CMIA法與ELISA法測(cè)定乙型肝炎標(biāo)志物的比較分析

陳清林

（泉州市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 泉州 362000）

CMIA法與ELISA法測(cè)定乙型肝炎標(biāo)志物的比較分析

陳清林

（泉州市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 泉州 362000）

目的 探討化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法（CMIA）及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法測(cè)定乙型肝炎標(biāo)志物的比較分析。方法 采用CMIA及ELISA 2種方法及相應(yīng)儀器分別檢測(cè)300份臨床血清，比較分析血清中乙型肝炎標(biāo)志物的水平，對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 ELISA與CMIA法兩種方法對(duì)0.1IU/ml以下的HbsAg均具有檢出效果；HbsAg、HbsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的檢測(cè)相互符合率有差異。結(jié)論 ELISA法檢測(cè)乙型肝炎特殊模式的自動(dòng)化程度較CMIA法差，CMIA法可動(dòng)態(tài)觀察HBsAg 和 HbsAb的變化，對(duì)病情進(jìn)行有效監(jiān)測(cè)。

乙型肝炎；乙肝病毒標(biāo)志物；CMIA；ELISA

乙型肝炎病毒（HBV）感染在我國(guó)已經(jīng)流行多年，其中乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的攜帶者約占乙型肝炎（以下簡(jiǎn)稱(chēng)乙肝）患者的十分之一。乙肝的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)對(duì)診斷/治療有重要參考價(jià)值[1]，目前國(guó)內(nèi)醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)血清乙肝兩對(duì)半大多數(shù)采用ELISA的方法，當(dāng)臨床出現(xiàn)HBsAg低濃度標(biāo)本時(shí)，檢測(cè)方法的敏感度尤為重要，由于影響檢測(cè)結(jié)果的因素眾多，濃度處于灰區(qū)附近的標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果差異性大，臨床重復(fù)性差。隨著檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，CMI分析法以高靈敏度攻克了HbsAg低濃度不易被檢測(cè)的問(wèn)題。本文將ELISA、CMI兩種方法進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本院2009年1月至2012年3月300例體檢者，其中男性192例，女性108例，年齡37～55歲，平均（38±3.9）歲。研究對(duì)象空腹，無(wú)菌情況下用無(wú)肝素真空采血管采集肘靜脈血5mL，1小時(shí)內(nèi)， 用3000r/min轉(zhuǎn)速離心10min，分離并吸取上層血清，溶血樣本棄用，即刻檢測(cè)或4℃保存3天內(nèi)檢測(cè)。檢測(cè)前樣本恢復(fù)至室溫，不可反復(fù)復(fù)溫。ELISA法測(cè)定乙肝“兩對(duì)半”試劑盒由廣州達(dá)安基因股份有限公司提供，酶標(biāo)儀、洗板機(jī)由上海滬峰生物科技有限公司提供。CMI采用美國(guó)雅培全自動(dòng)酶免分析儀 ARCHI-TECT-i2000及相應(yīng)配套試劑產(chǎn)品。同時(shí)將本省臨床檢驗(yàn)中心提供的臨界值控制品作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 Elisa法

根據(jù)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行上樣、孵育、洗滌、加酶標(biāo)抗體、顯色、數(shù)據(jù)讀取、統(tǒng)計(jì)分析。在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

1.2.2 CMIA法

本研究CMIA法采用儀器全自動(dòng)檢測(cè)，事先設(shè)置標(biāo)本的位置、檢測(cè)內(nèi)容，儀器自動(dòng)檢測(cè)讀取數(shù)據(jù)，根據(jù)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3 結(jié)果判讀

將本省臨床檢驗(yàn)中心提供的臨界值控制品稀釋成不同濃度的標(biāo)本，利用2種檢測(cè)方法進(jìn)行5次檢測(cè)。ELISA法在HBsAg OD值與臨界OD值的比例超過(guò)1時(shí)顯示為陽(yáng)性，HBeAb與HbcAbOD值與臨界OD值的比例≤1時(shí)顯示為陽(yáng)性。HBsAg與HbsAb在CMIA法中采取定量法，使用相對(duì)光強(qiáng)度（RLU）與標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出上述2種指標(biāo)的濃度，HBeAg、HBcAbRLU與臨界值RLU的比值超過(guò)1時(shí)顯示為陽(yáng)性，HBeAbRLU與臨界值RLU的比值≤1時(shí)顯示為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間比較采用t檢驗(yàn)，兩組間的相關(guān)性采用直線相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 ELISA與CMIA法：兩種方法對(duì)0.1IU/ml以下的HbsAg均具有檢出效果，具體如表1。

表1 2種檢測(cè)方法敏感度的比較

2.2 ELISA與CMIA法檢測(cè)時(shí)，HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb四項(xiàng)標(biāo)志物的檢出符合率均高于95%，而HBcAb的檢出符合率僅有87.3%。具體如表2。

表2 ELISA與CMIA法檢測(cè)乙肝標(biāo)志物的結(jié)果（n=300）

2.3 兩種方法精密度比較

ELISA法批內(nèi)3%～5%，批間5%～10%，而CMIA法批內(nèi)＜3%，批間＜5%。

3 討 論

ELISA檢測(cè)法是目前國(guó)內(nèi)各血液檢查最常用的方法之一，根據(jù)結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)[2-4]。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析，以了解被測(cè)標(biāo)本中抗體或抗原含量。ELISA操作簡(jiǎn)單故被廣泛運(yùn)用，但其加樣、溫度、孵育時(shí)間、洗板、顯色等因素的影響，導(dǎo)致有一定的假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，給臨床結(jié)果判讀帶來(lái)一定程度的影響[5]。

CMIA法將單克隆抗體所包被的磁性微粒，作為固相載體（如磁性微粒、樹(shù)脂、聚苯乙烯珠），使小分子顆粒與抗體結(jié)合，使抗體捕捉能力得到提高，并增強(qiáng)了表面積的吸咐，且能與液體在磁場(chǎng)中分離，使其檢測(cè)具有檢測(cè)速度快、靈敏度高、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)提高臨床有關(guān)疾病的診斷的速率有重要意義[6]。且該方法所使用的試劑對(duì)人體無(wú)危害、準(zhǔn)確度高、線性范圍廣，值得臨床推廣。美國(guó)雅培全自動(dòng)酶免分析儀ARCHI-TECT-i2000系統(tǒng)的自動(dòng)化使人工操作誤差減少，標(biāo)本間相互交叉污染率低，且儀器的自動(dòng)化做到了隨機(jī)連續(xù)檢測(cè)，適于臨床檢驗(yàn)即時(shí)之需，所以可檢出人群中低濃度和自然感染獲得的乙肝核心抗體。

本研究顯示ELISA及CMIA均能夠滿(mǎn)足臨床檢驗(yàn)的需求，但是從自動(dòng)化程度可知CMIA技術(shù)較為理想，但其試劑、儀器費(fèi)用較高，醫(yī)療單位可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行檢測(cè)方法的選擇。

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R512.6+2

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1671-8194（2013）25-0213-02