厄貝沙坦胃滯留滲透泵片的制備及其在犬體內的藥動學研究

方 瑜，潘振華，曹德英（河北醫科大學藥學院，石家莊 050017）

厄貝沙坦是目前唯一具有全程干預糖尿病腎病進程證據的血管緊張素受體拮抗藥（ARB）[1]。對于給予厄貝沙坦干預早期糖尿病腎病的患者，長期堅持治療是成功的關鍵。對于血壓正常的早期糖尿病腎病患者，患者口服厄貝沙坦普通片劑后，其在胃內崩解，藥物較快地溶出并被吸收，體內血藥濃度迅速達到峰值。由于厄貝沙坦的生理活性，部分患者可能出現一過性體位性低血壓。該不良反應的發生，將嚴重降低患者的依從性，從而導致干預失敗。開發厄貝沙坦胃滯留滲透泵片，控制患者口服厄貝沙坦后的血藥濃度保持在平穩的水平，避免血藥峰谷波動現象[2]，減少不良反應，從而提高患者依從性，可使厄貝沙坦干預早期糖尿病腎病患者獲得成功。筆者制備了厄貝沙坦胃滯留滲透泵片，并采用高效液相色譜（HPLC）-熒光檢測法測定了Beagle犬血漿中厄貝沙坦濃度，考察了厄貝沙坦胃滯留滲透泵片在Beagle犬體內的藥動學并評價了緩釋作用。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1100液相系統，包括G1311A型四元輸液泵、G1321A熒光檢測器、G1313A型自動進樣器、G1316A型柱溫箱和G1379A型脫氣機（美國Agilent公司）；BY300A型小型包衣機（上海黃海藥檢儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

厄貝沙坦對照品（批號：100607-200301，純度：99.8%）、纈沙坦對照品（批號：100651-200902，純度：99.9%）均由中國食品藥品檢定研究院提供；厄貝沙坦原料藥（修正藥業集團柳河制藥有限公司，批號：20101101，純度：99.6%）；厄貝沙坦胃滯留滲透泵片（河北醫科大學藥學院自制，批號：20110601，規格：每片150 mg）；厄貝沙坦片（杭州賽諾菲安萬特民生制藥有限公司，批號：1004043，規格：每片150 mg）；甲醇、乙腈為色譜純，磷酸、三乙胺、二氯甲烷均為分析純，其他輔料均為藥用級。

1.3 動物

健康Beagle犬6只，體質量（7.5±1.0）kg，♀♂各半，上海新岡實驗動物場提供，合格證號：SCXK（滬）2002-0014。

2 方法與結果

2.1 厄貝沙坦胃滯留滲透泵片的制備

2.1.1 輕質多孔微球的制備：將聚丙烯酸樹脂RS溶于適量乙醇-二氯甲烷中，加入0.3%十二烷基硫酸鈉水溶液，50～100 r/min攪拌，至油珠粒徑為0.3～0.8 mm時，開始緩慢升溫，至40℃時固化4 h，過濾，裝柱，10倍柱體積熱水淋洗后，干燥即得。

2.1.2 片芯的制備：將輕質多孔微球、聚氧乙烯（PEO）、羥丙甲纖維素（HPMC）、氯化鈉、聚維酮按處方量混合均勻，加入無水乙醇制軟材，過20目篩制粒，40℃干燥12 h，加入硬脂酸鎂混勻，壓制膨脹漂浮層片芯；將厄貝沙坦、PEO按處方量混合均勻，加入無水乙醇制軟材，過20目篩制粒，40℃干燥12 h，加入硬脂酸鎂混勻，在上述片芯兩側加壓含藥層，制成片芯。

2.1.3 包衣與打孔：用醋酸纖維素丙酮溶液包衣，在片劑的雙側表面各打一直徑0.8 mm的小孔，即得。

2.2 血漿中厄貝沙坦測定方法[3-4]

2.2.1 色譜條件：色譜柱為Inersil CN（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為pH 3.0磷酸鹽緩沖液-甲醇-乙腈（67∶20∶13，V/V/V），流速為1.0 ml/min；熒光激發波長為250 nm，發射波長為371 nm；進樣量為20 μl。

2.2.2 血漿樣品的預處理：精密量取血漿0.3 ml，加內標纈沙坦溶液（50 μg/ml）10 μl、2 mol/L磷酸50 μl，混勻，加二氯甲烷5 ml，渦流混合10 min，10 000 r/min離心5 min，分取下層有機相于另一試管中，氮氣流吹干，殘留物加0.1 ml流動相溶解，渦流混合，取20 μl進樣。

2.3 方法學考察

2.3.1 方法的專屬性：取犬空白血漿、空白血漿+厄貝沙坦+內標、血漿樣品（給藥后4 h）+內標，依法處理后，在“2.2.1”項色譜條件下，進樣測定。結果表明，厄貝沙坦和內標的保留時間分別為12.49、14.19 min，峰形良好，無雜質干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.空白血漿；B.空白血漿+厄貝沙坦+內標；C.血漿樣品+內標；1.厄貝沙坦；2.內標Fig1 HPLC chromatogramsA.blank plasma；B.blank plasma+irbesartan+internal standard；C.plasma sample+internal standard；1.irbesartan；2.internal standard

2.3.2 標準曲線的制備：取空白血漿0.3 ml，加厄貝沙坦對照品溶液適量制備成質量濃度分別為0.5、1.0、2.5、5、10、25、50 μg/ml的血漿樣品，照“2.2.2”項下方法處理，進樣20 μl，記錄色譜圖。以樣品及內標的峰面積比值（A）為縱坐標，厄貝沙坦質量濃度（c）為橫坐標，進行線性回歸。得回歸方程為c＝987.51A－27.36（r＝0.999 1），結果表明，厄貝沙坦檢測質量濃度的線性范圍為0.5～50 μg/ml。

2.3.3 方法精密度及準確度試驗：取空白血漿0.3 ml，制備成低、中、高（1.0、5.0、30 μg/ml）3個質量濃度的血漿樣品，每日測3次，連續測定3 d的血漿樣品濃度，根據結果計算本法的方法回收率與精密度。結果，方法回收率分別為96.3%、95.9%、102.4%，日內RSD分別為4.97%、3.49%、3.06%，日間RSD分別為5.75%、8.82%、10.04%。

2.3.4 提取回收率試驗：取空白血漿0.3 ml，制備成低、中、高（1.0、5.0、30 μg/ml）3 個質量濃度的血漿樣品，依法處理。同時另取空白血漿0.3 ml，不加內標溶液，按“2.2.2”項下方法處理，向獲得的澄清液中加入相應濃度的標準溶液和內標溶液各10 μl，氮氣流下吹干。殘留物均以流動相0.1 ml溶解，進樣分析，獲得相應峰面積，以每一濃度2種處理方法峰面積比值計算提取回收率。結果，厄貝沙坦的提取回收率分別為89.4%、95.4%、92.1%，內標的提取回收率為94.7%。

2.3.5 樣品穩定性試驗：取空白血漿0.3 ml，制備低、高（1.0、30 μg/ml）2個質量濃度的血漿樣品，分別進行2次循環凍融穩定性、－20℃條件下凍存45 d穩定性和室溫放置2 h穩定性考察。結果，樣品2次循環凍融、－20℃條件下凍存45 d、室溫放置2 h均穩定。

2.4 藥動學實驗

將犬6只隨機均分成2組，采用雙周期自身交叉試驗，一組服用受試制劑厄貝沙坦胃滯留滲透泵片，另一組服用參比制劑厄貝沙坦片，劑量均為150 mg。2周后進行交叉試驗。于口服給藥前（0 h）和給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24、36、48、72 h取前肢靜脈血3 ml，并立即移入肝素化離心管中，10 000 r/min離心10 min，分離血漿，于－20℃冰箱中保存，檢測每個時間點厄貝沙坦的血藥濃度。用DAS統計軟件，采用梯形法計算AUC0-72h值，以半對數作圖法由消除相濃度點計算t1/2、tmax、cmax。2種制劑在犬體內的藥-時曲線見圖2，藥動學參數見表1。

圖2 2種制劑在犬體內的藥-時曲線Fig2 Plasma concentration-time curves of 2 kinds of preparations in Beagle dogs

表1 2種制劑在犬體內的藥動學參數（±s，n＝6）Tab1 Pharmacokinetic parameters of 2 kinds of preparations in Beagle dog（±s，n＝6）

表1 2種制劑在犬體內的藥動學參數（±s，n＝6）Tab1 Pharmacokinetic parameters of 2 kinds of preparations in Beagle dog（±s，n＝6）

與參比制劑比較：＊P＜0.05vs.reference preparation：＊P＜0.05

受試制劑5.43±3.79＊1.87×104±0.45×104＊17.5±4.7 6.07×105±8.61×104 6.26×105±8.94×104參數tmax，h cmax，μg/L t1/2，h AUC0-72 h，μg·h/L AUC0-∞，μg·h/L參比制劑1.21±0.76 2.93×104±0.71×104 14.2±4.9 6.57×105±1.19×105 6.84×105±1.28×105

結果，以厄貝沙坦AUC0-72h計算，厄貝沙坦胃滯留滲透泵片中厄貝沙坦的相對生物利用度為（92.1±18.5）%。方差分析結果顯示，受試制劑與參比制劑生物利用度無顯著性差異（P＞0.05），受試制劑AUC0-72h的90%置信區間為參比制劑相應參數的92.1%～119.4%。經分析，受試制劑與參比制劑間的tmax、cmax均有顯著性差異（P＜0.05）：受試制劑cmax的 90%置信區間為參比制劑的57.0%～81.3%，顯著降低。上述結果表明，受試制劑較參比制劑tmax明顯延長，cmax顯著降低，生物利用度無顯著性差異，具有明顯的緩釋作用。

3 討論

現有的難溶性藥物滲透泵制劑設計方法主要為普通雙室滲透泵片，主要問題在于藥物以固體微粒狀態進入腸道，而其進一步的溶解與吸收是否能完全進行，不能有效驗證[5]。厄貝沙坦在水中不能溶解，如果開發普通雙室滲透泵控釋制劑，其口服后在腸道中可排出藥物固體微粒，藥物的溶解存在困難，因此難以達到預期的生物利用度。由于厄貝沙坦在胃液的偏酸性環境下具有一定溶解度，制備具有胃滯留功能的滲透泵片，在整個釋藥周期內均能夠滯留于胃液中，因此藥物釋放后能夠快速溶解從而吸收，保證獲得理想的生物利用度。

[1]Andersen S，Br?chner-Mortensen J，Parving HH，et al.Kidney function during and after withdraw of long-term irbesatan treatment in patients with type 2 diabetes and microalbuminunor[J].Diabetes Care，2003，26（12）：3 296.

[2]Thombre AG，Appel LE，Chidlaw MB，et al.Osmotic drug delivery using swellable-core technology[J].J Control Release，2004，94（1）：75.

[3]王婉鋼，劉啟.HPLC-熒光檢測法測定人血漿中厄貝沙坦的濃度[J].中國藥房，2007，18（32）：2 512.

[4]González L，López JA，Alonso RM，et al.Fast sc-reeningmethod for the determination of angiotensinⅡreceptor antagonists in human plasma by high-performance liquid chromatography with fluorimetric detection[J].J Chromatogr A，2002，949（1）：49.

[5]Lu EX，Jiang ZQ，Zhang QZ，et al.A water-insoluble drug monolithic osmotic tablet system utilizing gum arabic as an osmotic，suspending and expanding agent[J].J Control Release，2003，92（3）：375.