明目地黃丸對(duì)白內(nèi)障大鼠晶狀體內(nèi)SOD、MDA影響的實(shí)驗(yàn)研究*

許麗娟，倪學(xué)霞

（張家口市第四醫(yī)院藥劑科，張家口 075000）

白內(nèi)障在各種致盲因素中占27%，為次于年齡相關(guān)性黃斑變性的第二大致盲原因[1]；氧化應(yīng)力學(xué)說(shuō)為目前白內(nèi)障發(fā)病機(jī)制的重要學(xué)說(shuō)之一[2]。本文研究了明目地黃丸對(duì)白內(nèi)障模型大鼠晶狀體內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的影響，為發(fā)展治療白內(nèi)障的中藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑與儀器 亞硒酸鈉結(jié)晶體（Na2SeO3·5H2O）日本參天公司，明目地黃丸（北京勃然制藥有限公司），MDA、SOD及考馬斯亮藍(lán)試劑盒（南京建成生物工程研究所）。UV－2100雙光束紫外—可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京北分瑞利分析儀器集團(tuán)公司），微量移液器（上海求精生化試劑儀器有限公司）。FSLM－4型裂縫燈顯微鏡（深圳拓天儀器設(shè)備有限公司）。

1.1.2 動(dòng)物 健康純系Wistar大鼠乳鼠50只，雌雄兼用，鼠齡均為10 d，體質(zhì)量14～16 g，由河北北方學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組與模型制備 采用隨機(jī)數(shù)字表法將Wistar大鼠乳鼠隨機(jī)分為5組，每組各10只，即對(duì)照組10只、模型組10只、明目地黃丸高（1500mg/kg）、中（1000 mg/kg）、低（500 mg/kg）劑量組各 10只。各組乳鼠年齡均為10 d，體質(zhì)量14～16 g，以母乳及普通顆粒飼料分籠喂養(yǎng)，自由飲水。給模型組、明目地黃丸組大鼠頸背部皮下注射亞硒酸鈉溶液（3.46 mg/kg），隔日1次，連續(xù)3次[3]。對(duì)照組大鼠頸背部皮下注射等量生理鹽水。末次給藥后第3天用裂隙燈顯微鏡觀察大鼠晶狀體變化，晶狀體混濁為造模成功。

1.2.2 混懸液的配制及給藥 將明目地黃丸研碎后用蒸餾水配成不同質(zhì)量濃度的混懸液。分別裝于玻璃瓶中，密封，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｃ髂康攸S丸高、中、低劑量組分別灌胃給予明目地黃丸混懸液，灌胃量均為10 mL/kg體質(zhì)量，每日1次，持續(xù)30 d，對(duì)照組與模型組大鼠灌胃給予等量生理鹽水。

1.2.3 晶狀體檢查與分級(jí) 末次給藥后，用復(fù)方托吡卡胺滴眼液散瞳，用裂隙燈顯微鏡檢查各組大鼠晶狀體，混濁程度按下列標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)[4]：1）無(wú)混濁，晶狀體透明。2）輕度混濁，只在赤道部有空泡。3）中度混濁，空泡擴(kuò)展到中央。4）重度混濁，中央呈現(xiàn)白內(nèi)障。

1.2.4 晶狀體SOD活性與MDA含量測(cè)定 末次給藥后12 h，斷頭處死各組大鼠，立即取出雙側(cè)眼球。將眼球用0～4℃生理鹽水沖洗3次后，剝離晶狀體，用濾紙吸干，放在電子天平上稱(chēng)質(zhì)量，并記錄。將雙側(cè)晶狀體放入5 mL勻漿杯內(nèi)，加入適量0～4℃生理鹽水，用控溫多用高速組織搗碎機(jī)搗碎（10000 r/min，1.5 min），制成 3.5%晶狀體勻漿。將勻漿以2000 r/min低速離心8 min后，取上清液。用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活性，用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA含量，用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白含量。具體步驟按南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行[5-8]。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，正態(tài)分布計(jì)量資料的組間比較采用單因素方差分析，偏態(tài)分布的計(jì)量資料組間比較采用秩和檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)大鼠晶狀體混濁分級(jí)情況 晶狀體混濁分級(jí)情況見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠晶狀體混濁情況Tab.1 Opacity of the lens in rats例

2.2 實(shí)驗(yàn)大鼠晶狀體SOD活性和MDA含量的影響 模型組大鼠晶狀體SOD活性顯著低于對(duì)照組，MDA含量顯著高于對(duì)照組。明目地黃丸高、中劑量組的SOD活性均高于模型組，而MDA含量均低于模型組，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明明目地黃丸能提高白內(nèi)障大鼠的抗氧化能力。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠晶狀體SOD活性和MDA含量的比較（±s）Tab.2 Activity of SOD and the content of MDA of lens in rats（±s）

表2 各組大鼠晶狀體SOD活性和MDA含量的比較（±s）Tab.2 Activity of SOD and the content of MDA of lens in rats（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.05

組別 n MDA(U/mgprot) SOD(nmol/mgprot)對(duì)照組 10 0.32±0.28 36.77±4.01模型組 10 1.42±0.55* 26.08±3.75*明目地黃丸低劑量組 10 1.33±0.34 28.11±3.98明目地黃丸中劑量組 10 0.94±0.22▲ 32.21±3.24▲明目地黃丸高劑量組 10 0.72±0.26▲ 34.78±2.55▲

3 討論

明目地黃丸方是由六味地黃丸加味而來(lái)，即杞菊地黃丸加當(dāng)歸、白芍以補(bǔ)血，再配以明目退翳之白蒺藜和石決明，故其功用是滋腎養(yǎng)肝明目，適用于肝腎陰虛而至目澀畏光、視物模糊、迎風(fēng)流淚，即凡由肝腎陰虛而引起的內(nèi)障眼病皆可用之，全身無(wú)證可辨之瞳神疾患亦可服之，“蓋遵五輪之瞳神屬腎耳”[9]。

SOD及MDA反映眼內(nèi)抗自由基氧化能力及脂質(zhì)過(guò)氧化的過(guò)程。為此，筆者檢測(cè)了各組實(shí)驗(yàn)大鼠晶狀體SOD活性和MDA含量。結(jié)果表明明目地黃丸中、高劑量組大鼠晶狀體內(nèi)SOD活性顯著高于模型組，而MDA含量顯著低于模型組，這與文獻(xiàn)報(bào)道，活性氧自由基是導(dǎo)致白內(nèi)障的重要原因，抗氧化劑可有效地防治白內(nèi)障一致[10]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示明目地黃丸對(duì)白內(nèi)障有一定的治療作用，其機(jī)制可能是通過(guò)提高晶狀體抗氧化能力，降低脂質(zhì)過(guò)氧化來(lái)實(shí)現(xiàn)的；或者是其多種作用機(jī)制之一。由于明目地黃丸為復(fù)方制劑，成分較為復(fù)雜，其確切作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

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