RhD陰性女性妊娠期意外抗體篩選的回顧性研究

陳舒 洪小珍 許先國 藍小飛 馬開榮 劉瑛 何吉 呂杭軍

RhD陰性女性妊娠期意外抗體篩選的回顧性研究

陳舒 洪小珍 許先國 藍小飛 馬開榮 劉瑛 何吉 呂杭軍

目的 分析RhD陰性女性妊娠期的意外抗體篩選情況。 方法 利用鹽水介質法、聚凝胺法和抗人球蛋白法對376例Rh陰性妊娠期女性進行了意外抗體篩查和抗體效價的測定，并對結果進行回顧性分析。結果 33例檢出意外抗體，檢出率為8.8%（33/376）。檢出抗體為抗D 24例（72.7%），抗D+C 2例（6.1%），抗E 2例（6.1%），抗Fyb 1例（3.0%），抗M 1例（3.0%）和抗P 11例（3.0%），2例未能鑒定出抗體特性。376例Rh陰性受檢者中78例篩查2次以上，其中10例第1次篩查陽性而在隨后定期檢測抗體滴度呈現變化，包括8例呈現上升趨勢和2例下降趨勢；4例保持不變；3例第1次篩查陰性而在隨后的定期檢測呈陽性，61例第1次篩查陰性而在隨后的檢測中未發現意外抗體。 結論 RhD陰性妊娠期女性中存在一定比例的意外抗體，定期篩查抗體有助于指導臨床及時采用干預措施。

RhD陰性 妊娠期女性 意外抗體篩查

新生兒溶血病（hemolytic disease of newborn，HDN）是一種常見于胎兒和新生兒的與溶血相關的自限性免疫綜合征,常由母嬰血型不合引起，主要見于ABO血型系統和Rh血型系統。RhD-HDN主要發生于母親RhD陰性而胎兒陽性，嚴重者可出現自然流產或不足月死胎[1-2]。對妊娠女性常規檢測Rh血型和不規則抗體，可以及早發現胎兒溶血風險以便采取相應措施。本文系統回顧性分析了Rh陰性女性妊娠期意外抗體的篩查情況，現報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 2007-07—2012-10來血液中心篩查的376例RhD陰性妊娠期女性，年齡19～39歲。

1.2 試劑 凝聚胺介質試劑（臺資珠海貝索生物技術有限公司），NOVACLONETMAnti-IgG抗人球蛋白試劑（美國Immucor公司），O型混合細胞（本實驗室自制），Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號篩選細胞（上海血液生物醫藥有限責任公司），譜細胞（上海血液生物醫藥有限責任公司或美國Immucor公司）。

1.3 方法

1.3.1 意外抗體篩選 取試管3支，各加受檢血清2滴，再分別加篩選細胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各1滴，混勻后1 000g離心20s，肉眼和顯微鏡觀察。加低離子溶液0.7ml，混勻后加凝聚胺溶液2滴，1 000g離心10s，傾去上清液，管底殘留約0.1ml液體。輕輕搖動試管，肉眼觀察紅細胞有無凝集，如無凝集則必須重作；加2滴懸浮液，搖動試管并輕輕混勻，1min內肉眼和顯微鏡觀察結果。無凝集則表示血清中無意外抗體；有凝集現象，則需進一步采用譜細胞來進行意外抗體鑒定。

1.3.2 意外抗體鑒定

1.3.2.1 鹽水介質法 加受檢者血清2滴于標記的試管中，加2%～5%譜細胞懸液1滴于每個試管中，混勻，1 000g離心15s，觀察溶血和凝集反應并記錄結果，溶血和凝集都是陽性結果。

1.3.2.2 抗人球蛋白試驗 取受檢者血清3滴于標記的小試管中，加2%～5%譜細胞懸液1滴，加低離子溶液3滴，混勻，37℃水浴孵育15min，用0.9%氯化鈉溶液洗滌3次后，加抗球蛋白試劑2滴，混勻，1 000g離心15s，肉眼觀察溶血和凝集。如結果為陰性，再加IgG致敏的細胞1滴，離心后應出現凝集結果，否則試驗無效。

1.3.3 血清抗體效價測定 取10支小試管，按順序編號，每管加0.9%氯化鈉溶液100μl。第1管中加入100μl受檢者的血清，從該管起做倍比稀釋至第10管。第10管去掉100μl。每管加入相應血型抗原的2%～5%譜細胞懸液50μl混勻，置37℃水浴30min。每管用0.9%氯化鈉溶液洗滌3次后，加抗球蛋白試劑2滴，搖勻，1 000g離心15s，肉眼觀察凝集結果。

2 結果

2.1 RhD陰性妊娠期女性血清意外抗體篩選情況 共檢測Rh陰性女性376例，其中33例檢出含有意外抗體，檢出率8.8%（33/376）。檢出的抗體有抗D 24例（72.7%），其中效價≤1的6例，效價2的3例，效價32的2例，效價64的3例，效價128的6例，效價256的3例，效價1 024的1例；抗D+C 2例（6.1%），其中抗D的效價分別為64和256，抗C的效價分別為64和8；抗E 2例（6.1%），效價分別是16和128；抗Fyb、抗M各1例（3.0%），效價分別是32和8；抗P1 1例，未能測出效價值。未能鑒定出抗體特性2例（6.1%）。

2.2 RhD陰性妊娠期女性血清意外抗體定期檢測情況 376例Rh陰性受檢者中78例有2次及以上篩查結果，檢測次數為2～5次，間隔期為1～20周不等。其中10例樣本第1次篩查陽性而在隨后定期檢測抗體滴度呈現變化，包括8例呈現上升趨勢和2例下降趨勢；有4例保持不變；3例樣本第1次篩查陰性而在隨后的定期檢測呈陽性，61例（78.2%）標本第1次篩查陰性而在隨后的檢測中未發現意外抗體，見表1。

表1 兩次以上受檢者定期監測抗體效價情況

3 討論

研究顯示Rh血型系統抗原性強弱依次為D＞E＞C＞c＞e，而Rh溶血以RhD抗體最常見，其次為RhE[3]。本文結果顯示RhD陰性孕婦存在一定比例的意外抗體，以抗D為主，另外存在抗C和抗E，與文獻報道基本一致。除Rh系統抗體外，本研究中存在抗Fyb、抗M和抗P1。它們歸屬于三個不同的紅細胞血型系統。抗-M大多為IgM，人群中可天然存在，它引起HDN很罕見[4]。抗-P1屬于冷抗體，其臨床意義有限，但偶有報道抗-P1發生免疫溶血[5]。抗-Fyb可由妊娠和輸血刺激產生，已有報道抗-Fyb引起的HDN，但抗-Fyb是一個相對稀有的抗體[6]，因此其發生HDN的概率很低。

孕前或妊娠期篩查意外抗體對于優生具有重要的意義，本文結果顯示RhD抗原陰性妊娠期婦女篩查次數從1～5次，兩次篩查的間隔時間從1～20周，提示臨床上已初步具備Rh陰性女性產前篩查意外抗體的理念，但是對于如何規范篩查頻次尚缺乏統一的標準。本實驗結果中首次篩查陰性大多數隨后的檢測仍是陰性，僅2例效價增加達到4倍，因此對于首次血清意外抗體篩查陰性的RhD陰性女性，可以在妊娠20、28和34周再進行篩查[7]，以避免不必要的檢測。

意外抗體呈現陽性的受檢者中90.9%在首次篩查即被檢出，這可能與本實驗的樣本來源有關。本實驗樣本大多來源于醫院意外抗體篩查陽性而送檢的RhD抗原陰性孕婦，由于醫院已初步篩選，因此可能造成受檢者樣本中意外抗體首次篩選陽性比例較高。本研究中意外抗體陽性受檢者在定期監測中大多抗體效價呈上升趨勢，這與文獻報道一致[8-10]。隨著妊娠時間的增加，抗體效價并非恒定不變。由于抗體效價的高低與HDN疾病程度密切相關，因此建議篩查陽性的Rh陰性女性妊娠期間定期監測抗體效價，以便指導臨床采取適當的干預措施。

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[10]凌雅,高潔錦,陳香娟,等.120例Rh陰性孕婦產前抗體篩查及效價檢測的意義[J].浙江實用醫學,2010,15(5):380-382.

Retrospective study on screening of unexpected antibody in RhD-negative pregnant women

CHEN Shu,HONG Xiaozhen,XU Xianguo,

et al.Blood Centre of Zhejiang Province,Key Laboratory of Blood Safety Research,Ministry of Health,Hangzhou 310006,China

Objective To screen unexpected antibody in RhD-negative pregnant women. Methods Total 376 Rh-negative pregnant women were analyzed retrospectively.The screening of unexpected antibody and detection of antibody titer were conducted by salt medium,polyamine and antiglobulin methods. Results Unexpected antibodies were found in 33 cases accounting for 8.8%of total(33/376),including 24 cases with anti-D(72.7%),2 anti-D combined anti-C(6.1%),2 anti-E(6.1%),1 anti-Fyb(3.0%),1 anti-P1(3.0%)and 1anti-M(3.0%);and the antibodies specificity was not identified in 2 cases(6.1%).Seventy eight out of 376 cases were screened more than twice.During the follow-up among 14 positive cases 8 had increased antibodies titer,2 had decreased titer and 4 had no change;while among 64 negative cases unexpected antibodies turned to positive in 3 cases and 61 cases remained negative. Conclusion Unexpected antibodies exist in serum of RhD-negative pregnant women, which indicates that regularly screening of unexpected antibody will help to adopt intervention strategy promptly for the RhD-negative pregnant women.

Rh-negative Pregnant women Screening of unexpected antibodies

2012-11-16）

（本文編輯：胥昀）

310006 杭州，浙江省血液中心衛生部血液安全重點實驗室

何吉，E-mail:heji1016@sina.com