海口地區兒童感染流感嗜血桿菌的分布情況及耐藥性分析

黃育敏，涂志華

流感嗜血桿菌(Hemophilus influenzae,Hi)是一種苛養革蘭陰性菌,常寄居于正常人呼吸道，當人機體抵抗力下降時，可引起人類呼吸道感染，兒童原發呼吸道感染之后可以繼發本菌引起的中耳炎、腦膜炎和菌血癥等。隨著流感嗜血桿菌分離率的不斷提高和其耐藥性的不斷上升，其致病性已受到普遍關注。現對2010—2011年海口地區兒童感染的流感嗜血桿菌進行回顧性分析，現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

1.1.1標本來源收集2010年1月—2011年12月海口地區住院患兒臨床送檢標本2 730份，包括痰液、咽拭子、血液、腦脊液、胸腹水等標本，共分離非重復流感嗜血桿菌158株。

1.1.2儀器及試劑全自動細菌鑒定儀分析儀VITE32及配套試劑，購自法國梅里埃公司。

1.1.3藥敏紙片和培養基氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢呋辛、頭孢他啶、左氧氟沙星、阿奇霉素、復方新諾明和Ⅴ+Ⅹ、Ⅴ、Ⅹ 因子、頭孢硝噻吩(Nitrocefin)紙片為英國Oxoid 公司產品；巧克力培養基和嗜血桿菌試驗培養基(HTM)藥敏平板購自廣州迪景生物有限公司，質控菌株為ATCC49247。

1.2方法

1.2.1細菌培養和鑒定標本接種于巧克力平板，置5%二氧化碳(CO2)、35℃培養箱培養18～24 h，挑取透明或半透明、扁平、濕潤的露滴狀疑似菌落做革蘭染色和衛星試驗，同時進行Ⅴ、Ⅹ、Ⅹ+Ⅴ因子需求試驗進行篩選，全部菌株用VITEK32系統鑒定到種。

1.2.2β-內酰胺酶測定用Nitrocefin 紙片按說明書測定被試菌株的β-內酰胺酶。

1.2.3藥敏試驗采用臨床實驗室標準協會(CLSI)推薦的紙片擴散法(Kirby-Bauer)進行，根據CLSI 2010年頒布的判斷標準進行藥敏結果判斷[1]。

1.3統計學方法采用世界衛生組織(WHO)提供的WHONET 5.6軟件進行耐藥性統計分析，耐藥率比較采用SPSS 11.0軟件進行χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1流感嗜血桿菌檢出分布情況158株流感嗜血桿菌主要分離自痰標本125株，占79.1%；其次為咽拭子18株(占11.4%)、腦脊液5株(占3.2%)、血標本4株(占2.5%)和其他標本6株(占3.8%)。見表1。

2.2β-內酰胺酶檢出情況158 株流感嗜血桿菌中，用Nitrocefin紙片法檢測有15株產β-內酰胺酶,產酶率為9.5% (15/158)，藥敏紙片法檢測氨芐西林的耐藥率為10.8%(17/158)；其中產酶株對氨芐西林全部耐藥，非產酶株中有2株對氨芐西林顯示耐藥，但兩種方法檢測氨芐西林的耐藥性比較差異無統計學意義(χ2=0.15,P>0.05)。

2.3藥敏結果158株流感嗜血桿菌對復方新諾明的耐藥率高達74.1%，對其他6種常用抗菌藥物均呈較低的耐藥水平，耐藥率均<11%。見表2。

表1　流感嗜血桿菌在各種標本中的分布情況

表2158株流感嗜血桿菌對7種常用抗菌藥物的敏感性〔n(%)〕

Table2The sensitivity of 158 strains of Haemophilus influenzae to 7 common antibiotics

抗菌藥物流感嗜血桿菌耐藥率 敏感率 氨芐西林17(10.8)138(87.3)阿莫西林/克拉維酸16(10.1)142(89.9)左氧氟沙星12(7.6)146(92.4)復方新諾明117(74.1)41(25.9)頭孢呋辛15(9.5)143(90.5)阿奇霉素10(6.3)148(93.7)頭孢他啶11(7.0)147(93.0)

3　討論

流感嗜血桿菌是兒童呼吸道感染的常見的條件致病菌，但當患兒機體免疫力低下時可進一步引起敗血癥、腦膜炎等嚴重全身性感染。本組數據顯示：2 730份患兒臨床送檢標本中共分離非重復流感嗜血桿菌158株，陽性率為5.8%，因該菌人工培養時需要特殊的Ⅴ因子和Ⅹ因子，因此培養較為困難，導致該菌臨床檢出率較低。本研究結果可見流感嗜血桿菌主要分離自痰標本,高于許浦生等[2]報道；其次為咽拭子、腦脊液和血標本等。

本研究藥敏結果顯示，流感嗜血桿菌對氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、左氧氟沙星、頭孢呋辛、頭孢他啶、阿奇霉素的耐藥率均小于11%，這些藥物對流感嗜血桿菌具有較好的抗菌活性，可作為臨床治療的首選藥物。阿莫西林/克拉維酸、頭孢呋辛、頭孢他啶對β-內酰胺酶均有抑制或抵抗作用，但作用方式有區別，克拉維酸是β-內酰胺酶不可逆的競爭型抑制劑；頭孢呋辛屬第二代頭孢菌素，對多種β-內酰胺酶較穩定；頭孢他啶屬第三代頭孢菌素，對β-內酰胺酶高度穩定，三者隨著對β-內酰胺酶穩定性的升高，對流感嗜血桿菌的敏感率也相應升高，分別為89.9%、90.5%、93.0%，此數據可作為抗菌藥物選擇參考。

國內外對流感嗜血桿菌的耐藥性研究始于20世紀70年代，發現耐氨芐西林的主要耐藥機制是細菌產生了質粒介導的β-內酰胺酶，80年代初發現了不產β-內酰胺酶的氨芐西林耐藥株。其耐藥率呈現出明顯的地區差別,在2.3%～58%之間[3-6],并有逐年上升的趨勢。本研究結果顯示對耐氨芐西林耐藥率為10.8%,與俞桑潔等[5]和汪復等[6]的報道接近,但明顯低于陳慧莉等[7]和柯永堅等[8]的報道。該菌β-內酰胺酶的產生率為9.5%，明顯低于胡艷華等[9]的報道，藥敏顯示β-內酰胺酶陽性株對氨芐西林全部耐藥，有2株β-內酰胺酶陰性而對氨芐西林耐藥(BLNAR)菌株出現，但兩種方法對氨芐西的耐藥性檢出無差異，因此用β-內酰胺酶檢測來快速預測對氨芐西林的耐藥性還是可行的。

1CLSI.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing[S].2010，M100-S20.

2許浦生,許建邦,王艷明.綜合醫院下呼吸道感染病原菌分離及動態變化[J].廣東醫學,2010,31(5):623-626.

3Stratchounski LS,Kretchikova OI,Reshedko GK,et al.Antimicrobial susceptibility of nasopharyngeal isolates of Haemophilus influenzae from healthy children in day-care centers:Results of multicentre study in Russia[J].Int J Antimicrob Agent,2001,18(4):347-351.

4Kwak YH,Jung HS,Park SE,et al.Serotype and antimicrobial susceptibility in clinical isolates of Haemophilus influenzae from Korean children in prevaccination era[J].J Korean Med Sci,2000,15(6):616-622.

5俞桑潔,沈敘莊,袁林,等.兒童社區獲得性呼吸道感染的肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌耐藥性監測[J].中國抗感染化療雜志,2005,5(5):297-300.

6汪復,朱德妹,胡付品,等.2009 年中國CHINET細菌耐藥性監測[J].中國感染與化療雜志,2010,9(5):325-334.

7陳慧莉,范紅,陶傳敏,等.連續3年流感嗜血桿菌對常用抗生素的耐藥性監測[J].華西醫學,2007,22(2):246-247.

8柯永堅,朱紅軍,肖亮生,等.流感嗜血桿菌耐藥性分析[J].實驗與檢驗醫學,2010,6(28):575-576.

9胡艷華，劉東華，魯艷.孝感地區兒童呼吸道流感嗜血桿菌感染現狀[J].中華全科醫學,2011,9(10):1549-1550.