甘松揮發(fā)油的體外抑菌實驗研究

陳武

摘 要：目的：研究甘松揮發(fā)油的體外抑菌活性。方法：以水蒸氣蒸餾法對甘松揮發(fā)油進行提取，采用濾紙片法對其進行體外抑菌活性實驗。結(jié)果：甘松揮發(fā)油對白色念珠菌和沙門氏桿菌有一定抑菌作用，但對枯草桿菌的抑菌效果不明顯。

關(guān)鍵詞：甘松；揮發(fā)油；抑菌活性甘松 Nardostachys chinensis Batal.系敗醬科甘松屬植物甘松的干燥根及根莖。甘松屬植物全世界僅有3種，我國2種，分別為甘松Nardostachys chinensis Batal.及匙葉甘松N·jatamansi DC[1]。本論文主要對其揮發(fā)油進行體外抑菌活性研究，為甘松的進一步開發(fā)利用提供依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果總結(jié)如下。

1 實驗材料

1.1 藥品與試劑

藥材：甘松N.chinensis Batal.購自通化市醫(yī)藥公司，經(jīng)鑒定為敗醬科甘松屬植物甘松的干燥根及根莖。

菌株：白色念珠菌（Candida albicans）、沙門氏桿菌（Salmonella）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）為實驗室存留樣本。

培養(yǎng)基：成分為牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂20g、蒸餾水1000mL。

實驗試劑：二甲基亞砜（DMSO）；95%乙醇（長春化學(xué)試劑廠）；對照品：水楊酸（購于廣州市醫(yī)藥工業(yè)研究所）。

1.2 實驗儀器

立式壓力蒸汽滅菌鍋YXQ-LS-50S11 上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；FA-1604A電子分析天平 日本島津公司；

KQ-100E型超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；

凈化工作臺 上海新苗醫(yī)療器械有限；

ZNHW-Ⅱ型智能恒溫電熱套 鄭州長城科工貿(mào)有限公司；

SPX-150B-Z型生化培養(yǎng)箱 上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；

微量定量移液器 上海狄士醫(yī)療器械有限公司；

酒精燈；1000mL錐形瓶；培養(yǎng)皿若干；試管若干等。

2 方法與結(jié)果

2.1 甘松揮發(fā)油提取

采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，將甘松粉碎后，用揮發(fā)油提取器按常規(guī)水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后得揮發(fā)油，淡黃綠色，具有特殊嗅味。

2.2 不同濃度揮發(fā)油的配制

用DMSO溶解，配制濃度分別為50%（用微量定量移液器分別取DMSO 5μL和揮發(fā)油5μL混勻）、25%（用微量定量移液器分別取DMSO 15μL和揮發(fā)油5μL混勻）、20%（用微量定量移液器分別取DMSO 20μL和揮發(fā)油5μL混勻）。

2.3 濾紙片的制備

將普通定性濾紙用打孔機打成若干圓形紙片，直徑為5.0mm，置于干燥潔凈的培養(yǎng)皿內(nèi)，放入立式壓力蒸汽滅菌鍋中經(jīng)121.3℃、20min高壓滅菌后，取出放入恒溫干燥箱內(nèi)進行干燥。在無菌操作條件下，取干燥后的紙片一定數(shù)量，放入甘揮發(fā)油不同濃度溶液中，浸潤后備用。

2.4 培養(yǎng)基的制備

用電子天平稱取培養(yǎng)基各成分于容量為1000mL的燒杯中，并加蒸餾水1000mL于此燒杯中，將此燒杯放在電爐上加熱，并不斷攪拌使之完全溶解，1mol·L-1的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH7.0～7.5，將溶解的培養(yǎng)基平均倒入3個1000mL錐形瓶，用報紙包扎好，然后放入立式壓力蒸汽滅菌鍋中經(jīng)121.3℃、20min高壓滅菌。

2.5 菌株的培養(yǎng)

在無菌操作條件下，用接種環(huán)取沙門氏菌菌株一環(huán)，用劃線法接種在制作好的平板和固體斜面培養(yǎng)基中，然后用不同接種環(huán)分別以同樣方法對枯草芽孢桿菌、白色念珠菌進行接種。把各菌種植于37℃恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)24h，24h后取出放入4℃環(huán)境保存?zhèn)溆谩?/p>

2.6 體外抑菌實驗

分別取上述菌株的新鮮培養(yǎng)物，在無菌操作條件下，用接種環(huán)分別取不同的菌種置于三個裝有無菌蒸餾水的試管中，制成三種菌懸液，再用微量定量移液器接種菌種于平板培養(yǎng)基上，分別用不同涂布棒均勻涂布接種過不同菌種的平板培養(yǎng)基，再用無菌鑷子，將浸潤在不同濃度藥液中的紙片均勻間隔貼于各平板培養(yǎng)基表面，輕壓紙片使之接觸良好，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h后取出，觀察抑菌圈大小，測量并記錄結(jié)果，結(jié)果見表1。判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑小于9mm為低度敏感；9.1～11mm為中度敏感；11.1～15mm為高度敏感。

2.7 結(jié)果

三 結(jié)論

抑菌試驗結(jié)果表明：甘松揮發(fā)油的抑菌作用弱于對照品水楊酸，對白色念珠菌有明顯的抑菌作用，最大抑菌圈的樣品濃度為50%，并且對白色念珠菌的抑菌活性隨濃度的降低而減弱，而對沙門氏桿菌有一定的抑菌活性，最大抑菌圈的樣品濃度為50%，但對枯草芽孢桿菌無明顯抑菌效果。

[參考文獻]

[1]張毅，徐麗珍，楊世林.甘松化學(xué)成分的研究[J].中草藥，2006，37：181-183.

[2]中國藥典[S].一部.2010：58.

[3]張毅，徐麗珍，楊世林.甘松化學(xué)成分的研究（Ⅱ）[J].中草藥，2007，38（6）： 823-825.