用高效液相色譜法，以丹參素為標準進行含量測定。

2.2 測定波長的選擇 在清心片原標準中(《中國藥典》2010年版一部)測定丹參素的含量時，以283 nm為檢測波長。我們對仿制的清心片含量測定進行方法學考察時，首先進行了測定波長的選擇試驗，具體方法是：精密稱取丹參素鈉對照品適量，加50%甲醇制成每1 mL含48 μg的溶液，加入紫外—可見分光光度計吸收池內，在波長190～600 nm范圍內進行光譜掃描，結果在波長283 nm有最大吸收。

2.3 系統適用性 色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-二甲基甲酰胺-冰乙酸(2∶95∶2∶1)為流動相，檢測波長283 nm。理論板數按丹參素峰計算應不低于6 000。

2.4 供試品和標準品溶液的制備[5-8]對照品溶液的制備：取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加50%乙醇制成每1 mL含50 μg(相當于每1 mL含丹參素45 μg)的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取清心片10片，除去包衣，精密稱定，研細，取約1 g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸溶液(1→50)50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用上述鹽酸溶液補足減失重量，加氯化鈉5 g，搖勻，離心，精密量取上清液25 mL，置分液漏斗中，用乙酸乙酯振搖提取4次(50、30、20、20 mL)，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，殘渣用50%甲醇溶解并轉移至25 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.5 標準曲線的繪制[7-9]以丹參素鈉為標準品繪制標準曲線，精密吸取丹參素鈉對照品溶液(濃度0.048 mg/mL，相當于丹參素0.0432 mg/mL)分別進樣5、10、15、20、25 μL，測量相對應的峰面積，結果：A=276 101.873 1C+10 133.53 781，r=0.999 1。進樣量在0.216～1.08 μg的范圍內，進樣量與峰面積之間呈直線函數關系。

2.6 清心片中丹參素含量測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，得峰面積，通過方程A=276 101.873 1C+101 33.537 81和溶液配制過程計算丹參素含量。

2.7 方法學考察[9-11]

2.7.1 穩定性試驗 精密吸取丹參素鈉對照品溶液10 μL，于第1、第2、第3、第4、第5天分別進樣10 μL，測量峰面積，結果X=131 415.720，RSD=1.02%。

2.7.2 精密度試驗 取同一對照品溶液，連續進樣5次，每次10 μL，測量峰面積，結果x=130 017.320，RSD=1.22%。

2.7.3 重現性試驗 取清心片樣品一批，每片重0.6 g,批號為20120601，依法獨立測定5次。對照品丹參素鈉的濃度為48 μg/mL(相當于丹參素的濃度為43.2 μg/mL)，進樣量10 μL，峰面積131 245.406。根據對照品峰面積與供試品峰面積計算樣品含量，結果平均含量為1.37 mg/片。RSD=2.09%。

2.7.4 回收率測定 取清心片樣品一批：批號為20120601，除去薄膜衣后的平均片重為0.5 719 g/片，含量為1.37 mg/片；取樣品5分，分別加對照品適量，依法獨立測定，結果對照品溶液中丹參素濃度為43.2 μg/mL，進樣量為10 μL。

2.8 10批樣品含量測定 取中試樣品10批，按照正文含量測定方法測定，結果表明原標準規定 “每片含丹參以丹參素計，不得少于0.80 mg ”。經測定樣品結果，均能達到上述標準,因此仍規定“本品每片含丹參以丹參素(C9H10O5)計，不得少于0.80 mg”。

3 結論

清心片屬中藥復方制劑，丹參為其主藥，丹參素是其主要有效成分，在心腦血管疾病的防治中發揮重要作用，因此，控制其中丹參素的含量是必要的。本文報道的含量測定方法操作簡便， 結果穩定, 適合作為清心片生產的質量標準。

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