GP73在原發(fā)性肝癌診斷中的應(yīng)用及臨床意義

趙京忠，李 嘉，樊春紅，張恒輝

（北京大學(xué)人民醫(yī)院1.檢驗(yàn)科；2.肝病科，北京100044）

原發(fā)性肝癌（HCC）是世界上第五種最常見癌癥，HCC標(biāo)化發(fā)病率為21／10萬，死亡率為20.2／10萬［1］。HCC死亡率高。如能及早診斷，可以采取手術(shù)切除或射頻消融等有效手段進(jìn)行干預(yù)，可改善預(yù)后。

高爾基體蛋白73（GP73）又稱高爾基體Ⅱ型跨膜蛋白，存在于高爾基體上。2000年由Kladney首先描述［2］。2005年Blockz應(yīng)用352例患者的研究顯示，對(duì)于早期HCC的診斷，GP73要早于AFP［3］。至今，全世界多個(gè)研究組對(duì)GP73進(jìn)行研究，但缺乏適于臨床大規(guī)模應(yīng)用的辦法。本研究旨在探討GP73用于HCC的診斷意義及在術(shù)后監(jiān)測(cè)方面的應(yīng)用。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 納入研究的為我院2010年3月至2011年3月收治的HCC患者126例，腸癌患者10例，肺癌患者20例，卵巢癌患者14例，胃癌患者20例，乳腺癌患者6例及同期健康查體人員107例。HCC患者診斷標(biāo)準(zhǔn)按照2010年NCCN指南操作。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)本采集 患者及查體者均清晨空腹采集靜脈血3ml，采血管為一次性真空促凝管，標(biāo)本采集后室溫自然凝集30分鐘，以3 000r／min離心10分鐘，取上層血清放入EP管并盡快存放于－70℃冰箱待檢。

1.2.2 血清GP73測(cè)定GP73 采用酶聯(lián)免疫吸附原理檢測(cè)，試劑盒由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)操作完全按產(chǎn)品說明書要求進(jìn)行。測(cè)定時(shí)將血漿快速復(fù)融至室溫，并盡快檢測(cè)。

1.2.3 AFP測(cè)定 采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，試劑由Roche公司提供，規(guī)格為100T／盒。儀器使用Elecsys170全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)，Roche公司生產(chǎn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。統(tǒng)計(jì)結(jié)果描述以±s表示，GP73使用單因素方差分析，以P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GP73在HCC組中的濃度顯著高于其他腫瘤疾病組及健康對(duì)照組的濃度（表1）。

表1 GP73在多種腫瘤患者中血清濃度結(jié)果

HCC組GP73濃度與其他各腫瘤組（腸癌，肺癌，卵巢癌，胃癌，乳腺癌）及健康對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.001。

2.2 相關(guān)分析：AFP與GP73檢測(cè)結(jié)果r＝0.434，沒有顯著相關(guān)性。也就是說，GP73為HCC獨(dú)立判斷因素。

2.3 取100例HCC患者測(cè)定GP73與AFP檢測(cè)靈敏度結(jié)果，見表2。

可見，單獨(dú)使用AFP陽性率為52%，單獨(dú)使用GP73陽性率為64%，如將兩指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)將可使HCC檢出率達(dá)到88%，顯著提高陽性率。

2.4 隨訪HCC肝手術(shù)后41例生存，20例死亡患者GP73濃度變化情況，結(jié)果如表3。

表2 HCC患者GP73與AFP檢測(cè)靈敏度分析

可見，術(shù)后GP73濃度逐漸下降，且1年后觀測(cè)值生存組下降顯著快于死亡組患者。GP73用于臨床術(shù)后監(jiān)測(cè)有一定參考指導(dǎo)意義。

表3 HCC隨訪1年GP73濃度（ng／ml）變化情況

3 討論

目前AFP用于HCC主要是篩查，有一定的漏檢率，而HCC早期的發(fā)現(xiàn)至關(guān)重要，故尋找優(yōu)于AFP的常規(guī)檢查指標(biāo)意義重大。研究發(fā)現(xiàn)GP73近些年用于HCC的診斷有一定的價(jià)值。

GP73即Ⅱ型高爾基體膜蛋白，是一個(gè)跨膜糖蛋白，正常情況下通過一個(gè)膜生成結(jié)構(gòu)域錨定在順面高爾體膜上［2］。在弗林蛋白酶的作用下發(fā)生水解反應(yīng)，裂解其胞外結(jié)構(gòu)域，并釋放到細(xì)胞外液中。在正常肝臟，GP73主要在膽管上皮細(xì)胞中表達(dá)，而在肝細(xì)胞則很少表達(dá)甚至不表達(dá)［4］。

本文結(jié)果顯示GP73在HCC中有較高的表達(dá)，顯著高于其他腫瘤。可以作為HCC的一種血清標(biāo)志物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在其他腫瘤患者中，GP73也有一定程度的升高，可見HCC可能是一種有重要臨床價(jià)值的輔助診斷的血清腫瘤標(biāo)志物。但本實(shí)驗(yàn)中選取的腸癌，乳腺癌患者較少，可能對(duì)分析結(jié)果有一定影響。

研究顯示，HCC患者GP73陽性率64%，AFP陽性率52%，對(duì)于HCC的篩查顯然陽性率偏低，不能滿足臨床的強(qiáng)烈需求，而如果將GP73與AFP聯(lián)合檢測(cè)將可使陽性率升至88%，對(duì)于篩查效果有較大的提高。資料表明，AFP在HCC的顯著升高發(fā)生于HCC發(fā)生侵襲時(shí)，而GP73不受癌腫大小，數(shù)量侵襲等因素影響［5］。但GP73與AFP并無相關(guān)性，GP73為HCC一個(gè)獨(dú)立的判斷因素。

我們對(duì)有1年隨訪記錄的61例HCC接受手術(shù)治療的患者進(jìn)行分析顯示，隨訪患者術(shù)后GP73濃度均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，且生存組比死亡組下降趨勢(shì)更明顯。故我們認(rèn)為GP73對(duì)HCC患者手術(shù)預(yù)后的判斷有一定價(jià)值，可作為有效的參考指標(biāo)。

目前，AFP仍然是臨床用于HCC診斷的最重要篩查指標(biāo)，GP73的相關(guān)分子機(jī)制尚未明了，而其臨床應(yīng)用價(jià)值已經(jīng)得到一定驗(yàn)證。故GP73的應(yīng)用以及GP73與AFP的聯(lián)合檢測(cè)可能將為臨床提供更好的診斷參考，指導(dǎo)HCC的早期診斷，治療與預(yù)后觀察，降低HCC復(fù)發(fā)率及死亡率。

［1］徐海峰，楊華渝，張宏冰，等.改變肝癌早期診斷和治療現(xiàn)狀的新肝癌血清標(biāo)志物［J］.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2008，28：104.

［2］Kladney RD，Bulla GA，Guo L，et al.GP73，a novel Golgi－localized protein upregulated by viral infection［J］.Gene，2000，249（1－2）：53.

［3］Block TM，Comunale MA，Lowman M，et al.Use of targeted glycoproteomics toidentify serum glycoproteins that correlate with liver cancer in woodchucks and humans［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2005，102（3）：779.

［4］Kladney RD，Cui X，Bulla GA，et al.Expression of GP73，a resident Golgi membrane protein，in viral and nonviral liver disease［J］.Hepatology，2002，35（6）：1431.

［5］Benzoni E，Lorenzin D，F(xiàn)avero A，et al.Liver resection for hepatocellular carcinoma：a multivariate analysis of factors associated with improved prognosis.The role of clinical，pathological and surgical related factor［J］.Tumori，2007，93（3）：264.