HPLC法測定縮泉膠囊中烏藥醚內酯的含量

李厚洋蔡其輝田宏現吳開慧

（1 常德市第一人民醫院藥劑科，湖南 常德 415000；2 吉首大學生物資源與環境科學學院，湖南 吉首 416000）

HPLC法測定縮泉膠囊中烏藥醚內酯的含量

李厚洋1蔡其輝2田宏現2吳開慧1

（1 常德市第一人民醫院藥劑科，湖南 常德 415000；2 吉首大學生物資源與環境科學學院，湖南 吉首 416000）

目的 建立采用高效液相色譜法測定縮泉膠囊中烏藥醚內酯含量的方法。方法 采用Shimadzu高效液相色譜儀，C18色譜柱；流動相為乙腈：水（56∶44），檢測波長為235nm，流速為1.0mL/min。結果 烏藥醚內酯在4.8～10.8μg范圍內，呈現出良好的線形關系，r=0.9998；平均回收率98.2%，RSD為0.88%（n=5）。結論 本方法操作簡單易行，專屬性強，準確可靠，可用于縮泉膠囊的質量控制。

縮泉膠囊；高效液相色譜法；烏藥醚內酯

縮泉膠囊由山藥、益智仁、烏藥3味藥組成的復方制劑縮泉膠囊，具有補腎縮尿。用于腎虛之小便頻有頻數，夜臥遺尿[1]；而烏藥為樟科植物烏藥（Lindera aggregata（Sims）Kostern.）的干燥塊根，具有順氣止痛，溫腎散寒功能，用于胸腹脹痛，氣逆喘急，膀胱虛冷，遺尿尿頻，疝氣，痛經等[2]，其主要有效成分是烏藥醚內酯[3，4]，其中最能體現烏藥特征的成分應是呋喃倍半萜及其內酯類成分[5]。因此，本文采用高效液相色譜法，對縮泉膠囊中烏藥藥材的烏藥醚內酯含量進行測定，為縮泉膠囊的推廣應用、質量控制提供有效依據。

1 實驗材料

1.1 儀器

Shimadzu LC-10AT泵（日本島津公司），Shimadzu SPD-10A紫外檢測器（日本島津公司）；Rheodyne 7125六通進樣閥（loop=20μL）（日本島津公司）；Shimadzu Pack-ODS柱，250×4.6mm（日本島津公司）；N3000色譜工作站+forWindows2000（浙江大學智能研究所）；FA-2004電子分析天平（上海天平儀器廠）；KQ-250E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

烏藥醚內酯（批號：200602，中國藥品生物制品檢定所）。縮泉膠囊（湖南漢森制藥有限公司生產，規格：每粒裝0.3g，本醫院藥劑科提供）。乙腈（湖南師大化學試劑廠，色譜純），乙醚（湖南師大化學試劑廠，分析純）；甲醇（湖南師大化學試劑廠，分析純）；水為二次重蒸餾水（自制）。

2 實驗方法與結果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取烏藥醚內酯對照品15.0mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解，加甲醇至刻度，搖勻，即得每1mL中含烏藥醚內酯0.6mg的對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取裝量差異項下的內容物，約1.0g，精密稱定，置索氏提取器中，加入乙醚30mL，提取4h，提取液揮干，殘渣用甲醇分次溶解，轉移至25mL容量至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.3 色譜條件

色譜柱：Shimadzu Pack-ODS柱；乙腈∶水（56∶44）為流動相；檢測波長為235nm，靈敏度：0.005AUFS，流速為1mL/min，柱溫:室溫，烏藥醚內酯在此色譜條件下的保留時間為16min；具體見色譜圖1：對照品A、樣品C。

2.4 方法學考察

2.4.1 準確性試驗

精密吸取對照品溶液10μL，重復進樣6次，分別測定峰面積值，計算出烏藥醚內酯的RSD為1.46%。

表1 回收率測定結果

圖1 烏藥醚內酯對照品（A）、空白（B）、樣品（C）色譜圖

2.4.2 重復性試驗

取同一批樣品（批號：080201），按2.2項下供試品溶液操作方法，制備6份供試品溶液，按在上述色譜條件下，精密吸取10μL，重復平行測定，根據峰面積值，計算出烏藥醚內酯的RSD為1.10%。

2.4.3 線性關系考察

取上述對照品的溶液分別以8.0，10.0，12.0，14.0，16.0，18.0μL進樣分析，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積值（Y）為橫坐標、以對照品的進樣量（X）為縱坐標作圖，進行線性回歸。得回歸方程分別為：Y（烏藥醚內酯）=7362X+431.6，r=0.9998。結果表明烏藥醚內酯進樣量在4.8～10.8μg范圍內線性關系良好。

2.4.4 空白試驗

按照質量標準與處方比例制備缺味（烏藥）中藥的陰性樣品的制劑，按2.2項下供試品溶液操作方法進行樣品處理，所得的空白試液，精密吸取20μL，注入液相色譜儀中，測定分析，結果顯示無干擾，具體見色譜圖圖1：空白（B）。

2.4.5 穩定性試驗

取供試品溶液（批號為080201，含量為0.10mg/粒），每2h進樣一次，共測定6次，每次20μL，將峰面積代入回歸方程，計算，樣品中烏藥醚內酯的RSD值（n=6）為1.24%；試驗結果顯示，供試品在12h內穩定性良好。

2.4.6 加樣回收率試驗

精密稱取裝量差異項下的縮泉膠囊（批號為080201，含量為0.10mg/粒）的內容物，6份，每份1.0g，每份加入精密量取的烏藥醚內酯對照液各0.1mL，6份樣品同時提取，其方法同2.2項下的供試品溶液制備方法，制備樣品溶液，按上述色譜條件測定，計算回收率。結果烏藥醚內酯的加樣平均回收率為 98.2%；RSD分別為0.88% （表1）。

2.5 樣品測定

分別精密吸取對照品溶液與不同批號縮泉膠囊按2.2項下的供試液溶液制備方法，制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，用外標法計算出樣品中烏藥醚內酯的含量，結果分別見表2。

表2 縮泉膠囊中烏藥醚內酯含量測定結果（n=5）

3 討 論

3.1 色譜條件的選擇

本試驗，對流動相乙腈和水的比例進行試驗考察，考察20∶80、30∶70、40∶60、60∶40、70∶30、80∶20等比例乙腈與水流動相溶液；實驗結果表明：隨著乙腈濃度的增加，出峰的時間提前，使樣品的分離度不理想[6]；而乙腈濃度減少時，樣品出現雙峰、拖尾等現象；最后經試驗確定，以乙腈∶水（5∶44）的流動相，獲得較好的峰形，呈正態分布，分離度＞1.5。

3.2 提取時間的考察

采用乙醚為萃取溶媒，對萃取時間所得烏藥醚內酯含量進行了考察，結果萃取4h后含量不再變化，故本實驗選擇萃取時間為4h。

3.3 本實驗采用HPLC法測定縮泉膠囊中烏藥藥材中烏藥醚內酯的含量，其提取方法簡便，分析快速，與本藥品原質量標準采用薄層鑒別制備后的烏藥藥材的質量，精密度更高，能更好地用于縮泉膠囊的質量控制。

參考方獻

[1] 國家藥品監督管理局標準(試行)WS3-654(Z-130)-2003(Z)[S].

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:化學工業出版社,2010:71-72.

[3] 蔡立紅,俞桂新,王崢濤,等.高效液相色譜法測定烏藥中烏藥醚內酯的含量[J].中國中藥雜志,2004,29(7):657-659.

[4] 閆利利,王金芳,李秋月,等.烏藥的化學成分研究[J].中國藥業,2013, 22(2):16-17.

[5] 王軍偉,阮冰.烏藥的植化及藥理研究概況[J].浙江中醫雜志,2006, 41(11):6751.

[6] 余翠琴,陳方亮.高效液相色譜法測定烏藥中烏藥醚內酯[J].中草藥,2009,40(6):983-984.

HPLC Determination of Linderane in Suoquan Capsules

LI Hou-yang1, CAI Qi-hui2, TIAN Hong-xian2, WU Kai-hui1
（1 Department of Pharmacy, Changde First People's Hospital, Changde 41500, China; 2 Biological Resources and Environment Science College, Jishou University, Jishou 416000, China）

Objective HPLC methods were established for the determination linderane of Suoquan capsules. Methods The separation was performed on a Shimadzu HPLC, C18 chromatography column; The mobile phase was composed of acetonitrile-water （56∶44）；The flowrate was 1.0mL/min; The detection wavelenth was 235nm. Results There is a good linear relationship within the rang of 4.8～10.8μg, r=0.9998; The average recovery was 98.2%; RSD=0.88%. Conclusions This method is simple, reproducible, accurate and reliable, and can be used for quality control of Suoquan capsule.

Suoquan; Capsules; HPLC; Linderane

R282.710.3

B

1671-8194（2013）33-0033-02