魚腥草穩定性實驗中揮發油變化情況的研究

2013-07-01 20:00:51何俊婷王曉博曹愛蘭帆惠選柱王景峰

中國醫藥指南 2013年26期

何俊婷王曉博曹愛蘭* 翟帆惠選柱王景峰

（1 陜西新藥技術開發中心，陜西西安 710075；2 陜西中藥研究所，陜西西安 710075；3 陜西醫藥控股集團山海丹制藥有限責任公司，陜西西安 710075）

魚腥草穩定性實驗中揮發油變化情況的研究

何俊婷1王曉博1曹愛蘭2* 翟帆1惠選柱3王景峰3

（1 陜西新藥技術開發中心，陜西西安 710075；2 陜西中藥研究所，陜西西安 710075；3 陜西醫藥控股集團山海丹制藥有限責任公司，陜西西安 710075）

目的研究魚腥草藥材中揮發油量和甲基正壬酮含量隨時間變化的規律，為確定魚腥草適宜的貯藏條件及期限提供科學依據。方法采用加速和長期穩定性實驗考察魚腥草的穩定性，測定不同貯藏時期魚腥草中揮發油含量，并采用氣相色譜法測定魚腥草中甲基正壬酮的含量。結果經加速試驗，魚腥草揮發油含量降幅低于3.85%，甲基正壬酮含量下降4.06%～4.76%。經長期穩定性試驗，甲基正壬酮含量下降3.25%～4.76%，揮發油下降1.20%～1.28%。結論經穩定性實驗，魚腥草中揮發油量和甲基正壬酮含量在考察期內均略有降低，但未發生顯著變化。

魚腥草；穩定性；揮發油；甲基正壬酮

魚腥草是三白草科植物蕺菜 Houttuynia cordata Thunb.的新鮮全草或干燥地上部分。具有清熱解毒，排膿消癰，利尿通淋功能[1]。揮發油是魚腥草的有效成分之一[2]，通過水蒸氣蒸餾得到的揮發油為藥效成分的制劑有魚腥草注射液、魚金注射液等，廣泛應用于消炎抗菌。因揮發油成分的不穩定性，藥材的采收、加工、貯藏對其含量影響較大。而藥材是藥品的源頭，原料藥質量直接保證終產品的質量，從而影響藥品的安全性。魚腥草藥材的揮發油成分的控制研究較少，注射液生產企業使用該原料時缺乏原料選擇及貯藏依據，給產品埋下了安全隱患。2006年，國家藥品不良反應中心因魚腥草類制劑的不良反應問題，暫停了7個魚腥草類制劑的使用，并停止受理和審批其各類制劑的注冊申請。為恢復該類產品的生產[3]，保證魚腥草類注射劑安全、可靠、穩定、可控，企業做了大量的研究工作，首要任務就是控制原料的質量。筆者通過氣相色譜法檢測甲基正壬酮含量[4]，將其作為指標性成分，對魚腥草藥材加工及儲藏過程中揮發油的穩定性進行考察。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

電子分析天平（AG-135，德國梅特勒）；島津GC-17A氣相色譜儀；PEG毛細管柱（30m×0.25mm×0.25μm）；水分測定管，揮發油提取器，冷凝裝置，圓底燒瓶（西安玻璃儀器廠）；WD-A藥物穩定性檢查儀（天津藥典標準儀器廠）。

1.2 試藥

干魚腥草（三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.干燥地上部分，陜西漢中城固縣）；甲基正壬酮（111640-201005，中國藥品生物制品檢定所）；乙酸乙酯（分析純，天津市富宇精細化工有限公司）

2 方法與結果

2.1 魚腥草藥材的采收與干燥

魚腥草2009年9月5日采自陜西漢中城固縣，晴天采收，用刀具割取地上部分植株或用手直接拔取地上部分。采收后的藥材除去雜質,抖凈泥沙，清洗。干燥條件為室溫條件下（溫度為25℃左右）自然干燥。

2.2 揮發油量測定

取干魚腥草約300g置圓底燒瓶中，加8倍藥材量的水，搖勻。連接揮發油測定裝置，回流提取6h，按規定[6]方法操作讀取揮發油量。

2.3 甲基正壬酮含量測定

2.3.1 樣品處理

精密稱取干魚腥草25g，置圓底燒瓶中，加水250mL，連接揮發油測定器，自測定器上端加水使充滿刻度部分，再加乙酸乙酯約3mL，連接回流冷凝管。加熱回流2h，停止加熱，放置片刻，分取乙酸乙酯層，測定器再用乙酸乙酯洗滌3次，每次1mL，合并洗滌液，定量轉移至10mL量瓶中，并加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻。

2.3.2 對照品溶液制備

精密稱定甲基正壬酮對照品108.6mg，置于100mL容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，制成每1mL中含1.088mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3.3 色譜條件及系統適用性試驗

以聚乙二醇（PEG）—20M為固定液，涂布濃度為10%；柱溫（120±5）℃；進樣口溫度230℃；檢測器溫度230℃；分流比為5∶1；程序升溫：初始120℃，保持15min，以每分鐘5℃升至170℃，保持10min；進樣量為4μL；理論板數按甲基正壬酮峰計算，應不低于1000。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系考察

精密吸取對照品溶液，配置成甲基正壬酮濃度分別為0.034，0.068，0.136，0.272，0.544，1.088mg/mL的對照品梯度溶液，進樣，以色譜峰面積和濃度進行分析。表明，甲基正壬酮在濃度為0.034～1.088mg/mL范圍內，線性關系良好，線性回歸方程為：Y=414.99X-32.12，r=0.9998。

2.4.2 精密度實驗

精密吸取同一對照品溶液，按2.3.3色譜條件重復進樣5次，通過峰面積計算，得到甲基正壬酮峰面積的RSD為0.94%，表明所用儀器精密度良好。

2.4.3 穩定性實驗

取供試品溶液一份，按2.3.3方法，分別于0，2，4，6，8，10，12，24h進樣，測得峰面積計算RSD為1.38%，表明該樣品在24h內穩定性良好。

2.4.4 重復性實驗測

精密取同一批樣品（批號100901）5份，按2.3.1方法制備供試品，按2.3.3測定，測定甲基正壬酮平均含量為105μg/g，RSD為1.86%。

2.4.5 加樣回收率實驗

取已知甲基正壬酮含量的同一批供試品溶液（批號：100901）5份，分別加入對照品適量，混合均勻，測定其中甲基正壬酮峰面積，計算回收率，結果甲基正壬酮平均加樣回收率為97.82%，RSD為1.84%。

2.5 穩定性試驗

取三個批號（100901、100902、100903）干魚腥草藥材對其進行加速和長期穩定考察[5]。

2.5.1 加速穩定性試驗

將魚腥草藥材在40℃±2℃，相對濕度75%±5%條件下儲藏6個月，濕度調節選擇NaCl飽和溶液（15.5～60℃，RH75%±1%）。在試驗期間第0、1、2、3、6個月末取樣檢測。

經6個月加速試驗后，魚腥草外觀無變化，揮發油含量有略微降低（表1），變化率低于3.85%。測定魚腥草中甲基正壬酮含量（表2），發現其隨著貯藏時間延長，含量降低，降幅為4.42%～4.76%。

表1 加速穩定性試驗魚腥草中揮發油含量（%）

表2 加速穩定性試驗魚腥草中甲基正壬酮含量（μg/g）

2.5.2 長期穩定性研究

取三個批號（100901、100902、100903）的干魚腥草貯存在溫濕度控制為25℃±2℃，RH 60%±10%環境下，分別與0、3、6、9、12、18個月取樣測定。經18個月長期穩定性試驗，測定各階段魚腥草中甲基正壬酮含量（表3），結果顯示，三個批次樣品含量均有一定幅度的降低，最大降幅為4.76%。魚腥草的揮發油量有較小幅度的降低（表4），變化率低于1.28%。貯藏期限內藥材外觀無蟲蛀、無霉變。