奧沙利鉑靜脈輸液處方工藝優(yōu)化及其穩(wěn)定性考察

蘇晨霞，李健和，易利丹，彭六保（1.湖南新化縣孟公鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院，湖南 婁底 417605；.中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院藥學(xué)部，長沙 410011）

1 材料

Waters 2010高效液相色譜儀及486紫外檢測器（美國Waters公司）；AE200電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo儀器上海有限公司）；pHS-3C型酸度計（上海雷磁儀器廠）；STY-2滲透壓摩爾濃度檢測儀（北京漢柏科創(chuàng)儀器技術(shù)開發(fā)公司）。

奧沙利鉑原料藥及其對照品（長沙華美醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司，原料藥批號:20110113，純度:99.7%；對照品批號:20110127，純度:99.9%）；葡萄糖（濰坊盛泰藥業(yè)有限公司，批號:20110112，純度:99.8%）；甘露醇（廣西南寧化學(xué)制藥有限責(zé)任公司，批號:20110210，純度:99.90%）；活性炭（溧陽竹溪活性炭有限公司，批號:20110915）；奧沙利鉑靜脈輸液（中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院藥學(xué)部，批號:20110315、20110327、20110328、20110329）；甲醇為色譜純，鹽酸、氫氧化鈉、高碘酸鈉、硫酸、硫代硫酸鈉等試劑均為分析純。

2 方法

2.1 處方工藝優(yōu)化

在參考相關(guān)文獻和專利[6-7]的基礎(chǔ)上，考慮到靜脈輸液常用的等滲調(diào)節(jié)劑為葡萄糖、氯化鈉、甘露醇等，而奧沙利鉑和氯化物包括各種濃度的氯化鈉有配伍禁忌，故不采用氯化鈉。在確定奧沙利鉑靜脈輸液規(guī)格為100 ml∶100 mg的基礎(chǔ)上進行如下處方與工藝的優(yōu)化。

處方1:奧沙利鉑1.0 g，葡萄糖50 g，5%草酸溶液適量分別調(diào)節(jié)藥液pH值至2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0及未調(diào)整，注射用水加至1000 ml。工藝1:將50 g葡萄糖投入煮沸的約100 ml注射用水中，不斷攪拌使溶解后，加入相當(dāng)于濃溶液0.1%的活性炭即0.1 g，煮沸15 min后，抽濾脫炭。另將奧沙利鉑1.0 g加入40℃約500 ml注射用水中，不斷攪拌使溶解后，將上述溶液過葡萄糖溶液的炭層，混勻后，補加注射用水至950 ml，用5%草酸溶液適量分別調(diào)節(jié)藥液pH值至2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0及未調(diào)整，再補加注射用水至1000 ml。測pH值和含量，合格后，精濾，灌封，116℃熱壓滅菌40 min，即可。

處方2:奧沙利鉑1.0 g，以甘露醇51 g代替處方1中的葡萄糖，其余同處方1。工藝2:取甘露醇51 g，加入70～80℃約600 ml的注射用水中，不斷攪拌使溶解后，加入0.5%活性炭即0.3 g，攪拌，靜置15 min后，抽濾脫炭。取奧沙利鉑1.0 g加入40℃約300 ml注射用水中，不斷攪拌使溶解后，將上述溶液過甘露醇溶液的炭層，混勻后，補加注射用水至950 ml，用5%草酸溶液適量分別調(diào)節(jié)pH值至2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0及未調(diào)整，再補加注射用水至1000 ml。測pH值和含量，合格后，精濾，灌封，116℃熱壓滅菌40 min，即可。

處方3:奧沙利鉑3.0 g，甘露醇153 g，5%草酸溶液適量調(diào)節(jié)藥液pH值至4.0，注射用水加至3000 ml。工藝2:取甘露醇153 g，加入70～80℃約1800 ml的注射用水中，不斷攪拌使溶解后，加入0.5%活性炭即0.9 g，攪拌，靜置15 min后，抽濾脫炭。取奧沙利鉑3.0 g加入40℃約1200 ml注射用水中，不斷攪拌使溶解后，將上述溶液過甘露醇溶液的炭層，混勻后，補加注射用水至2850 ml，用5%草酸溶液適量調(diào)節(jié)pH值至4.0，再補加注射用水至3000 ml。測pH值和含量，合格后，精濾，灌封，樣品等分成3份，然后分別在116℃熱壓滅菌40 min、121℃熱壓滅菌15 min、121℃熱壓滅菌30 min，即可。

2.2 質(zhì)量考察

2.2.1 pH值。按2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅥH pH值測定法測定。

上述文獻為解決雙邊匹配問題提供了理論基礎(chǔ)和方法支撐，但還存在以下缺陷：①現(xiàn)有文獻缺乏對具有多種形式偏好信息的雙邊匹配問題的研究。由于匹配主體的知識結(jié)構(gòu)、個體偏好和行為習(xí)慣等方面的差異，在雙邊匹配中不同的匹配主體會給出不同形式的偏好信息，例如，主體給出的偏好信息是評價得分和語言短語等形式并存的情形；②現(xiàn)有考慮主體期望的雙邊匹配文獻中期望類型單一，缺乏對含有多種類型主體期望的討論。

2.2.2 滲透壓。按2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅨG滲透壓摩爾濃度測定法測定。

2.2.3 有關(guān)物質(zhì)。取本品，作為供試品溶液；精密量取1 ml，置于100 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為對照溶液。照含量測定項下的色譜條件，量取對照溶液20 μl，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測器靈敏度，使主成分峰峰高為滿量程的20%～25%；再取供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍，供試品溶液如顯雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積之和，不得大于對照溶液的主峰峰面積（1.0%）。

2.2.4 熱原。取本品，按2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅪD檢查，劑量按家兔體質(zhì)量每1 kg注射10 ml，應(yīng)符合規(guī)定。

2.2.5 無菌。取本品，按2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅪH檢查，應(yīng)符合規(guī)定。

2.2.6 含量測定。①奧沙利鉑:按2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅤD，采用高效液相色譜法測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:色譜柱為Polaris C18-A（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-水（10∶90，V/V），流速為0.8 ml/min；檢測波長為249 nm；進樣量為20μl；柱溫為25℃。理論板數(shù)按奧沙利鉑峰計不低于 2000。測定法:精密量取本品5 ml，置于10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒質(zhì)量的奧沙利鉑對照品適量，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 ml中含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。取上述2種溶液各10μl，注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。②葡萄糖:精密量取本品2.0 ml，置于250 ml碘量瓶中，精密加入碘液（0.1 mol/L）25 ml，緩緩滴加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 ml，搖勻，在暗處放置15 min后加稀硫酸溶液4 ml，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L）滴定，近終點時加淀粉指示液1 ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并同時將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1 ml的硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L）相當(dāng)于9.909 mg的C6H12O6·H2O。③甘露醇:精密量取本品3 ml，置于200 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻；精密量取10 ml，置碘量瓶中，精密加入高碘酸鈉溶液[取硫酸溶液（1→20）90 ml與高碘酸鈉溶液（2.3→1000）110 ml混合制成]50 ml，置水浴上加熱15 min，放冷，加碘化鉀試液10 ml，密塞，放置5 min，用硫代硫酸鈉滴定液（0.05 mol/L）滴定，至近終點時，加淀粉指示液1 ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1 ml硫代硫酸鈉滴定液（0.05 mol/L）相當(dāng)于0.9109 mg的C6H14O6。

2.3 穩(wěn)定性考察

2.3.1 影響因素試驗。取批號20110315的奧沙利鉑靜脈輸液置高溫[（40±2）、（60±2）℃]，低溫0～5℃以及光照（4500±500）lx條件下，于第0、5、10天取樣，考察性狀、pH值、溶液顏色、有關(guān)物質(zhì)、可見異物及含量，并與0 d的數(shù)據(jù)進行比較分析。

2.3.2 加速試驗。取模擬上市包裝的奧沙利鉑靜脈輸液3批，在溫度（40±2）℃、相對濕度（75±5）%的條件下，于第0、1、2、3、6個月取樣，考察性狀、pH值、溶液顏色、有關(guān)物質(zhì)、可見異物及含量，并與0個月的數(shù)據(jù)進行比較分析。

2.3.3 長期試驗。取模擬上市包裝的奧沙利鉑靜脈輸液3批，在溫度（25±2）℃、相對濕度（60±10）%的條件下，于第0、3、6、9、12個月取樣，考察性狀、pH值、溶液顏色、有關(guān)物質(zhì)、可見異物及含量，并與0個月的數(shù)據(jù)進行比較分析。12個月后仍須繼續(xù)考察，以便確定藥品的有效期。

3 結(jié)果

3.1 處方工藝優(yōu)化的考察

各處方工藝優(yōu)化的考察結(jié)果分別見表1、表2、表3。

表1 以葡萄糖為等滲調(diào)節(jié)劑的樣品質(zhì)量考察結(jié)果Tab 1 Results of quality inspection of samples with glucose as the isotonic regulator

表2 以甘露醇為等滲調(diào)節(jié)劑的樣品質(zhì)量考察結(jié)果Tab 2 Results of quality inspection of samples with mannitol as the isotonic regulator

由表1可見，以葡萄糖調(diào)節(jié)等滲的奧沙利鉑靜脈輸液在同一滅菌條件不同pH值范圍內(nèi)，藥液滅菌前后性狀、pH值、可見異物、滲透壓等基本上無明顯變化；滅菌前有關(guān)物質(zhì)檢查均符合規(guī)定，但滅菌后所有藥液有關(guān)物質(zhì)含量均在1%以上；滅菌后奧沙利鉑含量較滅菌前有所降低。故以葡萄糖調(diào)節(jié)奧沙利鉑靜脈輸液滲透壓的系列處方均不符合規(guī)定，應(yīng)予淘汰。

由表2可見，以甘露醇調(diào)節(jié)等滲的奧沙利鉑靜脈輸液在同一滅菌條件不同pH值范圍內(nèi)，除pH值未用5%草酸溶液調(diào)節(jié)的藥液pH值下降幅度較大，以及pH 2.5條件下滅菌前后有關(guān)物質(zhì)含量超過2%且滅菌后奧沙利鉑含量較滅菌前下降外，其余進行了pH值調(diào)節(jié)的藥液在不同pH值范圍內(nèi)滅菌前后各項檢查均符合規(guī)定。表明以甘露醇調(diào)節(jié)等滲的奧沙利鉑靜脈輸液穩(wěn)定性良好，滅菌前后的滲透壓在人體正常的生理范圍（280～310 mOsmol/kg）內(nèi)。在此基礎(chǔ)上，并參考國外專利[6]的報道結(jié)果，確定本研制開發(fā)的奧沙利鉑靜脈輸液以甘露醇為等滲調(diào)節(jié)劑，pH值范圍為3.0～4.5，生產(chǎn)中一般控制pH值在4.0左右。

表3 同一pH值不同滅菌條件下的樣品質(zhì)量考察結(jié)果Tab 3 Results of quality inspection of samples with same pH value under different sterilization conditions

由表3可見，在同一pH值不同滅菌條件下奧沙利鉑靜脈輸液滅菌前后各項考察指標(biāo)均無明顯變化，并且各項檢查均符合規(guī)定。考慮到國內(nèi)外輸液制劑中的滅菌條件多采用116℃熱壓滅菌40 min，故確定本研究開發(fā)的奧沙利鉑靜脈輸液的滅菌條件也為116℃熱壓滅菌40 min。

3.2 最佳處方工藝確定

綜上所述，得奧沙利鉑靜脈輸液的最佳處方為:奧沙利鉑1.0 g，甘露醇51 g，5%草酸溶液適量調(diào)節(jié)藥液pH值至3.0～4.5（生產(chǎn)中一般控制pH值在4.0左右），注射用水加至1000 ml。最佳工藝為:取甘露醇51 g，加入70～80℃注射用水約600 ml中，不斷攪拌使溶解后，加入0.5%活性炭即0.3 g，攪拌，靜置15 min后，抽濾脫炭；另將奧沙利鉑1.0 g加入40℃約300 ml注射用水中，不斷攪拌使溶解后，將上述溶液過甘露醇溶液的炭層，混勻后，補加注射用水至950 ml，用5%草酸溶液適量調(diào)pH值至3.0～4.5（生產(chǎn)中一般控制pH值在4.0左右），補加注射用水至1000 ml，混勻。測pH值和含量，合格后，精濾，灌封于100 ml玻璃瓶中，116℃熱壓滅菌40 min，即得。

3.3 穩(wěn)定性考察

影響因素試驗中除在光照、高溫（60±2）℃條件下pH值略有升高、有關(guān)物質(zhì)有所增加，以及高溫（60±2）℃條件下顏色略有加深外，其他各項考察指標(biāo)均無明顯變化。pH值、有關(guān)物質(zhì)及含量的測定結(jié)果見表4。

加速試驗中除有關(guān)物質(zhì)有呈上升的趨勢，但仍在＜1.0%的合格范圍內(nèi)外，其他各項考察指標(biāo)基本無明顯變化；加速試驗6個月無菌和熱原檢查仍合格。pH值、有關(guān)物質(zhì)及含量的測定結(jié)果見表5，表明本品在本加速試驗條件下放置6個月較為穩(wěn)定。

表4 影響因素試驗考察結(jié)果Tab 4 Results of influencing factor tests

表5 加速試驗和長期試驗考察結(jié)果Tab 5 Results of accelerated test and long-term test

長期試驗12個月后，各項考察指標(biāo)與0個月比較均基本上無變化，且無菌和熱原檢查仍合格。pH值、有關(guān)物質(zhì)及含量的測定結(jié)果見表5，表明本品在長期試驗條件下放置12個月較為穩(wěn)定。有效期暫定為12個月，貯存條件為:遮光、密閉保存。

4 討論

國外專利[6]報道規(guī)格為20 ml∶100 mg的奧沙利鉑注射液的研究結(jié)果如下:（1）奧沙利鉑注射液的濃度范圍為1～7 mg/ml，較好濃度范圍為1～5 mg/ml，最佳濃度范圍為2～5 mg/ml。（2）奧沙利鉑注射液在一般常用的枸櫞酸、醋酸、甘氨酸和磷酸等緩沖溶液中不穩(wěn)定，pH值調(diào)節(jié)劑一般采用草酸、草酸鈉或二者的混合溶液，且以草酸為最佳。在藥液中草酸的濃度范圍一般為5×10－5～ 1×10－2mol/L，較好的濃度范圍為5×10－5～2×10－3mol/L，最佳濃度范圍為2×10－4～ 4×10－4mol/L。（3）奧沙利鉑注射液pH值范圍一般為2～6，較好范圍為2～5，最佳范圍為3.0～4.5。（4）溶解奧沙利鉑的最佳溫度為40 ℃。（5）奧沙利鉑注射液制備過程中，灌封的容器中充或不充惰性氣體如氮氣對其質(zhì)量無影響。（6）奧沙利鉑注射液在充或不充氮氣的條件下于121℃分別熱壓滅菌15、30、45、120 min對其質(zhì)量無影響。（7）溶媒一般采用注射用水、糖溶液（如葡萄糖、甘露醇等）。本研究所得結(jié)果與上述專利報道的結(jié)果有相似之處，進一步證明本處方及工藝合理、可行。

處方中奧沙利鉑為主藥；甘露醇為等滲調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)輸液的滲透壓至人體正常的生理范圍；草酸為pH值調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)輸液的pH值至3.0～4.5，達最佳pH值范圍；注射用水作為溶媒；活性炭起吸附熱原、助濾脫色的作用。

在參考相關(guān)文獻[8-11]的基礎(chǔ)上，采用高效液相色譜法測定奧沙利鉑的有關(guān)物質(zhì)及含量。奧沙利鉑為手性藥物，具有旋光性，故質(zhì)量考察中不能采用旋光法測定葡萄糖的含量，而是采用碘量法測定葡萄糖含量。

奧沙利鉑水溶液放置時間過長，會不同程度地產(chǎn)生3種降解產(chǎn)物，使其制劑的毒副作用增加。故研制開發(fā)一種不產(chǎn)生上述降解產(chǎn)物、穩(wěn)定性良好且方便臨床應(yīng)用的奧沙利鉑靜脈輸液是十分必要的。

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