氣－質聯用分析雷公藤中萜和生物堿

郭志峰，武曉陽，張曉璇，高志力

（河北大學化學與環境科學學院藥物化學與分子診斷實驗室，河北保定 071002）

氣－質聯用分析雷公藤中萜和生物堿

郭志峰，武曉陽，張曉璇，高志力

（河北大學化學與環境科學學院藥物化學與分子診斷實驗室，河北保定 071002）

采用GC－MS法對雷公藤中的帖和生物堿進行了定性分析.雷公藤提取液先經去脂，再萃取萜和生物堿.去除的脂類經氣相色譜分析共分離了130個峰，由它們所對應的質譜，通過譜圖檢索和譜圖解析，鑒定推斷出58種化合物.這些物質主要為醇、醛、酸、酯、醚、酮等.雷公藤生物堿提取液色譜分離出111個峰，鑒定出40種物質.其中萜類和生物堿相質量分數30%，其余化合物絕大多數是酸脂類化合物.

雷公藤；生物堿；乙醚；GC－MS

雷公藤（Tripterygium wilfordii）又名黃藤、菜蟲藥、斷腸草等，屬衛矛科植物，產于浙江、湖南、福建等省，主要分布在長江中下游地區.雷公藤屬有毒中藥［1］，藥理成分主要為萜類和生物堿［2－4］，毒性大小依次為二萜、生物堿、三萜，臨床上用來治療類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、腎小球炎及各種皮膚病疾患［5－6］.其總生物堿對菜青蟲、粘蟲、小菜蛾有很強的毒殺和生長抑制作用［7－11］.迄今，從雷公藤屬植物中分離出結構明確的化合物約200種［3］，但仍有一些低含量化合物不清楚.目前國內外雷公藤分析方法主要有：HPLC法、高效毛細管電泳法、離子對色譜法、2D－NMR技術、薄層掃描法、光譜解析法等.這些方法受儀器檢測限限制，有些微含量成分難以確定.氣相色譜－質譜聯用（GC－MS），極限檢測限可達10－15g，且同時具有分離和定性2種功能.本文采用GC－MS分析技術，對雷公藤根皮粉末的乙醇水提取液進行了分析.由分離出的色譜峰對應的質譜，鑒定出雷公藤所含化合物.

1 實驗部分

1.1 儀器和材料

1.1.1 儀器

7890A－5975CGC－MS（Agilent）；色譜柱：BPX－5交聯彈性石英毛細管柱（30m×0.22mm，0.25μm）；ZFQ 85A旋轉蒸發器（上海醫械專機廠）；超聲波清洗器，搖擺式高速中藥粉碎機，索氏提取器.

1.1.2 藥材和試劑

雷公藤塊莖（由安國藥材公司提供）；體積分數為95% 乙醇，二氯甲烷，三氯甲烷，乙醚，濃鹽酸；氫氧化鈉，干燥的無水硫酸鈉（以上試劑均為分析純）；實驗中所用水均為二次蒸餾水.

1.2 樣品制備

雷公藤帶皮塊莖，機械碎成小塊，經高速粉碎機粉碎成末.稱取粉末10g，加入乙醇水溶液（V（乙醇）∶V（水）＝80∶20）60mL浸泡過夜，再經索氏提取器，提取至無色（大約8h）.蒸去乙醇，余液加12mol／L HCl（1＋1）15mL回流酸化（pH＝1）1h，室溫過濾，濾出液用純化過的乙醚10mL萃取3次，合并3次乙醚萃取液.氮氣濃縮至1mL，－20℃低溫保存，作為樣品S1，備GC－MS分析.

乙醚萃取后剩余水相溶液，水浴（50℃）除去殘留乙醚，20mol／L NaOH溶液，調節pH到13，二氯甲烷10mL萃取3次，合并3次二氯甲烷萃取液.氮氣濃縮至1mL，－20℃低溫保存，作為樣品S2，備生物堿樣品分析.

1.3 GC－MS分析條件

色譜條件：色譜柱為DB－1交聯彈性石英毛細管柱（30m×320μm，0.25μm）.進樣口溫度280℃，接口管道溫度220℃，柱流量1.6mL／min，柱前壓86.9kPa，分流進樣，分流比1／10，載氣為氦氣；程序升溫：S1樣品，初始溫度40℃，停1min后以10℃／min的升溫速率升至200℃，不停留，以4℃／min的升溫速率升至280℃，保持10min.S2樣品，初始溫度40℃，停1min后以40℃／min的升溫速率升至200℃，不停留，以4℃／min的升溫速率升至280℃，保持10min.進樣1μL.

質譜條件：電離方式EI，電子能量70eV，源溫150℃，收集電流200μA，全程掃描m／z33～500.

2 結果與討論

2.1 雷公藤S1樣品分析結果

雷公藤索氏提取后，大部分物質轉移到提取液中.乙醇提取液酸化，乙醚去脂，氮氣濃縮后得淡黃色S1樣品.圖1是S1樣品的GC－MS的分析圖.由圖1看出共分離出130色譜峰，其中高溫區分出幾個大峰，相對含量占到38%.根據它們的質譜，經圖譜檢索出58種成分，表1列出了鑒定出的化合物名稱.其中41峰為棕櫚酸，56，57峰為雷芬萜.從表中看出，它們主要為酸、醇、酮、酯、生物堿、萜類、烷烴、醚、醛等化合物.萜類化合物相對含量較高，是雷公藤中的藥用活性成分.還有些色譜峰，它們的質譜在譜庫中檢索的匹配度不到80%，表1未列出.其中有1個較大色譜峰（圖1中a峰，保留時間為46.631min），它的相對分子質量與山海棠素和雷芬萜分子通式一致.結合譜圖檢索和質譜的碎片離子，推定為山海棠素類化合物.

2.2 雷公藤中生物堿的分析結果

S2樣品旨在分析雷公藤中的生物堿.圖2是它的GC－MS分析色譜圖.由圖2看出，共分離出111個色譜峰.根據它們的質譜，經譜圖檢索和人工解析，鑒定出40種化合物（表2）.有幾個相對較大的色譜峰（圖2中a，b，e峰），其質譜在譜庫檢索中，沒有相應的化合物與之匹配，未鑒定出.其余的色譜峰（圖2中d，c，f，g，h，i，j峰），它們的分子量有的與三環氧化合物分子通式一致，有的與雷芬萜分子通式一致.由碎片離子，推定其中的c，f，g色譜峰為三環氧類化合物；d，h，i，j4個峰為雷芬萜.由它們的碎片離子，定出了它們的取代基.其中d峰取代基R為2個甲基，1個乙基；i峰為2個乙基，1個H；j峰為3個甲基.由表2看出，S2樣品中檢出的生物堿不多，原因可能是雷公藤中生物堿的分子量和極性較大，用二氯甲烷不能有效萃取過來或其中有些成分揮發性差，GC－MS檢測不到.

圖2 S2樣品色譜Fig.2 Chromatogram of S2sample

表1 雷公藤乙醚萃取液GC－MS分析結果Tab.1 GC－MS analysis result of aether extract fromTripterygium wilfordii

續表1Continue tab.1

續表1Continue tab.1

表2 雷公藤二氯甲烷萃取液GC－MS分析結果Tab.2 Tripterygium wilfordii methylene chloride extract GC－MS analysis results

續表2Continue tab.2

3 結論

采用GC－MS的方法，對雷公藤粉末乙醇提取液中的去脂乙醚萃取液和二氯甲烷的生物堿提取液的化學成分進行定性分析.乙醚提取液中色譜共分出130個峰，由質譜鑒定出58種化合物，主要是酸，醇，酮，酯，醚，烷烴類，萜類，類芬萜.二氯甲烷生物堿提取液色譜共分出111個峰，譜圖檢索和人工質譜解析鑒定出的40種化合物，主要為生物堿，酸，醇，酮，醚，烷烴.

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（責任編輯：梁俊紅）

Gas chromatography－mass spectrometry analysis of terpenes and alkaloids in Tripterygium wilfordii

GUO Zhifeng，WU Xiaoyang，ZHANG Xiaoxuan，GAO Zhili
（Key Laboratory of Medical Chemistry and Molecular Diagnosis，College of Chemistry and Environmental Science，Hebei University，Baoding 071002，China）

Terpenes and Alkaloids in Tripterygium wilfordii were analyzed using GC－MS.Before alkaloids and terpenes were striped the extracted liquids of Tripterygium wilfordii had been defatted by ether，which was separated 130peaks by gas chromatographic.58compounds were identified through their corresponding to the mass spectrometry.These substances included mainly alcohols，aldehydes，acids，esters，ether，terpenoids and alkyls etc.The liquid extracted alkaloids were separated 111peaks and 40substances were identified.The relative content of terpenoids and alkaloids were 30%，and others were mainly acid compound and lipid compounds.

Tripterygium wilfordii；alkaloids；aether；GC－MS

O657.63

A

1000－1565（2013）02－0167－08

10.3969／j.issn.1000－1565.2013.02.011

2012－10－20

國家自然科學基金資助項目（20575016）

郭志峰（1955－），男，河北保定人，河北大學研究員，主要從事有機質譜方面研究.E－mail：gzfvg＠hbu.edu.cn