兩種方法測定乳糜血標本淀粉酶結果比較

湯雪彪，胡江紅，袁平宗，張 偉，邵 陽（四川省內(nèi)江市第二人民醫(yī)院 641100）

急診患者血標本檢測時，標本離心后經(jīng)常發(fā)現(xiàn)有不同程度的乳糜標本，如果采用常規(guī)的濕化學法測定，有些項目如：淀粉酶（AMY）、清蛋白、肌酐、膽紅素等生化指標結果易受乳糜血干擾，常呈假性升高[1]，不能為臨床提供真實可靠的數(shù)據(jù)，導致檢測結果與臨床診斷不符，容易誤導醫(yī)生診斷。急性胰腺炎是一種急腹癥，必須及時作出正確的診斷。本研究采用干化學法和濕化學法同時測定乳糜血標本的AMY活性，并進行比對，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 本院門診15份急診患者血標本，離心后肉眼觀察為乳糜樣標本。

1.2 儀器與試劑 美國強生VIPROS－350干化學儀，美國強生公司提供的AMY試劑；日立7600－020自動生化分析儀，上海合富醫(yī)學科技有限公司提供的AMY試劑。兩種方法均嚴格按說明書進行操作。

1.3 檢驗方法 標本采集后1h內(nèi)采用干化學法與濕化學法同時檢測15份乳糜血標本AMY，該批次兩種儀器淀粉酶質(zhì)控在控。

1.4 統(tǒng)計學方法 用配對設計資料的秩和t檢驗比較兩組數(shù)據(jù)的差異，取α＝0.05，單側t檢驗。

2 結 果

干化學法較濕化學方法測定乳糜血標本AMY含量低，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。采用干化學法測定的15份乳糜血標本血清AMY值全部都在參考值范圍內(nèi)，而采用濕化學法測定的只有2例在參考值范圍內(nèi)，13例高于參考值范圍，結果見表1。（AMY參考范圍：≤220U/L）[2]。

表1 15份標本兩種方法測定AMY結果（U/L）

續(xù)表1 15份標本兩種方法測定AMY結果（U/L）

3 討 論

乳糜血血漿顏色呈乳白色或混濁狀，表示血液中含有大量脂肪。乳糜血中乳糜微粒是三酰甘油、膽固醇、磷脂及載脂蛋白共同組成的載脂蛋白。乳糜微粒空腹12h后就被完全清除。乳糜可造成血漿渾濁，脂濁使血清分布呈現(xiàn)非均一性，嚴重影響檢測，常規(guī)采用可見光及紫外光光度法中濕化學法測定AMY、清蛋白、肌酐、膽紅素等生化指標的可靠性，導致結果常成假性升高，不能為臨床提供真實可靠的數(shù)據(jù)。本實驗測定15份乳糜血標本AMY含量，干化學法較濕化學法測定乳糜血標本AMY含量低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。采用干化學法測定的15份乳糜血標本的血清AMY值全部都在參考值范圍內(nèi)，而采用濕化學法測定的只有2例在參考范圍內(nèi)，13例假性升高。濕化學法結果是干化學法的3.2～11.6倍，15例患者隨訪均不是胰腺炎患者，因此作者認為干化學法較濕化學法更適合對乳糜血標本的AMY測定。

干化學法和濕化學法均采用可見光及紫外光光度法中的對比法[3]，干化學法和濕化學法測定血清AMY反應原理基本一致。干化學法采用已染色支鏈淀粉為底物，通過樣本中AMY的作用生成糖類物質(zhì)，測定已染色糖類的反射光強度，反映在干燥的載玻片上。載玻片由5層構成，分別為干片上層、擴散層、試劑層、支持層、干片底層。采用干化學法測定AMY時將1滴患者樣本滴在干片上，并通過擴散層均勻分布到下面的試劑層，擴散層不僅可阻留細胞、結晶和其他小顆粒，也可以根據(jù)需要讓大分子（如蛋白質(zhì)）滯留，以提高分析的特異性。因此該層可以阻留乳糜微粒等物質(zhì)，起到抗乳糜微粒干擾的作用。同時當待檢樣品通過擴散層后，可以消除溶液中影響檢測的干擾物質(zhì)。擴散層中的某些特殊物質(zhì)一方面可用來掩蓋待檢樣品中的有色物質(zhì)，使反射光度計的測定結果不受影響。

濕化學法測定血清AMY時反應試劑與血清所有成分在一起，因此該反應方法不能起到抗乳糜微粒干擾的作用，這是引起濕化學法測定乳糜血標本AMY值偏高的主要原因。同時該反應方法不能消除溶液中影響檢測的干擾物質(zhì)以及不能掩蓋待檢樣品中的有色物質(zhì)，使測定結果受到影響。干化學法測定AMY時試劑層提供用于測定AMY反應的反射背景，其中含有用來測定AMY所需的所有試劑，經(jīng)過一系列反應后，通過透明的支持層，在540nm和660nm兩種波長下測定已染色糖類的反射強度以確定AMY濃度。660nm下的反射測定用于矯正光譜干涉。采用雙波長測定可以通過副波長加以修正，減少甚至消除干擾因素，提高測定的準確性。而濕化學法測定血清AMY采用單波長（540nm），單波長測定易受樣品溶血、黃疸、脂濁等因素干擾，這也是干化學法測定血清AMY較濕化學法準確的原因。干化學法反應底物進入指示劑層，在這里發(fā)生顯色反應。此層包含染料或相似的指示劑，使反應產(chǎn)物到達指示劑層后生成了有色化合物，其顏色變化與分析物濃度呈比例變化，被反射光檢測。由于光線不通過已經(jīng)被阻留在擴散層上的潛在干擾物，從而避免了對檢測結果的干擾。因此多層的設計，不同的項目加入了特殊的試劑層，增強反應的特異性，使干化學法具有優(yōu)異的抗干擾能力[4]。

綜上所述，干化學法由于其獨特的反應設計可以抗血清標本乳糜的干擾，使其較濕化學法更適合對乳糜血標本進行AMY測定，因此也適合測定乳糜血中白蛋白、肌酐等生化指標。至于干化學法是否具有完全的抗乳糜血干擾的作用，還需進一步進行臨床生化方法學的評價。

[1] 鮑瀛，段櫻，譚兵，等.干化學法與濕化學法測定結果的比較[J].哈爾濱醫(yī)藥，2008，28（5）：6－7.

[2] 葉應嫵，王毓三，申子瑜，等.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京：東南大學出版社，2006：425.

[3] 寇麗筠，陳宏礎.臨床基礎檢驗學[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：144.

[4] 宋書衛(wèi)，陳國軍.尿液分析儀質(zhì)量控制的體會[J].陜西醫(yī)學檢驗，2008，23（15）：160.