薄層色譜法測定注射用硫酸奈替米星的有關物質

袁玉和

（河南省平輿縣食品藥品檢驗所，河南 平輿 463400）

薄層色譜法測定注射用硫酸奈替米星的有關物質

袁玉和

（河南省平輿縣食品藥品檢驗所，河南 平輿 463400）

目的 探討測定不同硫酸奈替米星有關物質的薄層色譜條件，選擇合適的展開系統和高靈敏度的顯色劑，保證分離度良好，Rf值合適，且可準確檢測硫酸奈替米星的有關物質。方法 采用硅膠 G 板和 GF254 板，采用了不同比例的二氯甲烷∶甲醇∶濃氨和氯仿∶甲醇∶濃氨，以不同顯色溶液為顯色劑。結果 硅膠 GF254 板采用氯仿∶甲醇∶濃氨（2 ∶ 1 ∶ 0.3）展開系統，1% 碘的四氯化碳溶液，可得到很好的分離度，靈敏度。結論 本研究的薄層色譜條件具有靈敏度高，分離效果好，顯色迅速的特點，可用于不同注射用硫酸奈替米星有關物質的檢測，。

薄層色譜法；硫酸奈替米星；有關物質；顯色劑；展開劑

硫酸奈替米星（又稱乙基西梭米星），是國內已經廣發應用于臨床的新型氨基糖苷類廣譜抗生素，具有廣譜的抗菌效果，而且其是氨基糖苷類中細菌耐藥性、耳毒性、腎毒性最小的，不需多次給藥，日內單劑量給藥即可滿足組織藥物濃度，提高療效且降低毒性。主要劑型是注射液，包括葡萄糖、山梨醇、氯化鈉等多種注射液[1]。但由于奈替米星及注射液性質，多存在不穩定性的問題，一般會加入大量的穩定劑和抗氧化劑，不利于臨床的安全使用[2]。奈替米星的有關物質主要為生產過程中引入，主要有西梭米星及降解產物，以西梭米星毒性最大。國家藥典的方法仍有拖尾或無法檢測的問題存在，本研究在藥典方法的基礎上不斷改善，取得了良好的分離度和靈敏度，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與試藥

高效硅膠GF254薄層板（100mm×200mm）青島海洋化工廠；高效硅膠G薄層板（100mm×200mm）青島海洋化工廠；展開缸（50mm×100mm×200mm）。注射用硫酸奈替米星（濟南利民制藥有限責任公司，浙江震元制藥有限公司；福州福藥制藥有限公司）；對照品：奈替米星（中國藥品生物制品檢定所，批號130355-200702），西梭米星（中國藥品生物制品檢定所，130353-200001）。山梨醇原料批號：110708，南寧化學制藥責任有限公司；二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇、濃氨水、碘、四氯化碳均為分析純試劑。

1.2 方法與結果

1.2.1 展開系統及硅膠板的選擇

A：二氯甲烷∶甲醇∶濃氨（4∶4∶2）；B：二氯甲烷∶甲醇∶濃氨（5∶3.5∶1.5）；

C：氯仿∶甲醇∶濃氨（5∶3∶1）；D：氯仿∶甲醇∶濃氨（5∶ 12∶6）；E：氯仿∶甲醇∶濃氨（2∶1∶0.3）

結果：見表1，從表中可知每種展開劑都可分離奈替米星和西梭米星，但是不同展開劑Rf值不同，最后綜合比較，認為E展開劑系統氯仿∶甲醇∶濃氨（2∶1∶0.3）為最佳。

表1 不同展開系統的比較

1.2.2 顯色方法

A：0.1%茚三酮的水飽和正丁醇溶液；B：飽和碘蒸氣；C：1%碘的四氯化碳溶液。

1.2.3 操作方法

取不同廠家的硫酸奈替米星注射劑配制成1mg/mL的供試品水溶液A、B和C。分別配制含奈替米星0.5mg/mL、1.0mg/mL的水溶液，作為對照品溶液D和E；配制含西梭米星0.50mg/mL的水溶液，作為對照液F用微量吸樣器吸取上述溶液2μL點樣于距離薄層板下端1.5cm處，控制在2mm誤差以內，分別點于同一薄層板上，置于不同展開劑系統中展開后，晾干，置不同顯色劑下顯色。

1.2.4 定量下限

將上述奈替米星溶液和西梭米星稀釋至50μg/mL，100μg/mL，150μg/mL，200μg/mL，500μg/mL的溶液，分別吸取2μL點于同一硅膠薄板，同時用不同展開劑和顯色劑顯色。

結果：1%碘的四氯化碳溶液斑點顯色為黃色，背景色為白色，靈敏度最高，定量下限可達到0.1μg（50μg/mL×2μL）。其他顯色劑的靈敏度均為0.4μg，且背景顏色與斑點顏色反差不是很大，效果不明顯。

選擇硅膠GF254薄層板，氯仿∶甲醇∶濃氨（2∶1∶0.3）為展開系統，0.1%的碘四氯化碳溶液為顯色劑，為最佳檢測方法。

2 方法考察

2.1 方法專屬性

取3個不同廠家的注射用硫酸奈替米星注射液、山梨醇，按“1.2.3操作方法”操作，點于同一硅膠GF254薄層板，氯仿∶甲醇∶濃氨（2∶1∶0.3）展開，0.1%的碘四氯化碳溶液顯色。

結果：山梨醇及有關物質的斑點與奈替米星主斑點分離度良好，前后無雜質斑點。

2.2 加速破壞試驗

取3個不同廠家的注射用硫酸奈替米星注射液，按“1.2.3操作方法”配制溶液，分別進行如下破壞性試驗[3]：

2.2.1 酸破壞試驗

取供試品溶液1mL加入1mol/L的鹽酸溶液1mL，沸水浴中加熱30min，冷卻后，照“2.1方法專屬性”下方法測定。

2.2.2 堿破壞試驗取供試品溶液1mL加入0.2mol/L的氫氧化鈉溶液1mL，沸水浴中加熱30min，冷卻后，照“2.1方法專屬性”下方法測定。

2.2.3 氧破壞試驗

取供試品溶液1mL，加3%H2O2溶液1mL，沸水浴中加熱30min，冷卻后，照“2.1方法專屬性”項下方法測定。

2.2.4 高溫破壞

將注射用硫酸奈替米星注射液置沸水浴中煮沸2h，冷卻后，配制供試品溶液，照“2.1方法專屬性”項下方法測定。

2.2.5 光破壞試驗

將注射用硫酸奈替米星注射液置5000Lx光照強度下放置48h，配制供試品溶液，照“2.1方法專屬性”項下方法測定。

結果：硫酸奈替米星在酸破壞、堿破壞、高溫及光照，氧化破壞雜質斑點，均可以與主斑點分離。

2.3 有關物質檢查

取不同廠家的硫酸奈替米星注射劑配制成1mg/mL的供試品水溶液，取奈替米星對照品溶液1mL、2mL置100mL容量瓶中，加水至刻度線，定容，得到對照品溶液A和B，另取西梭米星對照品溶液（0.04mg/mL），點于同一GF254板上，以氯仿∶甲醇∶濃氨（2∶1∶0.3）展開，0.1%的碘四氯化碳溶液顯色。供試品溶液如有雜質斑點，其斑點顏色與對照溶液主斑點顏色相比較，不得更深（1%），其他雜質與對照溶液A所顯主斑點相比較，均不得更深（1%），如有一點更深，應不深于對照溶液B的主斑點（2%）[4]。

結果：不同廠家的硫酸奈替米星注射液有關物質含量均合格。

3 討 論

本研究改進了藥典的方法，不僅提高了檢測限，而且破壞試驗的分離度良好，靈敏度高，有效地檢出了生產過程中可能引入的雜質，不同硅膠板的分離效果有差異，不同展開劑的Rf值差異也較大，而且不同顯色劑的靈敏度相差也比較大，故作者對根據試驗設計的交叉試驗，優化出了最佳的薄層色譜條件為硅膠GF254薄層板，氯仿∶甲醇∶濃氨（2∶1∶0.3）為展開系統，0.1%的碘四氯化碳溶液為顯色劑。總而言之，本研究的薄層色譜條件具有靈敏度高，分離效果好，顯色迅速的特點，可用于不同注射用硫酸奈替米星有關物質的檢測。

[1]顧曄,杜淵,金新.HPLC法測定硫酸奈替米星的含量[J].科技傳播,2012,2(16):80-81.

[2]楊立,陳衛波,翁德民.高效液相色譜法測定硫酸奈替米星注射液的含量[J].中國熱帶醫學,2006,6(1):132-134.

[3]盛成德.薄層色譜法測定注射用硫酸奈替米星有關物質[J].廣東藥學,2003,13(5):23-24.

[4]章衛中.薄層色譜法檢測硫酸奈替米星山梨醇注射液有關物質[J].海峽藥學,2003,15(5):49-51.

R917

：B

：1671-8194（2013）02-0062-02