轉錄因子Sp1在胃癌中的表達與臨床病理的關系※

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轉錄因子Sp1在胃癌中的表達與臨床病理的關系※

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目的對比分析Sp1在胃癌、不典型增生及正常組織中的蛋白表達差異，并探討Sp1蛋白表達與臨床病理特征的相關性。方法應用免疫組化的方法，檢測并對比胃癌、不典型增生及正常組織中Spl蛋白的表達。結果Spl蛋白在胃癌組織中陽性表達率高達58.7%，顯著高于不典型增生（23.8%）及正常組織（14.3%）中Spl的陽性表達率，差異有統計學意義（P＜0.05）；Sp1蛋白陽性表達與腫瘤浸潤深度及腫瘤分期、淋巴結轉移之間具有相關性。結論Sp1表達在胃癌的發生、發展中具有一定作用，可作為胃癌預后評價的獨立影響因子，具有一定的實用價值。

轉錄因子Sp1；胃癌；不典型增生；病理

胃癌是世界最常見的惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率均居我國惡性腫瘤前列，全世界每年約有70萬人死于胃癌，其中我國死亡31萬人，占44%[1-2]。在胃癌的發生、發展過程中，存在著多種癌基因及抑癌基因累積的復雜進程[3]，對各種癌基因或抑癌基因在胃癌發展不同階段的水平進行檢測，可進一步揭示基因變化在胃癌發生、發展進程中的作用，為尋找更有價值的早期診斷指標提供有力的依據。核轉錄因子Spl是一種DNA結合蛋白，與基因啟動子區的GC盒相結合，參與細胞及病毒相關基因的轉錄和調節，在腫瘤組織細胞存活、生長以及血管形成中具有關鍵性作用，其異常活化和表達還參與眾多惡性腫瘤的發展進程。本研究通過免疫組織化學方法檢測了Spl蛋白在胃癌、癌前病變及正常組織中的表達情況，探討了Sp1蛋白表達與胃癌發生、發展過程及其與臨床病理特征的相關性，為胃癌的早期診斷治療及預后評價提供了新的生物標志物。

1 資料與方法

1.1 一般資料75例胃癌病例標本均來自2009年1月～2010年12月揚中市人民醫院外科住院手術患者，其中高度分化、中度分化、低度分化患者分別為26、24、25例；另取同期普查人群中胃不典型增生組織21例、正常組織14例作為對照。所有胃癌病例均經病理明確診斷并按UICC第5版進行TNM分期，均接受胃切除術及淋巴結清掃術，術前無化療和放療史，所有病例均具有完整的臨床、病理及隨訪信息。

1.2 Spl免疫組織化學染色所有標本均經過10%甲醛固定、石蠟包埋、二甲苯脫蠟、梯度酒精至水化后切片。所有病理切片均應用免疫組織化學 SP法進行染色，具體操作嚴格按試劑使用說明書進行。使用Santa Cruz公司（code420）試劑盒作為Spl單克隆抗體，一抗工作液濃度 1：100；二抗及乙二胺四乙酸（DAB）顯色液、抗體稀釋液均由福州邁新生物技術公司提供，陽性對照采用已知Spl陽性結腸癌切片染色，陰性對照采用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗。

1.3 陰陽性結果判定由2名病理高年資醫師進行盲法判讀，細胞核內出現棕黃色顆粒判定為染色陽性，并選取5個不同視野在顯微鏡下分別計數，每視野計數200個細胞，陽性細胞計數≤10%者判定為陰性，＞10%者判定為陽性。

1.4 統計學處理Spl蛋白陽性表達與臨床病理特征的相關性檢驗采用Mantel-Haenszel卡方檢驗，統計分析使用SPSS 13.0軟件包進行。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Sp1蛋白在胃癌、不典型增生及正常組織中的表達差異75例胃癌組織中Sp1陽性表達44例（陽性率58.7%）；21例不典型增生組織Sp1陽性5例（陽性率23.8%）；14例正常胃黏膜組織中Sp1陽性 2例（陽性率 14.3%）。結果顯示，胃癌組織中Sp1的表達與異型增生及正常胃黏膜中Spl表達存在顯著差異，同時隨著胃部病變程度的加深，Sp1陽性率有增加趨勢（χ2=14.7，P＜0.05）；而不同分化程度的胃癌組織中Spl蛋白陽性表達率差異并不顯著，見表1。

表1 Sp1蛋白在胃癌、不典型增生及正常組織中的表達差異(n)

2.2 胃癌患者Spl蛋白表達與臨床病理特征的相關性Spl蛋白在胃癌組織中陽性表達與患者年齡、性別、腫瘤大小之間相關性無顯著性（P均＞0.05）；但Sp1陽性表達率隨臨床分期增加而逐漸升高；淋巴結轉移組陽性表達率顯著高于淋巴結無轉移組；陽性表達率還隨浸潤深度增加而增加，各組間進行兩兩對比，差異均具有顯著性（P＜0.05），見表2。

表2 胃癌患者臨床病理特征與Sp1蛋白表達的相關性(n)

3 討論

Spl是序列特異的一種DNA結合蛋白，其過度表達和活化可正向調節腫瘤增殖和轉移潛能[4]，目前其它Sp轉錄因子（Sp2、Sp3、Sp4）也相繼被發現和克隆，它們具有相似結構和轉錄特性，共同組成了 Sp多基因家族[5]。進一步研究[6-7]表明，SP1活性變化可能與Sp1與Sp3比率變化、Sp1結合位點的甲基化、Sp1/Sp3抑制蛋白等有一定關聯，在此進程可能涉及到癌基因的激活與抑癌基因的失活，抑癌基因如P53、P73、VHL、Rb蛋白等可能與Sp1形成復合物，從而進一步阻斷Sp1與下游基因啟動子相結合，影響腫瘤發生、發展的進程。

本組 75例胃癌組織中 Spl蛋白表達的陽性率（58.7%）顯著高于不典型增生組織（23.8%）及正常胃黏膜組織（14.3%），提示隨著胃病變程度的加深，Sp1表達也有增加的趨勢。本研究結果還提示，Spl蛋白高表達狀況與腫瘤細胞浸潤深度、臨床分期、淋巴結轉移存在密切相關，提示Spl表達增加與腫瘤惡性程度、淋巴結轉移之間存在正相關。近年來的研究[8]還發現，Sp1陰性、弱陽性、強陽性表達患者的中位生存期分別為43個月、37個月和8個月，Sp1表達是影響患者預后的獨立因素。本組研究提示，監測Sp1水平，可為腫瘤的早期診斷、預后評估及對推動腫瘤臨床綜合治療的發展提供重要的理論依據，同時可在腫瘤患者的早期治療中應用Spl等多種癌基因抑制劑，干擾癌基因的異常表達和活化進程，可降低癌細胞的浸潤程度，減少遠處轉移發生的機率，從而進一步增加患者生存率和提高生存質量。

[1] Ferlay J,Bray F,Pisani P,Parkin DM,et al.GLOBOCAN 2002：Cancer incidence,mortality and prevalence worldwide.IARC Cancer Base No.5.Version 2.0[J].Lyon：IARC Press,2007.

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[4] Riber M,Strasberg RM.Unequal nuclear Sp1/GC box DNA binding activity distinguishes proliferating from differentiated senescent or apoptotic cells[J].Int J Cancer,2009,83：359-364.

[5] Koutsodontis G,Vasilaki E,Chou WC,et al. Physical and functional interactions between members of the tumor suppressor P53 and the Sp families of transcription factors：importance for the regulatin of genes involved in cell-cycle arrest and apotosis[J]. Biochem J,2005,389(Pt2)：443-445.

[6] Stratmann R,Krieg M,Haas R,et al.Putative control of angiogenesis in hemangioblastomas by the von Hippel-Lindau tumor suppressor gene[J].J NeuroPathol ExP Neurol,2007,56(11)：1242-1252.

[7] Milanini-Mongiat J,Pouyssegur J,Pages G.Identification of two Sp1 PhoSphorylation sites for P42/P44 mitogen-activated Protein kinases.Their implication in vascular endothelial growth factor gene transcription[J].J Biol Chem,2008,277(23)：20631-20639.

[8] 王理偉,李琦,華召來,等.轉錄因子Sp1在胃癌組織中的表達及其與胃癌預后的關系[J].中華腫瘤雜志,2007,29(2)：107-111.

R735.2

A

1673-5846(2013)09-0162-02

1揚中市腫瘤防治研究所，江蘇鎮江 212200

2揚中市人民醫院，江蘇鎮江 212200

江蘇省鎮江市科技發展項目（FZ2009012）