宮頸上皮內瘤樣病變及宮頸癌組織中JNK、STAT3蛋白的表達變化及意義

馮 姝，瞿全新

(天津醫科大學第一臨床學院，天津300070)

宮頸癌(CC)是最常見的婦科惡性腫瘤之一，在全球婦女惡性腫瘤中居第二位。全球每年約有20萬婦女死于此病，其中5．3萬發生在中國。早發現、早治療可使CC患者的生存率明顯提高。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)信號通路在細胞分化、細胞凋亡、應激反應及多種人類疾病的發生與發展中起著至關重要的作用。信號轉導及轉錄活化因子3(Signal transducer and activator of transcription 3，Stat3)與腫瘤血管生成、免疫抑制及腫瘤侵襲和轉移有關，并通過多途徑影響腫瘤的發生、發展。本研究采用免疫組化鏈霉親和素—生物素—過氧化物酶(SABC)法檢測了CC和宮頸上皮內瘤樣病變(CIN)組織中JNK、STAT3蛋白的表達情況，旨在為闡明CC與宮頸癌前病變的發病機制奠定實驗基礎，同時為臨床預測宮頸癌前病變的發展提供客觀依據。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 天津市第一中心醫院2005年1月～2008年12月確診的CIN患者105例，年齡22～65歲(中位年齡38歲)，其中CINⅠ38例、CINⅡ33例、CINⅢ34例;CC患者66例，年齡21～76歲(≤35歲11例、＞35歲55例，中位年齡47歲)，病理分類為鱗狀細胞癌56例、腺癌8例、腺鱗癌2例，組織學分級為低分化23例、中分化33例、高分化10例，按2009年國際婦產科聯盟(FIGO)臨床分期標準I期19例、Ⅱ期31例、Ⅲ期13例、Ⅳ期3例，手術或影像學檢查證實有淋巴結轉移21例。上述患者術前均未行放療、化療或激素治療，并于手術過程中留取病變組織經病理專家確診。同時選取10份正常宮頸組織作為對照(NCE)。

1．2 JNK、STAT3蛋白表達的檢測 采用免疫組化SABC法。實驗步驟按試劑盒要求進行(試劑盒購自北京博奧森生物技術有限公司):切片染色后經梯度乙醇脫水干燥，二甲苯透明，中性樹脂封固，顯微鏡下觀察，以細胞質、細胞核內或細胞膜上出現棕黃色顆粒為陽性標志。JNK蛋白表達于細胞質或細胞核，STAT3蛋白主要表達于細胞質或細胞膜(少數見于細胞核)。根據文獻［1］以半定量方法判定染色結果，每張切片光鏡下(400×)觀察10個視野，每個視野計數100個細胞，共計1 000個細胞，陽性細胞數＜5%為0分、5% ～25%為1分、26% ～50%為2分、＞50%為3分;細胞質、細胞核或細胞膜無色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。上述兩分值的乘積≥1判為陽性，＜1判為陰性。

1．3 統計學方法 采用SPSS13．0統計軟件。組間率的比較用χ2檢驗，相關關系的分析用Spearman相關分析法。P≤0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 三種組織中JNK、STAT3蛋白的表達 JNK、STAT3蛋白在NCE、CIN及CC組織中的陽性表達率均呈逐漸增高趨勢，兩兩比較均有顯著差異，詳見表1。

表1 三種組織中JNK、STAT3蛋白陽性表達率比較(%)

2．2 JNK、STAT3蛋白的表達與CC臨床病理參數的關系 JNK、STAT3蛋白的表達與CC患者的年齡、臨床分期、淋巴結轉移均無關(P＞0．05)，但與腫瘤組織學分級有關(P＜0．005，χ2值分別為12．08、12．61)，詳見表 2。

表2 JNK、STAT3蛋白的表達與CC臨床病理參數的關系

3 討論

3．1 JNK蛋白在宮頸癌前病變、CC組織中的表達及臨床意義 JNK家族是1990年被發現的促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)超家族成員之一，屬進化上保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。大量實驗顯示，JNK信號通路在細胞分化、細胞凋亡、應激反應及多種人類疾病的發生與發展中起至關重要的作用。朱德淼等［2］研究顯示，JNK1在胃癌組織中的高表達率為45．16%、低表達率為54．84%，JNK2在胃癌組織中的高表達率為46．77%、低表達率為53．23%，高、中分化胃癌組織中的JNK1、JNK2表達顯著高于低分化胃癌組織，且二者均與淋巴結轉移有關，而與患者年齡、性別、腫塊大小及PTNM分期無關。

本研究結果顯示，CIN和CC組織中JNK蛋白陽性表達率均顯著高于NCE組織，提示JNK異常表達可能參與了宮頸癌前病變、CC的發生及發展，并支持CIN與CC為同一疾病連續病變的學說。本研究還顯示，CC組織中JNK蛋白的表達與腫瘤組織學分級有關(在分化差的CC組織中的陽性表達率明顯高于分化好的組織)，而與患者年齡、臨床分期、盆腔淋巴結轉移無關。提示JNK蛋白過表達可能與CC預后不良有關。因此，JNK有可能成為判斷CC預后的一個重要參考指標。

3．2 STAT3蛋白在宮頸癌前病變、CC組織中的表達及臨床意義 STAT3是Shuai等［3］于1993年在研究γ-干擾素誘導的細胞基因表達中首次發現的重要信號分子。研究發現，人類多種腫瘤中可檢測到STAT表達，如頭頸部鱗狀細胞癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、多發性骨髓瘤、白血病等［4～8］。Yang等用免疫組化方法對56例CIN患者病變組織中STAT3和Ki-67蛋白的表達進行了研究，結果發現p-STAT3染色主要位于核內，在CINⅢ組織中陽性表達率為76．92%、在 CINⅠ/Ⅱ中陽性表達率為 13．33%，兩者比較差異有統計學意義(P＜0．001)。表明p-SATA3異常表達與CIN分級和細胞增殖有關，并可能作為評價CC預后的一個新指標。Yang等進一步分析了STAT3和Ki-67表達與CIN的關系，發現高級別CIN和CC組織中STAT3的表達明顯高于正常宮頸組織和CINⅠ組織。本研究結果顯示，STAT3蛋白在NCE、CIN及CC組織中的陽性表達率呈逐漸增高趨勢，兩兩比較均有顯著差異。提示STAT3蛋白異常表達在宮頸病變發生與進展中發揮重要作用。本研究還顯示，STAT3蛋白表達與CC組織學分級有關，但與患者年齡、臨床分期、淋巴結轉移等臨床病理特征無關。因此，STAT3蛋白異常表達有可能作為判斷CC預后不良的一個客觀指標。

綜上所述，JNK、STAT3蛋白在CIN及CC組織中的表達增加，與CC發生、發展及分化有關;檢測兩者表達可作為判斷CC患者預后不良的客觀指標及指導個體化治療的依據。

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［3］Shuai K，Stark GR，Kerr IM，et al．A single phosphotyrosine residue of STAT91 required for gene activation by interferon gamma［J］．Science，1993，261(5129):1744-1746．

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［5］Weber-Nordt RM，Egen C，Wehinger J，et al．Constitutive activation of STAT proteins in primary lymphoid and myeloid leukemia cells and in Epstein-Barr virus(EBV)-related lymphoma cell line［J］．Blood，1996，88(3):809-816．

［6］Zushi S，Shinomura Y，Kiyohara T，et al．STAT3 mediates the survival signal in oncogenesis-transfected intestinal epithelial cells［J］．Int J Cancer，1998，78(3):326-330．

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