川芎嗪對(duì)大鼠腸粘連組織MMP-9、TIMP-1和細(xì)胞因子表達(dá)的影響

戴春山 徐王磊 王雄華 沈 剛 沈 潛 陳 彬 浙江省寧波市中醫(yī)院外一科 寧波315010

川芎嗪對(duì)大鼠腸粘連組織MMP-9、TIMP-1和細(xì)胞因子表達(dá)的影響

戴春山 徐王磊 王雄華 沈 剛 沈 潛 陳 彬 浙江省寧波市中醫(yī)院外一科 寧波315010

目的：觀察川芎嗪對(duì)腸粘連模型大鼠粘連腸組織基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）表達(dá)及血清白細(xì)胞介素-1（IL-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β）水平的影響，探討川芎嗪預(yù)防腸粘連作用機(jī)制。方法：72只SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、手術(shù)組及川芎嗪組，每組18只。正常對(duì)照組不行手術(shù)，假手術(shù)組僅行腹腔開(kāi)關(guān)術(shù)，川芎嗪組術(shù)后每天腹腔注射川芎嗪溶液10mL（凈含川芎嗪約0.1g），其余三組注射等量生理鹽水。各組于術(shù)后第2、7、14天取血，肉眼觀察腸粘連的程度分級(jí)；酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清細(xì)胞因子IL-1、TNF-α、TGF-β。免疫組織化學(xué)染色加圖像分析法觀測(cè)MMP-9及TIMP-1表達(dá)。結(jié)果：手術(shù)組及川芎嗪組腸粘連程度顯著增加（P＜0.05），與手術(shù)組比較，川芎嗪組腸粘連程度明顯減輕（P＜0.05）。與手術(shù)組比較，川芎嗪組IL-1、TNF-α及TGF-β水平均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。術(shù)后2天，與手術(shù)組比較，川芎嗪組腸組織MMP-9表達(dá)顯著降低（P＜0.05），TIMP-1未見(jiàn)明顯改變（P＞0.05）。術(shù)后7天及14天，川芎嗪組腸組織TIMP-1表達(dá)較手術(shù)組有顯著增高（P＜0.05），MMP-9無(wú)明顯改變（P＞0.05）。結(jié)論：川芎嗪可能通過(guò)影響血細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α和TGF-β1水平及腸組織MMP-9和TIMP-1表達(dá)，一定程度上抑制大鼠腸粘連。

大鼠 腸粘連 川芎嗪 MMP-9 TIMP-1 IL-1β TNF-α TGF-β1

川芎嗪是傳統(tǒng)中藥川芎的主要成分之一，具有行氣活血，祛風(fēng)止痛功效。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)川芎嗪具有預(yù)防術(shù)后腸粘連的作用。腹腔粘連是腹部手術(shù)后常見(jiàn)的并發(fā)癥和引起腸梗阻最常見(jiàn)的原因。近年研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）的合成和降解與腹腔粘連形成有著密切關(guān)系，而降解ECM最重要的酶屬M(fèi)MPs[1-2]。研究顯示，MMP-9與術(shù)后腸粘連有著密切關(guān)系，且可作為粘連形成的一種標(biāo)志物[3-5]。本研究觀察川芎嗪對(duì)腸粘連模型大鼠腸組織基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）表達(dá)及血清白細(xì)胞介素-1（interleukin-1，IL-1）腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforminggrowthfactor-β，TGF-β）水平的影響，探討川芎嗪預(yù)防腸粘連的作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1動(dòng) 物 SD雄性大鼠，體質(zhì)量200～250g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：X1002105。實(shí)驗(yàn)前飼養(yǎng)于室內(nèi)適應(yīng)環(huán)境1周，室溫16～22℃，濕度50%～70%。

1.2藥 物 注射用鹽酸川芎嗪（性狀：粉劑，規(guī)格：0.12g/支，由哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H20030553）。

1.3主要試劑及 儀器 DENLEY DRAGON Wellscan MK3酶標(biāo)儀（芬蘭Thermo生產(chǎn)）；IL-1、TNF-α及TGF-β試劑盒（上海西唐生物有限公司提供）；MMP-9、TIMP-1單抗（杭州達(dá)文生物有限公司提供）；離心機(jī)11-07（上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1模型制備 動(dòng)物禁食12h禁水4h，以10%水合氯醛溶液0.3mL/100g腹腔注射麻醉后仰臥位固定，剪毛、消毒、鋪無(wú)菌巾；取下腹部正中切口約2cm，找出回盲部，在距回盲部約5cm處取10cm長(zhǎng)一段回腸，用銼刀反復(fù)輕輕擦拭回腸漿膜層（約0.5cm× 10cm）至表面有針尖狀出血點(diǎn)，再滴1滴無(wú)水乙醇于創(chuàng)面上，無(wú)齒鑷夾持盲腸系膜動(dòng)脈2min，使局部缺血，回納腸管后絲線關(guān)閉腹腔。

2.2分組及給藥 72只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、手術(shù)組和川芎嗪組，每組18只。川芎嗪組術(shù)后第一天起，腹腔注射1∶100川芎嗪溶液10mL（凈含川芎嗪約0.1g），每天1次；其余三組給予等量的生理鹽水10mL，腹腔注射。

2.3觀察指標(biāo)及方法

2.3.1腸粘連程度評(píng)估 四組分別于術(shù)后第2、7、14天，隨機(jī)取出6只，10%水合氯醛溶液0.3mL/100g腹腔注射麻醉，腹部取U形切口開(kāi)腹。觀察腸粘連程度，并按Phillips分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定等級(jí)[6]：0級(jí)：完全無(wú)粘連，回腸漿膜面修復(fù)良好；Ⅰ級(jí)：回腸與周?chē)M織少量粘連，疏松易分，無(wú)滲血；Ⅱ級(jí)：回腸與周?chē)M織輕到中度粘連，腸管可呈“U”形，分離時(shí)局部有滲血；Ⅲ級(jí)：腸管與周?chē)M織廣泛粘連，較難分離，無(wú)腸梗阻；Ⅳ級(jí)：腸管與周?chē)M織緊密粘連成團(tuán)，分離困難，引起腸梗阻。

2.3.2血清IL-1、TNF-α及TGF-β測(cè)定 暴露腹主動(dòng)脈，5mL針筒穿刺采血置促凝管，室溫靜置，以4000r/min離心15min，分離血清，留取血清存于超低溫冰箱保存待測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清IL-1、TNF-α及TGF-β水平。

2.3.3粘連腸組織MMP-9及TIMP-1檢測(cè) 摘取粘連腸壁組織0.5cm，若無(wú)粘連形成，在距回盲部5cm處取腸管0.5cm。所有標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋切片，HE染色，光鏡觀察創(chuàng)面修復(fù)情況。免疫組織化學(xué)染色加圖像分析法觀測(cè)MMP-9及TIMP-1表達(dá)量。

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析，等級(jí)資料用Ridit分析，應(yīng)用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)汁分析。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1各組大鼠腸粘連程度比較 正常對(duì)照組大鼠出現(xiàn)Ⅰ級(jí)腸粘連1只，假手術(shù)組3只；川芎嗪組大鼠Ⅰ級(jí)腸粘連9只，Ⅱ級(jí)腸粘連8只，Ⅲ級(jí)腸粘連1只；手術(shù)組大鼠出現(xiàn)Ⅰ級(jí)腸粘連6只，Ⅱ～Ⅳ級(jí)腸粘連各4只。與正常對(duì)照組、假手術(shù)組比較，手術(shù)組及川芎嗪組腸粘連程度更顯著（P＜0.05）；與手術(shù)組比較，川芎嗪組腸粘連程度明顯減輕（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠腸粘連比較 只

3.2腸組織光鏡下觀察結(jié)果 正常對(duì)照組、假手術(shù)組大鼠回腸漿膜層間皮細(xì)胞連續(xù)，無(wú)明顯炎癥反應(yīng)。手術(shù)組及川芎嗪組大鼠術(shù)后2天，漿膜層部分創(chuàng)面被一層細(xì)胞所覆蓋，且該細(xì)胞層由一層邊緣清晰的纖維蛋白支架支持，此層細(xì)胞增生，呈條索狀或小片狀，有的呈立方形或高柱狀；創(chuàng)面表面還可見(jiàn)纖維蛋白滲出形成一條紅染的邊緣清晰的黏附帶，伴大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，見(jiàn)圖2（封二）。術(shù)后1周手術(shù)組可見(jiàn)漿膜受損面未修復(fù)，間質(zhì)細(xì)胞不連續(xù)，粘連組織內(nèi)各類(lèi)細(xì)胞明顯增多，巨噬細(xì)胞增多，成纖維細(xì)胞增生活躍，大量膠原纖維致密排列，毛細(xì)血管增生明顯。川芎嗪組漿膜剝離面多已修復(fù)，間皮細(xì)胞較連續(xù)排列，膠原纖維排列疏松，并可見(jiàn)少量成纖維細(xì)胞，毛細(xì)血管增生不明顯。術(shù)后2周與術(shù)后1周相比，手術(shù)組炎癥反應(yīng)減輕，肉芽組織漸成熟，炎性細(xì)胞、其間巨噬細(xì)胞數(shù)量較少，毛細(xì)血管和成纖維細(xì)胞數(shù)量減少，膠原纖維細(xì)胞數(shù)量增加，排列更加致密，毛細(xì)血管增生數(shù)量減少。川芎嗪組的病理改變與術(shù)前1周時(shí)相似，創(chuàng)面修復(fù)均較造模組為佳，毛細(xì)血管、成纖維細(xì)胞和膠原纖維數(shù)量較造模組減少。

3.3各組血清IL-1β、TGF-β1及TNF-α水平比較

手術(shù)組IL-1β、TGF-β1及TNF-α水平明顯高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組（P均＜0.01）；與手術(shù)組比較，川芎嗪組IL-1β、TGF-β1及TNF-α水平均顯著降低（P＜0.01），見(jiàn)表2。

表2 各組IL-1β、TGF-β1及TNF-α水平比較（） pg/mL

表2 各組IL-1β、TGF-β1及TNF-α水平比較（） pg/mL

注：與手術(shù)組比較，**P＜0.01

?

手術(shù)組IL-1β于術(shù)后第7天升至峰值，以后逐漸下降；川芎嗪組IL-1β值在術(shù)后持續(xù)升高，術(shù)后14天升至峰值。兩組第2、7、14日3個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。手術(shù)組TGF-β1在術(shù)后第2天升至最高，以后逐漸下降；川芎嗪組TGF-β1在術(shù)后第7天升至最高，以后逐漸下降。兩組2、7、14日3個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。手術(shù)組TNF-α在術(shù)后第7天升至最高，以后逐漸下降；川芎嗪組TNF-α在術(shù)后第2天升至最高，以后逐漸下降，至術(shù)后14天又恢復(fù)至術(shù)后2天的水平。兩組2、7、14日3個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），見(jiàn)表3。

表3 手術(shù)組與川芎嗪組IL-1β、TGF-β1及TNF-α水平比較（） pg/mL

表3 手術(shù)組與川芎嗪組IL-1β、TGF-β1及TNF-α水平比較（） pg/mL

注：與手術(shù)組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別手術(shù)組n/只川芎嗪組66術(shù)后2天術(shù)后7天術(shù)后14天術(shù)后2天術(shù)后7天術(shù)后14天IL-1β 96.30±21.30 97.58±18.03 86.91±53.13 49.85±11.03** 58.43±20.06* 73.56±30.55** TGF-β1506.92±69.65 495.06±58.47 457.81±48.90 333.51±110.29* 359.20±68.37* 342.30±78.73* TNF-α 71.68±26.12 81.98±24.40 66.74±14.57 43.11±19.17* 41.31±13.78** 43.41±24.47**

3.4各組大鼠腸粘連組織TIMP-1表達(dá) 手術(shù)組及川芎嗪組大鼠腸粘連組織TIMP-1表達(dá)均在術(shù)后7天升至峰值，以后下降。術(shù)后2天，各組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；術(shù)后7天，各組與手術(shù)組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；術(shù)后14天，正常對(duì)照組、假手術(shù)組與手術(shù)組術(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而川芎嗪組與手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表4，圖3（封二）。

3.5各組大鼠腸粘連組織MMP-9表達(dá) 手術(shù)組及川芎嗪組大鼠腸粘連組織MMP-9表達(dá)均在術(shù)后2天升至峰值，而后下降。術(shù)后2天，各組與手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；術(shù)后7天，正常對(duì)照組、假手術(shù)組與手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而川芎嗪組與手術(shù)組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。術(shù)后14天，各組與手術(shù)組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表5，圖4（封二）。

表4 各組大鼠腸粘連組織TIMP-1表達(dá)（） μg/L

表4 各組大鼠腸粘連組織TIMP-1表達(dá)（） μg/L

注：與手術(shù)組比較，*P＜0.05

組別正常對(duì)照組假手術(shù)組手術(shù)組川芎嗪組n/只6666術(shù)后2天51.33±8.16 53.33±26.19 62.50±28.28 66.50±21.71術(shù)后7天60.33±15.0* 55.33±4.13* 81.50±17.73 105.50±5.50*術(shù)后14天45.16±19.79 51.16±13.73 55.83±9.72 76.66±13.80*

表5 各組大鼠腸粘連組織MMP-9表達(dá)（） μg/L

表5 各組大鼠腸粘連組織MMP-9表達(dá)（） μg/L

注：與手術(shù)組比較，*P＜0.05

組別正常對(duì)照組假手術(shù)組手術(shù)組川芎嗪組n/只6666術(shù)后2天22.83±17.57* 24.83±17.57* 119.00±40.50 70.66±13.01*術(shù)后7天43.16±13.39* 30.16±28.78* 78.66±26.66 58.00±11.52術(shù)后14天37.83±9.38 50.00±17.34 49.66±29.95 50.66±23.54

4 討論

腸粘連是腹部壁層與臟層以及臟層腹膜之間的異常粘連，是相伴集體組織愈合的必然過(guò)程。炎性細(xì)胞的聚集、間皮細(xì)胞的活化、纖維素的滲出和細(xì)胞外基質(zhì)的轉(zhuǎn)化與重塑均在粘連形成過(guò)程中起著重要作用[7]。IL-1主要有單核細(xì)胞產(chǎn)生的多肽，也可有內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞等分泌，是機(jī)體主治對(duì)損傷和炎癥作出急性反應(yīng)的關(guān)鍵介質(zhì)，是形成粘連的必需過(guò)程。TGF-β在損傷、炎癥及纖維化之間起橋梁作用[8]，它通過(guò)自分泌和旁分泌基質(zhì)激活成纖維細(xì)胞產(chǎn)生膠原，阻斷纖維蛋白溶解酶原激活（t-PA），增加血管形成和趨化成纖維細(xì)胞、單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞，啟動(dòng)一個(gè)連鎖反應(yīng)，破壞纖維蛋白溶解與合成之間的平衡，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的沉積而有助于粘連形成。TNF-α屬于介導(dǎo)炎癥的細(xì)胞因子，在炎癥早期有一定的介導(dǎo)作用，同時(shí)也是炎癥反應(yīng)中激活細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)的主要遞質(zhì)，是產(chǎn)生纖維素性粘連的基礎(chǔ)。研究發(fā)現(xiàn)，術(shù)后早期血清中較高水平的IL-1、TNF-α及TGF-β與術(shù)后腹腔粘連形成有顯著相關(guān)性，并認(rèn)為術(shù)后早期IL-1、TNF-α及TGF-β升高可作為人類(lèi)術(shù)后腹膜粘連的可靠指標(biāo)[9-10]。本研究發(fā)現(xiàn)，手術(shù)組腸粘連大鼠血清IL-1、TNF-α及TGF-β值分別于術(shù)后第7、7、2天達(dá)到峰值，與假手術(shù)組及正常對(duì)照組相比差異明顯（P＜0.01），這與上述觀點(diǎn)相似。川芎嗪組與手術(shù)組相比較，IL-1、TNF-α及TGF-β值均有明顯下降（P＜0.05或P＜0.01）。這提示川芎嗪注射液可能通過(guò)降低腸粘連大鼠血清IL-1、 TNF-α及TGF-β等細(xì)胞因子水平，降低細(xì)胞因子在腸粘連過(guò)程起到的作用，從而減輕腸粘連程度。

細(xì)胞外基質(zhì)是廣泛存在于細(xì)胞之間的一個(gè)動(dòng)態(tài)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)[11]，其構(gòu)成了細(xì)胞生活的微環(huán)境，參與細(xì)胞的增殖、分化、腫瘤演進(jìn)和創(chuàng)傷修復(fù)等過(guò)程，并且其本身也處于不斷產(chǎn)生與降解的動(dòng)態(tài)平衡中[12]。研究發(fā)現(xiàn)，能降解ECM的酶類(lèi)主要包括絲氨酸蛋白酶類(lèi)、半胱氨酸蛋白酶類(lèi)、天冬氨酸蛋白酶類(lèi)及基質(zhì)金屬蛋白酶類(lèi)（MMPs）[13]。而在上述四類(lèi)酶中，降解ECM最重要的當(dāng)屬M(fèi)MPs 2。MMPs是一組與鋅結(jié)合的、分解胞外基質(zhì)的蛋白酶，參與胚胎正常發(fā)育及組織重塑，并在許多病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用，如創(chuàng)傷修復(fù)、炎癥反應(yīng)等。TIMPs是組織局部MMPs活性最重要的調(diào)節(jié)因素。在正常情況下，TIMPs可以通過(guò)其氨基酸末端決定簇與MMPs按1∶1比例結(jié)合，從而阻斷后者的降解活性。因此，MMPs-TIMPs平衡是ECM內(nèi)環(huán)境和完整性的決定因素。

MMP-9是基質(zhì)金屬蛋白酶類(lèi)（MMPs）家族成員之一，它是一種糖蛋白，可由中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌。生理?xiàng)l件下，MMP-9功能受到嚴(yán)格的控制，當(dāng)其以酶原的形式從胞內(nèi)分泌到胞外后，經(jīng)一系列酶解過(guò)程而激活[14]。在體內(nèi)MMP-9蛋白水解活性受非特異性和特異性抑制劑的抑制，前者包括TGF-B、A1抗蛋白酶、A2巨球蛋白；特異性抑制物是金屬蛋白酶組織抑制因子-1（TIMP-1）。TIMP-1是一種M為58 000的糖蛋白，可與MMP-9結(jié)合形成1：1化合物，從而發(fā)揮抑制作用，改變細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的生長(zhǎng)和合成。因此，細(xì)胞外基質(zhì)的生成和降解和基底膜成分的完整性是由MMP-9和TIMP-1在正常狀態(tài)下保持動(dòng)態(tài)平衡來(lái)調(diào)節(jié)的。當(dāng)MMP-9和TIMP-1的平衡失調(diào)時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生一系列的病理變化，發(fā)生疾病。

在本研究手術(shù)組中，術(shù)后2天時(shí)，粘連組織中MMP-9與TIMP-1含量均高于正常組織，提示MMP-9和TIMP-1對(duì)腹膜粘連的形成確有一定影響作用，這與文獻(xiàn)報(bào)道一致[5，15]。術(shù)后2天，MMP-9含量增加，提示在粘連發(fā)生早期，TIMP-1含量隨MMP-9的增加而增加，抑制MMP-9活性，使膠原降解受到抑制，然而，TIMP-1增加不明顯，在此期間主要表現(xiàn)為MMP-9活性效應(yīng)，同時(shí)形成粘連的基礎(chǔ)。術(shù)后7天和14天，MMP-9含量逐漸降低，說(shuō)明MMP-9主要在粘連形成的早期發(fā)揮作用，在后期即粘連形成以后其作用趨于靜止。術(shù)后7天TIMP-1含量較術(shù)后2天明顯增加，抑制MMP-9表達(dá)使之趨于穩(wěn)定，控制炎性細(xì)胞的遷移，ECM降解減少，減少粘連形成。術(shù)后14天TIMP-1在粘連組織中的含量較術(shù)后7天降低，提示隨著MMP-9的逐漸降低不再需要過(guò)多的TIMP-1抑制MMP-9活性，故TIMP-1也降低，形成局部穩(wěn)定的粘連。而在本研究川芎嗪組中，術(shù)后2天，與手術(shù)組比較，腸組織中MMP-9的表達(dá)有顯著降低，而TIMP-1未見(jiàn)明顯改變。術(shù)后7天及14天，腸組織中TMP-1的表達(dá)較手術(shù)組有顯著增高，而MMP-9較手術(shù)組無(wú)明顯改變。

綜合上述，筆者認(rèn)為，在腸粘連早中期，川芎嗪主要通過(guò)抑制MMP-9和促進(jìn)TIMP-1的表達(dá)，以及抑制TGF-β細(xì)胞因子水平升高，從而達(dá)到抑制腸粘連的作用。在腸粘連晚期，手術(shù)組大鼠腸組織中的細(xì)胞因子、MMP-9及TIMP-1均出現(xiàn)明顯下降，TIMP-1對(duì)MMP-9的完全抑制占主導(dǎo)。因此，MMP-9對(duì)ECM的溶解能力顯著下降，大鼠腸組織逐漸進(jìn)入一個(gè)自我修復(fù)和重建的穩(wěn)定粘連過(guò)程。所以，在這個(gè)時(shí)期川芎嗪抑制腸粘連的作用較弱。

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Effects of Ligustrazine on Expressions of Matrix Metalloproteinase-9,Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1 and Cytokines in Rats with Intestinal Adhesion Tissues

DAI Chunshan，XU Wanglei，WANG Xionghua，et al.The Ningbo Traditional Chinese Medicine Hospital.Ningbo(315010)，China

Objective：To determine the expressions of matrix metalloproteinase-9（MMP-9）and tissue inhibitor of metalloproteinase-1（TIMP-1）in the tissues of intestinal adhesion and cytokine interleukin 1（IL-1），tumor necrosis factor alpha（TNF-α）and transformation growth factor（TGF-β）in blood sera of rats,in order to explain the mechanism of ligustrazine on intestinal adhesion.Methods：Seventy-two SD male rats were randomly assigned to 4 groups：normal group，sham operation group，operation group，and drug group，18 rats in each group.Traumatic model of intestinal adhesion model was established in the operation and drug group.In the sham operation group，the anesthesia and laparotomy were the same as the operation group,but no intestinal tissue was injured and no mesenteric artery was clamped.In the drug group，rats were intraperitonealiy injected with 10 mL of ligustrazine solution（about 0.1 g ligustrazine），while in the rest groups equivalent physiological saline was injected.In the four groups，6 rats were respectively sacrificed on day 2，7，and 14 after modeling,and tissues of serous membrane in adhesive area were taken.Under macroscopic observation，intestinal adhesion were classified.Elisa method was used for determination of cell factor IL-1，TNF-α，and TGF-β.The expressions of MMP-9 and TIMP-1 in the intestinal adhesive tissues and the normal intestinal tissues were determined by immunohistochemistry assay and image analysis.Results：（1）Compared with the sham operation and normal groups，the intestinal adhesion degree in the operation and drug group significantly increased（P＜0.05）；and compared with the operation group，the drug group had lower degree of interstinal adhesion（P＜0.05）.（2）Compared with the operation group，the levels of IL-1，TNF-αandTGF-β in the drug group significantly decreased，with statistically significant difference（P＜0.05 or P＜0.01）.（3）Compared with the operation group，the MMP-9 expression reduced on day 2 after modeling，but the TIMP-1 expression did not increase to a significantly different level until day 7（all P＜0.01）.On day 7 and 14，the drug group had the expressions of TIMP-1 increased（P＜0.05），but did not have a significant increase in MMP-9.Conclusions：Ligustrazine can inhibit intestinal adhesion in rats by reducing IL-1，TNF-α，and TGF-β and regulating MMP-9 and TIMP-1 in the intestinal tissues.

rats intestinal adhesion ligustrazine matrix metalloproteinase-9（MMP-9）tissue inhibitor of metalloproteinase-1（TIMP-1） IL-1 TNF-α TGF-β

2013-03-25

浙江省寧波市醫(yī)學(xué)科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.2010A12）

徐王磊，Tel：13958204357；E-mail：wnfk2002@163.com