自血穴注陽(yáng)陵泉對(duì)偏頭痛模型大鼠血漿5-羥色胺、β-內(nèi)啡肽和P物質(zhì)的影響

楊佃會(huì),馬祖彬,韓 晶,張永臣,耿 偉

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 針灸科,濟(jì)南 250011；2.單秋華全國(guó)名老中醫(yī)藥專(zhuān)家傳承工作室，濟(jì)南 250011；3.山東中醫(yī)藥大學(xué)2009級(jí)碩士研究生,濟(jì)南 250011)

偏頭痛是一種常見(jiàn)慢性神經(jīng)—血管紊亂性疾病，發(fā)病機(jī)制迄今尚不清楚[1]，但多數(shù)學(xué)者支持神經(jīng)介質(zhì)體液對(duì)偏頭痛有直接影響的學(xué)說(shuō)。近年筆者運(yùn)用耳穴綜合療法治療無(wú)先兆偏頭痛取得了明顯的臨床療效[2-3]，其作用機(jī)制有待于進(jìn)一步探討。為此采用經(jīng)典硝酸甘油偏頭痛大鼠模型,探討自體血穴位注射對(duì)偏頭痛大鼠血漿5-HT、β-EP和SP的影響，進(jìn)一步揭示自血穴注治療偏頭痛的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 30只健康雄性Wistra大鼠，體質(zhì)量220～250 g，由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。主要試劑盒:5-HT試劑盒、β-EP試劑盒和SP試劑盒均由北京永輝生物科技有限公司提供。

1.2 方法 1)模型制備:按照Cristina等[4]的經(jīng)典硝酸甘油法制備偏頭痛動(dòng)物模型，模型成立標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)硝酸甘油模型制定的標(biāo)準(zhǔn)而定。2)實(shí)驗(yàn)分組：將30只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照、模型、自血穴注3組，每組10只。正常對(duì)照組:不造模，不治療。在全麻狀態(tài)下心臟取血1.5 mL，測(cè)定5-HT，β-EP和SP。2)模型組：造模后不進(jìn)行治療。造模后1 h在全麻狀態(tài)下心臟取血1.5 mL，測(cè)定5-HT，β-EP和SP。3)自血穴注組：每只大鼠先進(jìn)行心臟穿刺取血0.6 mL，加入10%肝素鈉，標(biāo)號(hào)放入4 ℃冰箱保存。灌注生理鹽水補(bǔ)液，飼養(yǎng)24 h，第2天進(jìn)行造模，30 min后按華興邦[5]取雙側(cè)陽(yáng)陵泉，按標(biāo)號(hào)進(jìn)行自血注射，每穴注射0.3 mL，治療后30 min取血。

所有大鼠在全麻狀態(tài)下心臟取血1.5 mL，將全血注入抗凝劑試管中離心(3 000r/min，20 min)，分離血漿。吸上清液裝EP管，封存于-20 ℃冰箱待測(cè)。

1.3 檢查指標(biāo) 測(cè)定血漿中5-HT、β-EP和SP,采用酶免法，按試劑盒中說(shuō)明方法進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

各組大鼠血漿中5-HT、β-EP和SP含量變化，見(jiàn)表1。

表1 自血穴注對(duì)大鼠血漿中5-HT、β-EP和SP含量的變化(±s,n=10) ng/L

3 討論

偏頭痛指頭痛的部位偏于頭部一側(cè)，或在左，或在右，又名偏頭風(fēng)、半邊頭痛、半邊頭風(fēng)[6]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，偏頭痛病因病機(jī)比較復(fù)雜，癥見(jiàn)多端，多因風(fēng)、寒、濕、痰、瘀以及肝、腎、脾、胃等臟腑功能失調(diào)受損，復(fù)感外邪而誘使發(fā)病，導(dǎo)致清陽(yáng)不升，濁陰不降，甚至氣機(jī)逆亂，濕邪流注，痰濁內(nèi)蘊(yùn)，瘀血阻絡(luò)，寒凝氣滯，腦脈失養(yǎng)，氣機(jī)不暢而發(fā)病[7]。針灸治療取穴多采用局部取穴法、循經(jīng)取穴法、辨證取穴法及其他取穴法，多是兩種或兩種以上取穴方法結(jié)合使用[8-9]。

西醫(yī)認(rèn)為，內(nèi)源性血管活性物質(zhì)和神經(jīng)遞質(zhì)的失調(diào)導(dǎo)致了腦血管舒縮功能失常，從而誘發(fā)偏頭痛發(fā)作。5-HT既是一種活性物質(zhì)，又是一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)[10],廣泛存在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周組織中。偏頭痛發(fā)作時(shí)血中5-HT減少而尿中代謝物5-羥吲乙酸增加，所以5-HT在偏頭痛的發(fā)作過(guò)程中扮演了誘導(dǎo)和刺激的角色。P物質(zhì)是一種神經(jīng)肽，廣泛分布在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)，參與痛覺(jué)的調(diào)控，傳導(dǎo)傷害性信息，產(chǎn)生疼痛，同時(shí)具有止痛作用[11]。β-EP主要在垂體中合成，存在于丘腦、垂體、脊髓、腎上腺以及其他外周組織。馬莎等[12]認(rèn)為內(nèi)阿片肽是鎮(zhèn)痛系統(tǒng)的神經(jīng)遞質(zhì)，當(dāng)脊髓背角膠質(zhì)層神經(jīng)末梢的阿片受體內(nèi)阿片肽激活后，會(huì)有效抑制P物質(zhì)的釋放,從而抑制痛覺(jué)的傳遞。

本研究結(jié)果表明，模型組與正常組比較，5-HT和β-EP降低，P物質(zhì)升高。表明上述神經(jīng)肽的變化對(duì)偏頭痛的發(fā)作起到誘發(fā)作用。自血穴注組的5-HT和β-EP含量較模型組均有所升高,SP的含量較模型組明顯降低，說(shuō)明自血穴注能刺激大鼠大腦皮層從而使5-HT和β-EP的降解減速，降低SP的生成使P物質(zhì)的痛覺(jué)信號(hào)傳遞減弱，改善腦血管平滑肌舒縮,改善微循環(huán)[12]。但對(duì)于刺激陽(yáng)陵泉穴參與的調(diào)節(jié)機(jī)制，尚有待進(jìn)一步研究。

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