PARK18基因多態性與中國漢族人帕金森病的相關性

周莉莉 包瓊瓊 劉云 莊曉賽 胡喬 孫妙璇 胡艷兵 張雄

PARK18基因多態性與中國漢族人帕金森病的相關性

周莉莉 包瓊瓊 劉云 莊曉賽 胡喬 孫妙璇 胡艷兵 張雄

目的 研究PARK18基因多態性與中國漢族人群帕金森病（PD）的相關性，旨在探討PD的發病機制，為PD的風險預測提供新的遺傳標記。 方法 選取224例PD患者（PD組）及同期體檢健康者309例（對照組），采用PCR、DNA測序等方法檢測比較兩組PARK18基因多態性位點，分析rs3129882與PD遺傳易感性的相關性。 結果 兩組對象rs3129882基因型頻率和等位基因頻率分布的差異均無統計學意義（均P＞0.05）。rs3129882多態性與PD發生風險的關聯性在3種遺傳模式下均無統計學意義（均P＞0.05）。 結論 本研究暫不支持中國漢族人群中PARKl8區域rs3129882位點單核苷酸多態性與PD的發生有顯著關聯性。

帕金森病 PARK18 rs3129882 多態性 疾病遺傳易感性

帕金森病（PD）是一種常見的漸進性中樞神經系統變性疾病，其病因及發病機制至今尚不十分清楚。遺傳因素在PD病因與發病機制中的作用日益受到重視[1]。近來，歐洲研究者開展了較大規模的全基因組關聯研究（GWAS），發現了位于人類白細胞抗原（HLA）基因的一個新的易感區域，命名為PARK18，其中該區域的rs3129882位點與PD相關性最強[2]。HLA在機體免疫應答和免疫調節中起關鍵作用。有研究發現，免疫反應和炎癥過程參與PD疾病過程，在PD的發生和發展中有著重要作用[3]。因此位于HLA基因的PARK18區域可能是導致PD的重要遺傳因素。目前，盡管國內外學者己經對HLA基因多態性與PD易感性的關聯作了相關研究，但由于等位基因及其頻率存在種族及地區差異性，各地研究結果不一，尚無定論。本文通過研究PARK18基因多態性與中國漢族人群PD的相關性，旨在探討PD的發病機制，以期為早期診斷及治療提供幫助。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2008—2011我院收治的PD患者224例（PD組），診斷依據英國PD協會腦庫標準，除外遺傳及免疫性PD。其中男127例，女97例；年齡33～86（65.05±11.19）歲；早發型PD（發病年齡＜50歲）36例。另擇同期體檢健康者309例作為對照組，男188例，女121例，年齡27～90（65.11±12.27）歲；排除錐體外系及其他神經系統疾病。兩組對象均簽署知情同意書，并經醫院倫理委員會批準。兩組對象性別及年齡的差異均無統計學意義（均P＞0.05）。

1.2 方法 標本采集：取外周靜脈血2ml，肝素抗凝后-80℃冰箱保存。基因組DNA提取：采用Qiagen公司的QIAmp DNA blood mini kit血液基因組DNA提取試劑盒，從全血中提取基因組DNA。引物合成：采用Primer5.0

軟件設計，由上海捷瑞生物工程有限公司完成，正向引物序列為F：5′-ATTATTCCCTTGGTGTTGGTT-3′，反向引物序列為R：5′-TAGTTTTCCTATTATGTAGCCCTG-3′。序列測定及分析：純化產物測序委托上海申速生物公司完成。采用NCBI網站提供的Blast軟件進行比對，根據比對結果判別基因分型。

圖1 包含rs3129882多態性位點的DNA片段測序圖（箭頭所指為rs3129882基因型）

1.3 統計學處理 通過直接計數法對SNP位點基因型和等位基因頻率進行計算。采用SPSS13.0統計軟件，兩組間率的比較采用χ2檢驗。相關性檢驗采用Logistic回歸分析。

2 結果

2.1 測序結果 兩組均發現rs3129882位點的AA、AG、GG的3種基因型，PD組部分測序峰見圖1。

2.2 兩組對象rs3129882基因型頻率和等位基因頻率分布的比較 見表1。

表1 兩組對象rs3129882基因型頻率和等位基因頻率分布的比較[例（%）]

由表1可見，其差異均無統計學意義（均P＞0.05）。

2.3 Logistic回歸分析 rs3129882多態性與PD發生風險的關聯性在3種遺傳模式下均無統計學意義（顯性遺傳模式下OR=1.326，95%CI：0.937～1.878，P=0.111；隱性遺傳模式下 95%OR=1.025，CI：0.644～1.631，P=0.917；加性遺傳模式下OR=1.171，95%CI：0.909～1.508，P=0.221）。

2.4 不同臨床亞型（震顫為主型、強直型和混合型）PD患者該多態性位點的基因型和等位基因分布 見表2。

表2 不同臨床亞型PD患者該多態性位點的基因型和等位基因分布[例（%）]

由表2可見，不同臨床亞型（震顫為主型、強直型和混合型）PD患者該多態性位點的基因型和等位基因的分布差異均無統計學意義（均P＞0.05）。

3 討論

目前，散發性PD的發病機制尚未完全闡明，可能涉及免疫、遺傳、環境等諸多因素。Hamza等[2]對歐州人的研究中發現了新的PD相關區域，命名為PARK18基因。但后續有關PARK18與PD的相關性研究并不能完全重復Hamza等的研究結果，如Mata等[4]在西班牙人群及Sim n-S nchez等[5]在荷蘭人群中檢測基因rs3129882位點時未發現其與PD的發病相關。表明PARK18基因的SNP在不同的人群中與PD的相關性存在差異，其是否為PD的危險因素還需進一步研究。

PARKl8位于6p21.3，其中與PD相關性最強的SNP位點rs3129882位于HLA-DRA基因的1號內含子。rs3129882被認為是一個順式作用調節因子，其功能為調節HLA-DRA、HLA-DQA2和HLA-DRB5的表達量[6]。HLA基因是一組免疫應答基因，具有高度多態性，其基因多態性決定了HLA系統參與的免疫反應的多樣性和復雜性。關于PARK18基因多態性導致PD的易患性增加的機制仍在探索中。本研究結果暫不支持rs3129882多態性是中國人群PD的危險因素，但不能就此排除PARK18基因參與PD發病的可能性。一方面可能是由地區或者種族差異所致，另一方面也可能本研究樣本量相對較小有關。

由于PD的易感性與多基因相關，除SNCA、LRRK2等已知易感基因外，PARK16、17、18等新發現的候選基因也可能影響患者PD易感性[2,7-8]。因此中國人群PD與其它基因易感性也值得進一步研究。

[1] Hardy J.Genetic Analysis of Pathways to Parkinson Disease[J]. Neuron,2010,68(2):201-206.

[2] Hamza T H,Zabetian C P,Tenesa A,et al.Common genetic variation in the HLA region is associated with late-onset sporadic Parkinson's disease[J].Nature Genetics,2010,42(9):781-785.

[3] Puschmann A,Verbeeck C,Heckman M G,et al.Human leukocyte antigen variation and Parkinson's disease[J].Parkinsonism Relat Disord,2011,17(5):376-378.

[4] Mata I F,Yearout D,Alvarez V,et al.Replication of MAPT and SNCA,but not PARK16-18,as susceptibility genes for Parkinson's disease[J].Movement Disorders,2011,26(5):819-823.

[5] Sim n-S nchez J,van Hilten J J,van de Warrenburg B,et al. Genome-wide association study confirms extant PD risk loci among the Dutch[J].European Journal of Human Genetics,2011, 19(6):655-661.

[6] Montgomery S B,Sammeth M,Gutierrez-Arcelus M,et al.Transcrip tome genetics using second generation sequencing in a Caucasian population[J].Nature,2010,464(7289):773-777.

[7] Satake W,Nakabayashi Y,Mizuta I,et al.Genome-wide association study identifies common variants at four loci as genetic risk factors for Parkinson's disease[J].Nature Genetics,2009,41(12): 1303-1307.

[8] Pankratz N,Wilk J B,Latourelle J C,et al.Genomewide association study for susceptibility genes contributing to familial Parkinson disease[J].Human Genetics,2008,124(6):593-605.

Association between PARK18 gene polymorphisms and Parkinson's disease in Han China population

ZHOU Lili，BAO Qiongqiong，LIU

Yun，et al.Department of Neurology，the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College，Wenzhou 325027,China

Objective To investigate whether PARK18 gene polymorphism is associated with Parkinson's disease (PD)in Han Chinese population.Methods Polymerase chain reaction(PCR)and sequencing analysis were employed to determine the genotype of 224 PD patients and 309 age-matched healthy controls.The representative SNP rs3129882 in PARKl8 was analyzed and the role of rs3129882 in PD was assessed with dominant,recessive and additive model. Results No significant difference was found in allelic frequencies or genotypic distributions among different subsets of patients(P＞0.05).No association between rs3129882 and the risk of PD was detected under dominant,recessive and additive model(P＞0.05). Conclusion No evidence shows that PARK18 gene rs3129882 polymorphisms are associated with Parkinson's disease in Han Chinese population in the current study.

Parkinson's disease PARK18 locus rs3129882 Polymorphism Genetic predisposition to disease

2011-12-04）

（本文編輯：歐陽卿）

325027 溫州醫學院附屬第二醫院神經內科通信作者：張雄，E-mail：zhangxiong98@gmail.com