分散液液微萃取—反萃取—接受相固化—高效液相色譜法測定減肥茶中的西布曲明

摘 要：建立了分散液液微萃取-反萃取-接受相固化與高效液相色譜聯用測定減肥茶中西布曲明的方法。優化的條件為：400 L石油醚為L甲醇為分散劑、14 萃取劑、120 L 0.2 mol/L HCl溶液和1 L甲醇的混合溶液為接受相，萃取2 min。在優化條件下西布曲明的富集因子可達130倍。方法的線性范圍為0.6～200 /L，檢測出限為0.2 /L，定量限為0.6 /L。樣品加標回收率介于91.9%～108.4%，日間相對標準偏差小于14%。

關鍵詞：分散液液微萃取-反萃取-接受相固化；高效液相色譜；西布曲明

1 引 言

西布曲明是一種中樞神經抑制劑，可抑制去甲腎上腺素、5-羥色胺和多巴胺的再攝取，長期服用可引起血壓升高，心率加快、厭食、肝功能異常等，重者可危及生命^[1]。由于西布曲明價格低廉，屢被一些不法商家違禁加入減肥食品中，因此，建立復雜基質中西布曲明的快速分離分析方法具有重要意義。

已有文獻報道了液液萃取（LLE）或固相萃取（SPE）與儀器聯用^[2～7]檢測血漿和保健品中的西布曲明，然而，LLE和SPE需要較大量有機溶劑、操作繁瑣耗時^[8]。分散液液微萃取-上浮溶劑固化法（DLLME-SFO）是Zanjani等^[9]于2007年提出來的一種新萃取技術，具有萃取時間短、有機萃取劑用量少和富集因子高等優點 [10～17]。但由于所用萃取劑為熔點接近室溫的有機溶劑，沸點較高，在氣相色譜分析中保留時間較長，溶劑峰會對保留時間相近組分造成干擾^[10]，且由于是將有機相直接進樣，使用HPLC進行分析時，可選的有機相很有限，多是十一醇或十二醇^[11～17]，這在一定程度上限制了該方法與HPLC分析的兼容性。

在DLLME-SFO的基礎上，本研究提出了一種基于接受相固化的分散液液微萃取-反萃取-接受相固化 （DLLME-BE-SAP） 新技術，通過將分散液液微萃取反萃取后的接受相水溶液固化，分離后將接受相冰粒室溫溶解后直接進樣HPLC分析，有效避免了有機萃取溶劑進樣對色譜柱的污染、擴大了有機萃取溶劑的選擇范圍，提升了萃取方法與HPLC的兼容性。由于萃取和反萃取均采用了分散液液微萃取技術，與常規的三相液相微萃取相比，萃取時間明顯縮短，簡化了分離操作。目前，涉及接受相固化的微萃取技術尚未見報道。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

1100液相色譜儀（美國Agilent公司），由G1312A液相泵、G1316A柱溫箱、G1315二極管陣列檢測器和7725手動進樣閥組成。超純水由Millipore公司的Milli-Q純水系統（Bedford，MA，美國）制得。

鹽酸西布曲明（中國藥品生物制品檢定所），甲醇和乙腈（色譜純），其它試劑為國產分析純試劑。兩種市售減肥茶（Dietic tea）a和b。

儲備液的配制：準確稱取10 mg鹽酸西布曲明，用甲醇溶解并定容至10 mL，配制成1 g/L的西布曲明儲備液。標準溶液由一定體積的儲備液稀釋制得。

樣品溶液的制備：減肥茶磨成粉末，稱取減肥茶A1.25 g、減肥茶B 1.0 g各一份，分別置于2個100 mL小燒杯中，用2 mL沸水浸泡10 min，均定容至100 mL，溶液經減壓抽濾，上清液即為樣品溶液。加標樣品除在樣品中加入實量西布曲明外，其它步驟同上。

2.2 色譜條件

3.1.3 萃取時間 考察了萃取時間分別為30，60，90，120和150 s時對西布曲明富集因子的影響，對應的富集因子分別為84.1，102，114.4，129.0和99.1，可見，萃取120 s時，能獲得較高的富集因子。

3.1.4 接受相組成 西布曲明是叔胺化合物，實驗選擇酸性水溶液作為接受相，通過使西布曲明質子化實現反萃取。分別考察了0.1和0.2 mol/L 的CH3COOH，HCl，HNO3，H2SO4和H3PO4溶液作為接受相時對西布曲明富集因子的影響.結果表明，采用0.2 mol/L HCl作為接受相時，西布曲明可以獲得最大的富集因子。為了縮短反萃時間，實驗還考察了接受相加入分散劑甲醇對西布曲明富集因子的影響，考察的甲醇與HCl溶液體積比分別為1∶14，2∶13，3∶12，4∶11和5∶10，當甲醇與HCl體積比為1∶14時，西布曲明有最大的富集因子，且接受相凝固速度快。當甲醇與HCl的體積比大于3∶12時，接受相幾乎不能凝固，這可能是由于甲醇的熔點太低（ 98 ℃）所致。反萃振搖30 s，反萃效率（接受相中西布曲明的物質的量與原料液和萃取后料液中西布曲明的物質的量差值的比值）大于97%。本實驗選擇14

采用本方法對市售減肥茶a和b進行分析。以減肥茶a為例，相關色譜圖如圖2c和2d。圖2c說明，減肥茶a中未檢出西布曲明，圖2d顯示加標樣品中的西布曲明能夠順利被檢出。同樣，減肥茶b中也未檢出西布曲明。對減肥茶樣品進行高、中、低濃度的標準加入回收分析，西布曲明萃取后獲得的加標回收率介于91.9%～108.4%，相對標準偏差介于5.1%～14%，說明本方法具有較好的精密度和準確度，可用于減肥茶中西布曲明的分析。

3.3 與其它方法的比較

將本方法與文獻方法進行比較（表1）可知，本方法借助簡便的DLLME-BE-SAP對西布曲明進行分離富集，有機萃取溶劑消耗少、萃取時間短，采用價格相對便宜的HPLC-UV進行檢測，靈敏度高于一般的HPLC-UV和CE，甚至高于或接近部分HPLC-MS方法。

4 結 論

本研究建立了一種操作簡便、萃取時間短、與HPLC兼容性好的DLLME-BE-SAP樣品分離富集方法，通過將分散液液微萃取反萃取后的接受相水溶液固化，分離后將接受相冰粒室溫溶解后直接進樣HPLC分析，對減肥茶中痕量違禁藥物西布曲明進行了檢測。