杭州地區258株呼吸道感染腸桿菌科細菌的ESBLs檢測及分析

張瓊麗 葛閩霞 陳曉燕 杭州市濱江區長河街道社區衛生服務中心 杭州 310052

杭州地區258株呼吸道感染腸桿菌科細菌的ESBLs檢測及分析

張瓊麗 葛閩霞 陳曉燕 杭州市濱江區長河街道社區衛生服務中心 杭州 310052

呼吸道感染 腸桿菌科細菌 超廣譜β-內酰胺酶 耐藥率

近年來，產ESBLs的革蘭陰性細菌已成為較常見的呼吸道感染耐藥病原菌。為了解該類菌株在杭州地區的流行病特征，對我院住院及門診患者呼吸道分離出的258株腸桿菌科細菌進行ESBLs檢測，報道如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 本院2011年2月—2012年8月住院及門診患者送檢的合格痰液標本中分離培養出常見腸桿菌科細菌258株，標本均從下呼吸道經深咳、吸痰管或氣管插管吸引留取，標本經革蘭染色，鏡檢鱗狀上皮細胞≤10∕HP，多核白細胞≥25∕HP為合格痰標本。質控菌株：大腸埃希菌ATCC 25922、肺炎克雷伯菌ATCC 700603由中國藥品生物制品檢定所提供。

1.2 檢測方法 病原菌菌株的分離與鑒定標本的采集、送檢、處理與接種培養依據《全國臨床檢驗操作規程》，分離出的病原菌采用法國梅里埃ATB152微生物分析系統。藥敏試驗培養基和藥敏紙片M-H瓊脂及藥敏紙片購自英國OXOID公司。

1.3 ESBLs測定 嚴格按照NCCLS規定的確證試驗方法操作，在M-H瓊脂上分別貼上含及不含克拉維酸的頭孢他啶及頭孢噻肟紙片對比。任何一種含克拉維酸的藥敏紙片比不含克拉維酸的相應紙片抑菌環直徑≥5mm為ESBLs陽性，大腸埃希菌ATCC 25922在每對二紙片間直徑差≤2mm，肺炎克雷伯菌ATCC 700603在頭孢他啶一對紙片中的抑菌直徑差≥5mm，在頭孢噻肟一對紙片中相差≥3mm為本方法的質控標準，本研究中的質控測定均在以上合格范圍之內。

1.4 統計學方法 應用SPSS11.0統計軟件，計量資料采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗。

2 結 果

2.1 腸桿菌科細菌產ESBLs檢出率 258株腸桿菌科細菌中產ESBLs陽性共99株，總陽性率38.4%，見表1。

表1 腸桿菌科主要菌種ESBLs檢出率

2.2 感染產ESBLs菌的危險因素 使用三代頭孢、免疫抑制劑和各類激素時間長、住ICU時間久的患者感染ESBLs陽性菌的概率顯著增加，見表2。

表2 感染ESBLs菌的易患因素

2.3 ESBLs陽性菌株與ESBLs陰性菌株耐藥率比較 99株產ESBLs的腸桿菌科細菌對亞胺培南全部敏感，對頭孢唑啉、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢哌酮、頭孢他啶等頭孢類抗菌藥物的耐藥率高達96.7%，但是對頭孢哌酮∕舒巴坦的耐藥率較低，僅為18.2%；對阿米卡星的耐藥率為51.4%。見表3。

表3 ESBLs陽性菌株與ESBLs陰性菌株耐藥率比較 %

3 討論

ESBLs是一類能水解大多數青霉素類、頭孢菌素和氨曲南的β-內酰胺酶，由TEM、SHVβ-內酰胺酶1～4位點氨基酸序列發生改變而形成。ESBLs主要由腸桿菌科細菌產生，以大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和陰溝腸桿菌最為常見。產ESBLs菌株不僅對第3代頭孢菌素和氨曲南耐藥，而且對氨基糖苷類、喹諾酮類和磺胺類抗菌藥物亦呈交叉耐藥。ESBLs由質粒介導，可通過接合、轉化和傳導等方式在細菌種屬間進行傳遞，細菌一旦獲得產生ESBLs的能力，即表現為對大多數青霉素和頭孢菌素類抗菌藥物產生耐藥，并因其耐藥基因編碼位點常與其他的耐藥基因相鄰或連接而導致對氨基糖苷類、喹諾酮類和磺胺類藥物耐藥，所以產ESBLs的細菌往往具有多重耐藥特性［1］。由于臨床抗菌藥物的不規范應用，致使下呼吸道感染病原菌構成譜不斷發生變化。從上世紀90年代以后，革蘭陰性菌逐漸成為引起下呼吸道感染的主要致病菌。近年隨著β-內酰胺酶類抗生素的大量使用，導致產ESBLs的菌株明顯增加。

在不同國家和不同醫院ESBLs的檢出率不同。在美國各家醫院中，腸桿菌科細菌ESBLs的檢出率為2%～13%，西班牙為28.2%。荷蘭和法國大腸埃希菌ESBLs的檢出率分別為1.3%和19%，肺炎克雷伯菌ESBLs的檢出率為18.4%和10.1%。在亞洲一些國家和地區2種菌ESBLs的檢出率韓國為14%，日本為1.5%，香港為12%［2］。本研究顯示腸桿菌科細菌的ESBLs檢出率為38.4%，與國內腸桿菌科細菌產ESBLs的發生率（20%～40%之間）［3］相近。

患有慢性消耗性疾病、外科手術損傷、創傷、外傷的患者和長期大量使用廣譜抗菌藥物的人群均可引起菌群失調及自身免疫力下降，易感染產ESBLs菌［4］。近年來臨床應用氣管插管、氣管切開及呼吸機等侵襲操作增多，易使消化道的革蘭陰性定植菌異行而致下呼吸道感染［5］。研究提示，年齡和性別對患者感染產ESBLs菌無影響，長期使用三代頭孢菌素，使用免疫抑制劑的患者，受過手術創傷，留置過導尿管等創傷性操作的患者容易感染ESBLs（P＜0.05）。

觀察藥敏結果，發現產ESBLs菌株對很多β-內酰胺類藥物顯多重耐藥性，可能因為該類細菌同時攜帶了耐多類藥物的基因。對含β-內酰胺酶抑制劑復合制劑如頭孢哌酮∕舒巴坦較敏感，而對阿莫西林∕克拉維酸明顯耐藥；對氨基糖苷類、氟喹諾酮類多數耐藥（阿米卡星除外），而且對復合磺胺亦高度耐藥，這種情況可能的原因是攜帶ESBLs的菌株表現對其他抗生素的交叉耐藥性；產酶株和非產酶株對亞胺培南全部敏感，抗菌活性最強，可能因為其β-內酰胺環較小極易進入細菌的微孔蛋白通道，以及特異的反式結構，使其對β-內酰胺酶具有高度的穩定作用，從而顯示出強大的抗菌活性。碳青霉烯類抗菌藥物應為臨床上治療產ESBLs菌株感染的首選藥物。

開展細菌耐藥性監測，及時掌握臨床分離病原菌的菌種分布及耐藥性變遷動態，對制訂抗感染治療策略，指導合理應用抗菌藥物進行有效治療具有重要意義。

［1］耿燕，劉原，張王剛，等.超廣譜β-內酰胺酶菌株的分布及耐藥性分析［J］.第四軍醫大學學報，2003，23（13）: 1243-1245.

［2］杜軍，李敏，崔景榮，等.產超廣譜β-內酰胺酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的檢測及耐藥分析［J］.寧夏大學學報（自然科學版），2008，29（2）:169-171.

［3］陶勇，姚杰，賈建安，等.856株下呼吸道感染腸桿菌科細菌的ESBLs檢測及相關分析［J］.臨床肺科雜志，2009，14（5）:614-615.

［4］李憲，杜鵬超.140株腸桿菌科細菌ESBLs檢測及藥敏結果分析［J］.中華微生物和免疫學雜志，2001，21（12）增刊：78-80.

［5］Volturo GA，Low DE，Aghababian R.Managing acute lower respiratory tract infections in an era of antibacterial resistance［J］.Am JEmergMed，2006，24（3）:329-342.

修回日期：2013-01-12

2012-12-26