野生和栽培金鐵鎖抗氧化活性比較

黃建華肖建青劉錫葵*

（1 中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650201；2 中國(guó)科學(xué)院研究生院，北京 100049）

野生和栽培金鐵鎖抗氧化活性比較

黃建華1,2肖建青1劉錫葵1*

（1 中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650201；2 中國(guó)科學(xué)院研究生院，北京 100049）

目的 野生和栽培金鐵鎖抗氧化活性比較。方法 以 Vc 和 BHA 為參照，采用 DPPH 方法對(duì)野生和栽培金鐵鎖根乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取物抗氧化活性進(jìn)行測(cè)試。結(jié)果 野生和栽培金鐵鎖根乙酸乙酯、正丁醇提取物抗氧化活性 IC50 值分別為443μg/mL、1265μg/mL 和 378μg/mL、1877μg/mL。結(jié)論 ①野生和栽培金鐵鎖各提取物抗氧化活性基本一致；②無(wú)論野生還是栽培金鐵鎖抗氧化作用都比較弱；③無(wú)論栽培還是野生金鐵鎖，抗氧化活性物質(zhì)基本都集中在乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物之中，均以乙酸乙酯提取物最強(qiáng)；④雖然栽培金鐵鎖乙酸乙酯提取物抗氧化活性要強(qiáng)于野生金鐵鎖、野生金鐵鎖正丁醇提取物抗氧化活性要強(qiáng)于栽培金鐵鎖，但相對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照 Vc和BHA來(lái)說(shuō)均很小，差異并不是很明顯。

金鐵鎖；DPPH；抗氧化活性

金鐵鎖（Psammosilene tunicoides W.C. Wuet C.Y.Wu）為石竹科單屬單種植物，別名獨(dú)定子、小霸王、昆明沙參、金絲矮陀陀、土人參、對(duì)葉七、麻參等，主要分布于我國(guó)云南的大部分地區(qū)、貴州西北部、四川西南部和西藏東南部，為我國(guó)西南地區(qū)特有物種[1]。始載于《滇南本草》，以根入藥，有散瘀定痛、止血、消癰排膿散瘀、祛風(fēng)除濕的功效[2]。味苦、辛，性溫，有小毒。歸肝經(jīng)。用于治療跌撲損傷、風(fēng)濕痹痛、胃寒痛、瘡癤及創(chuàng)傷出血等癥[3]，是多種著名中藥的組成成份，如：云南白藥系列、云南紅藥膠囊、貴州金骨蓮膠囊、福建痛血康膠囊等[4]。化學(xué)研究表明金鐵鎖主要含有齊墩果烷型五環(huán)三萜皂苷、環(huán)肽及有機(jī)酸等化合物[5-13]。藥理研究證明，金鐵鎖水煎浸膏及其總皂苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠灌胃后具有顯著的鎮(zhèn)痛、抗炎作用[14-16]；對(duì)慢性增殖性炎癥、抑菌有一定的作用[3]；對(duì)免疫細(xì)胞具有一定的增強(qiáng)和調(diào)節(jié)作用[17]。

中藥的抗菌、消炎和增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)作用，一般與抗氧化活性具有一定的相關(guān)性，具有重要的作用，通過(guò)清除人體內(nèi)自由基，還原氧化物質(zhì)，從而達(dá)到保護(hù)和促進(jìn)機(jī)體的作用［18,19］。關(guān)于金鐵鎖的抗氧化活性未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，本文采用DPPH方法，應(yīng)用Vc和BHA為參照，通過(guò)對(duì)野生和栽培金鐵鎖根的抗氧化作用進(jìn)行比較分析，探討野生和栽培金鐵鎖活性的差異，為金鐵鎖的人工栽培提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 儀器與試劑

722 S型可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)；FA 2004型電子天平：上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。DPPH（1，1-二苯基-2-苦基肼自由基）和BHA（叔丁基羥茴香醚）：為Sigma-Fluka公司產(chǎn)品；Vc：國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?5%乙醇，分析純，天津化學(xué)試劑有限公司；其他溶劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 藥材

栽培金鐵鎖于2010年10月采自云南武定縣，野生金鐵鎖根于2010年11月購(gòu)于云南白藥集團(tuán)，經(jīng)鑒定均為金鐵鎖（Psammosilene tunicoides W. C. Wu et C. Y.Wu），標(biāo)本均保存于中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 方 法

2.1 樣品的提取

野生金鐵鎖根部5kg、栽培金鐵鎖根部2kg分別粉碎后用80%乙醇浸提6次，每次浸提時(shí)間1d，減壓回收至無(wú)乙醇味，分別得到乙醇提取物1370g、184g。乙醇提取物分別用2倍體積的蒸餾水混懸后依次用等體積石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取3～5次，合并相同萃取溶劑分別減壓回收溶劑得石油醚提取物5.6g、1.0g，乙酸乙酯提取物22.4g、3.4g，正丁醇提取物257g、60.3g，水提取物886g、102g，作為待測(cè)樣品。

2.2 抗氧化活性測(cè)定[20]

2.2.1 DPPH液的配制

準(zhǔn)確稱取DPPH試劑25mg，用95 %分析純的乙醇溶解，并定量轉(zhuǎn)入250mL容量瓶中，用95%乙醇定容，搖勻，得質(zhì)量濃度為100mg/L（約2.5×10-4mol/L）的DPPH儲(chǔ)備液，置于冰箱中冷藏備用。

2.2.2 樣品溶液的配制

準(zhǔn)確稱取以上待測(cè)試的樣品10.0mg，溶解在分析純的乙醇中，并轉(zhuǎn)入25mL的容量瓶中，用乙醇定容，搖勻，得質(zhì)量濃度為400mg/L的樣品溶液，置于冰箱中冷藏備用。

2.2.3 BHA標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱BHA樣品2.5mg，溶解在分析純的乙醇中，并轉(zhuǎn)入100 mL的容量瓶中，用乙醇定容，搖勻，得質(zhì)量濃度為25mg/L的樣品溶液，置于冰箱中冷藏備用，作為陽(yáng)性對(duì)照樣品。

2.2.4 VC標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱Vc樣品1.5mg，溶解在分析純的乙醇中，并轉(zhuǎn)入100mL的容量瓶中，用乙醇定容，搖勻，得質(zhì)量濃度為15mg/L的樣品溶液，置于冰箱中冷藏備用，作為陽(yáng)性對(duì)照樣品。

2.2.5 清除DPPH自由基能力的測(cè)定

準(zhǔn)確量取1.2mLDPPH液，加入2.8mL 95%乙醇溶液，混勻，在λ=520nm測(cè)吸光度Ac（自由基清除率為0）。分別準(zhǔn)確量取各樣品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.4、1.8、2.2mL，加入1.2 mL DPPH液及2.6、2.4、2.2、2.0、1.8、1.4、1.0、0.6mL的95 %乙醇溶液混合均勻，在λ=520nm測(cè)吸光度Ai。另外分別準(zhǔn)確量取各樣品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.4、1.8、2.2mL，加入3.8、3.6、3.4、3.2、3.0、2.6、2.2、1.8mL的95 %乙醇溶液后混合均勻，在λ=520nm測(cè)吸光度Aj（空白校正因子）。同時(shí)以BHA和Vc作為陽(yáng)性對(duì)照。按式K＝[1-（Ai-Aj）/Ac]×100%計(jì)算自由基清除率K值，并進(jìn)一步計(jì)算其自由基清除率IC50值。

3 結(jié) 果

3.1 野生金鐵鎖根、栽培根各部分提取物的DPPH自由基清除率

3.1.1 野生金鐵鎖根各提取物對(duì)DPPH自由基清除率的測(cè)得結(jié)果（表1）。

表1 野生金鐵鎖根部提取物對(duì)DPPH自由基清除率

從表1可以看出：野生金鐵鎖根各提取物對(duì)DPPH自由基的清除率隨著濃度增大呈現(xiàn)逐步增強(qiáng)的趨勢(shì)；但不同提取物對(duì)自由基的清除差別較大，同樣濃度下乙酸乙酯提取物對(duì)自由基的清除率最強(qiáng)，其次是正丁醇提取物。乙醇、石油醚和水提取物對(duì)自由基的清除率比較弱，其中，水提取物對(duì)DPPH自由基的清除率最弱，其次是乙醇提取物；并且乙醇提取物、石油醚提取物和水提取物隨著濃度加大對(duì)自由基的清除率沒(méi)有明顯變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明野生金鐵鎖根對(duì)自由基清除物質(zhì)主要集中在乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物中。

3.1.2 栽培金鐵鎖根各提取物對(duì)DPPH自由基清除率的測(cè)得結(jié)果（表2）。

表2 栽培金鐵鎖根部提取物清除DPPH自由基清除率

3.2 金鐵鎖野生根、栽培根各部分提取物的DPPH自由基清除活性IC50值及其比較（表3）。

表3 野生和栽培金鐵鎖抗DPPH自由基氧化活性（IC50）

從表3可看出，野生和栽培金鐵鎖各提取物抗氧化活性基本一致：①無(wú)論野生還是栽培金鐵鎖抗氧化作用都比較弱；②無(wú)論栽培還是野生金鐵鎖，抗氧化活性物質(zhì)基本都集中在乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物之中，均以乙酸乙酯提取物最強(qiáng)；③雖然栽培金鐵鎖乙酸乙酯提取物抗氧化活性要強(qiáng)于野生金鐵鎖、野生金鐵鎖正丁醇提取物抗氧化活性要強(qiáng)于栽培金鐵鎖，但相對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照Vc和BHA來(lái)說(shuō)均很小，差異并不是很明顯。

4 討 論

金鐵鎖野生資源分布比較狹窄，同時(shí)生長(zhǎng)比較緩慢，已嚴(yán)重限制了藥材資源的應(yīng)用和開(kāi)發(fā)利用。開(kāi)展金鐵鎖人工栽培繁殖已成為緩解金鐵鎖資源的重要途徑和手段，同時(shí)也有利于野生資源的保護(hù)。然而栽培金鐵鎖和野生金鐵鎖是否存在差異？差異有多大？是否具有于野生藥材同等的藥效？已成為金鐵鎖人工栽培的關(guān)鍵，必須進(jìn)行全面的比較分析和評(píng)價(jià)。本文采用DPPH自由基清除法對(duì)栽培和野生金鐵鎖抗氧化活性進(jìn)行了初步的快速比較評(píng)價(jià)，結(jié)果表明野生金鐵鎖和栽培金鐵鎖的抗氧化活性和部位基本一致，栽培金鐵鎖具有與野生金鐵鎖同樣的作用，為金鐵鎖的人工栽培提供了初步的依據(jù)；為下一步進(jìn)一步深入的化學(xué)成分和活性比較評(píng)價(jià)提供了一定的依據(jù)和基礎(chǔ)。

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：1671-8194（2013）02-0060-03

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