47例嬰幼兒巨細(xì)胞病毒感染的臨床診斷分析

丁忠英 沈國(guó)松 何平亞 方嶸 姚娟 沈?qū)W萍 張甦

47例嬰幼兒巨細(xì)胞病毒感染的臨床診斷分析

丁忠英 沈國(guó)松 何平亞 方嶸 姚娟 沈?qū)W萍 張甦

人巨細(xì)胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）是嚴(yán)重危害人體健康的病毒之一，是引起先天性及圍生期感染的重要病原體,可造成多器官、系統(tǒng)受累[1]，屬皰疹病毒科，通過(guò)人與人直接接觸傳播。HCMV多在嬰幼兒時(shí)期發(fā)病，肺、肝是重要靶器官，若不及時(shí)抗病毒治療，會(huì)影響患兒健康，嚴(yán)重者危及生命。HCMV臨床表現(xiàn)多樣，不典型，誤診率較高，明確診斷必須結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢查。因此，早期、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法顯得尤為重要。筆者通過(guò)熒光定量PCR（FQ-PCR）檢測(cè)患兒尿液及母乳中的HCMV-DNA,并與HCMV-IgM抗體檢測(cè)比較，探討FQ-PCR在患兒HCMV感染診斷和治療中的應(yīng)用價(jià)值及母乳感染HCMV對(duì)嬰幼兒的影響，以期提高HCMV感染的診斷率。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2011-01—12本院HCMV血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性、擬行HCMV-DNA定量檢測(cè)的患兒52例，其中5例患兒家屬拒絕，共47例入組，男29例，女18例，年齡11～85d，平均（43.60±0.19）d。只采集到患兒尿液樣本11例，同時(shí)采集到母乳和患兒尿液36例，診斷標(biāo)準(zhǔn)參考1999年中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)制定的CMV感染診斷方案[2]。患兒母親均無(wú)明顯感染癥狀，患兒臨床診斷：肺炎、支氣管肺炎、支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎38例，呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）肺炎2例，上呼吸道感染3例，百日咳綜合征、破傷風(fēng)2例，肝功能損傷、高膽紅素血癥11例，先天性心臟病7例，血型不合、敗血癥、血小板減少性紫癜3例。其中，肺炎誤診為支氣管炎2例，毛細(xì)支氣管炎誤診為支氣管炎1例，誤診肝受損1例，漏診肝受損2例，RSV肺炎誤診為肺炎1例。另外，14例患兒合并感染其他病原體。

1.2 儀器和試劑 采取患兒隨機(jī)尿及母乳標(biāo)本，HCMV-DNA檢測(cè)采用BIO-RAD ICYCLE PCR熒光定量分析儀、達(dá)安基因熒光定量試劑盒；HCMV血清學(xué)檢測(cè)采用ELISA方法，TORCH試劑（意大利Dia.Pro公司生產(chǎn)），VICTOPTM 1420型時(shí)間分辨熒光分析儀（美國(guó)鉑金埃爾默公司生產(chǎn)）及芬蘭Wallac公司洗板機(jī)。

1.3 方法

1.3.1 HCMV-DNA測(cè)定 采用中山大學(xué)達(dá)安基因診斷中心提供的HCMV核酸擴(kuò)增熒光定量檢測(cè)試劑盒，由專業(yè)人員嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。引物序列為正義引物5′-GCTAACTATGCAGAGCATGTA-3′，反義引物5′-GCTGAGTTCTGGTAAAGAAC-3′，TaqMan探針 5′-CTACATTGTACCCGAGGATAAGCG-3′。樣本DNA的提取按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。擴(kuò)增條件：93℃2min預(yù)變性；退火93℃×45s，延伸55℃×60s，10個(gè)循環(huán)；退火93℃× 30s，延伸55℃×45s，30個(gè)循環(huán)。每次試驗(yàn)按試劑盒提供的定量陽(yáng)性質(zhì)控校準(zhǔn)品做質(zhì)控和標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時(shí)設(shè)置陰性、空白對(duì)照。

1.3.2 HCMV-IgM抗體測(cè)定 血清樣本按ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行HCMV-IgM抗體檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1HCMV-DNA FQ-PCR與HCMV-IgM抗體檢測(cè)結(jié)果的比較 對(duì)47例HCMV-IgM血清抗體檢測(cè)陽(yáng)性患兒的尿標(biāo)本進(jìn)行HCMV-DNA FQ-PCR檢測(cè)，F(xiàn)Q-PCR陽(yáng)性44例，陰性3例，與HCMV-IgM陽(yáng)性符合率為93.63%。2.2 兩種標(biāo)本HCMV-DNA FQ-PCR檢測(cè)結(jié)果的比較對(duì)36例能同時(shí)采集到的母乳和患兒尿液進(jìn)行HCMVDNA FQ-PCR檢測(cè)，乳汁陽(yáng)性25例，尿液陽(yáng)性33例，乳汁檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性患兒的尿液均為陽(yáng)性，兩種樣本檢測(cè)方法的一致率（陽(yáng)性符合率與陰性符合率之和）為77.8%，兩種樣本檢測(cè)結(jié)果的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見(jiàn)表1。

表1 兩種標(biāo)本HCMV FQ-PCR檢測(cè)結(jié)果比較[例（%）]

3 討論

HCMV是弱致病因子，具有潛伏活動(dòng)的生物學(xué)特征[3]，分為先天性感染和圍生期感染。正常人群中育齡婦女HCMV-IgG陽(yáng)性率為40%～100%，孕次≥3次者感染HCMV的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加。本研究36例母乳HCMV-DNA FQ-PCR檢測(cè)中陽(yáng)性25例，同時(shí)其患兒的血HCMVIgM、尿液HCMV-DNA也表現(xiàn)為陽(yáng)性，說(shuō)明乳汁是嬰幼兒HCMV傳播的重要途徑[4]。因此，育齡婦女在懷孕前應(yīng)篩查是否感染HCMV，而哺乳期婦女若懷疑感染HCMV時(shí)應(yīng)常規(guī)檢測(cè)乳汁HCMV-DNA，避免或減輕新生兒HCMV感染。

HCMV在我國(guó)廣泛流行，嚴(yán)重時(shí)常累及多個(gè)系統(tǒng)、臟器，包括間質(zhì)性肺炎、心肌損害、貧血等，也可單器官受累。患兒臨床表現(xiàn)多為呼吸系統(tǒng)癥狀，且復(fù)雜多樣，缺乏特異性，早期漏診、誤診率較高。本研究中肺炎誤診為支氣管炎2例，毛細(xì)支氣管炎誤診為支氣管炎1例，誤診肝受損1例，漏診肝受損2例，RSV肺炎誤診為肺炎1例。除呼吸系統(tǒng)外，HCMV還可侵犯肝細(xì)胞和肝內(nèi)外膽管系統(tǒng)造成肝功能損害,是新生兒病理性黃疸的主要原因之一。本組資料中表現(xiàn)為T(mén)BIL、ALT、AST、GGT異常的肝功能損傷、高膽紅素血癥患兒11例，說(shuō)明HCMV感染時(shí)部分患兒已出現(xiàn)肝功能損害，可能與膽管上皮細(xì)胞被侵襲而致膽道阻塞有關(guān)[5]。患兒免疫功能較弱，在感染HCMV后宿主細(xì)胞免疫功能進(jìn)一步下降，增加了對(duì)其他病原體的易感性，本組患兒中14例合并其他病原體感染，其中7例同時(shí)檢出RSV。

HCMV感染時(shí)多數(shù)患兒表現(xiàn)隱匿，實(shí)驗(yàn)室檢查為主要診斷依據(jù)，其中病毒分離是診斷HCMV感染的金標(biāo)準(zhǔn)[6]。臨床常用的方法包括血清學(xué)測(cè)定HCMV特異抗體（即HCMV-IgM）和FQ-PCR測(cè)定HCMV-DNA。但由于IgM受人體自身生理及病理狀況的影響，易出現(xiàn)假陰性。本組患兒年齡11～85d，其細(xì)胞和體液免疫系統(tǒng)發(fā)育不成熟，感染后不能產(chǎn)生有效免疫應(yīng)答，可出現(xiàn)假陰性，因此血清HCMV-IgM檢測(cè)方法存在一定的局限性。FQ-PCR是在常規(guī)PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型HCMVDNA定量檢測(cè)法，能從分子水平上檢測(cè)HCMV感染情況及抗病毒治療效果。HCMV具有噬上皮細(xì)胞特性，易于感染在腎臟細(xì)胞內(nèi)并隨尿排出，因此可以從尿液中檢測(cè)出HCMV-DNA含量，以說(shuō)明體內(nèi)HCMV病毒的感染情況[7]。FQ-PCR檢測(cè)中采取尿標(biāo)本雖然方便，陽(yáng)性率又高，但由于腎小管間歇性排出HCMV顆粒仍然可出現(xiàn)假陰性，因此，同時(shí)檢測(cè)血清HCMV-IgM抗體和尿HCMV-DNA可提高HCMV感染的診斷率，有利于臨床分析患兒的感染情況，及時(shí)采取合理的治療方案。

[1] 吳婉芳．圍產(chǎn)期巨細(xì)胞病毒感染的診斷和治療[J]．中華兒科雜志,2001, 39(11):698-699．

[2] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)感染消化學(xué)組,中華兒科雜志編委會(huì)．巨細(xì)胞病毒感染診斷方案[J]．中華兒科雜志,1999,37(7):441．

[3] Ghisetti V,Barbui A,Franchello A,et al．Quantition of cytomegalovirus DNA by polymerase chain as a predictor of disease in solid organ transplantation[J]．J Med Virol,2004,73（2）:223-229．

[4] 陳倩,鐘天鷹,張其華．熒光定量PCR法檢測(cè)母乳巨細(xì)胞病毒感染和母嬰傳播[J]．中國(guó)優(yōu)生與遺傳,2005,13(11):42．

[5] 鄧先捷,李易娟,曾瑜,等．先天性巨細(xì)胞病毒感染的臨床研究[J]．中國(guó)當(dāng)代兒科雜志,2002,4(1):39-40．

[6] 方峰,董永綏．診治巨細(xì)胞病毒感染時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題[J]．中國(guó)實(shí)用兒科雜志,2000,15(2):86．

[7] Gohring K,Dietz K,Hartleif S,et al．Influence of different extraction methods and PCR techniques on the sensitivity of HCMVDNA detection in dried blood spot(DBS)filter cards[J]．J Clin Viral,2010,48:278-281．

2012-05-07）

（本文編輯：嚴(yán)瑋雯）

313000 湖州市婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心

張甦，E-mail:zmzdzy1985@163.com