GC-MS法檢測鹽酸雷尼替丁制劑中的20種鄰苯二甲酸酯類塑化劑

海麗萍，王雪芹（1.河南省直屬機關第一門診部，鄭州450003；2.河南省食品藥品檢驗所，鄭州450003）

在藥品制劑中添加塑化劑可增強囊殼的韌性和片劑薄膜衣的包衣穩定，使制劑不易破損且效果較好。但近年來關于增塑劑鄰苯二甲酸酯類（Phthalates，簡稱PAEs）對環境造成危害的報道[1-3]屢見不鮮。鄰苯二甲酸酯類被歸類為內分泌破壞性物質，并表現出生物累積性，可改變人體荷爾蒙中的雌激素水平，從而導致嚴重的健康問題，例如癌癥、生殖及發育損害等。增塑劑的檢測及污染研究已在國內引起人們的重視，但有關藥品中增塑劑的研究文獻報道較少。國家食品藥品監督管理局（以下簡稱藥監局）、中國食品藥品檢定研究院于2011年6月召開了“藥品中鄰苯二甲酸酯類物質應急檢驗工作會議”，要求對國家評價性抽驗重點品種進行塑化劑檢測。為了解藥品中鄰苯二甲酸酯類增塑劑的情況，筆者參照有關要求[4-6]，采用全掃描（SCAN）和選擇離子監測（SIR）模式，結合有機溶劑提取等前處理方法，建立了測定雷尼替丁制劑中鄰苯二甲酸酯類的氣相色譜-質譜（GC-MS）方法，以期能更準確、更全面地了解藥品中鄰苯二甲酸酯類的污染情況，及時為藥監局制訂監督方案提供數據支持。

1 材料

1.1 儀器

Finnigan TRAGE-DSQ GC/MS氣質聯用儀（美國熱電公司）。

1.2 藥品與試劑

17成分混標（德國Dr.Ehrenstorfer公司提供，批號：01025HE，每種成分均為1 000 μg/ml，以正己烷為稀釋溶劑）；塑化劑檢測專用3個單標對照品即鄰苯二甲酸二苯酯、鄰苯二甲酸二異壬酯和鄰苯二甲酸二異癸酯（中國食品藥品檢定研究院，純度：以100%計）；甲醇為色譜純。

285批樣品，包括281批雷尼替丁膠囊和4批雷尼替丁片（規格均為：每粒/片150 mg，批號略，來自國內106個不同廠家；4批片劑中有1批來自河南省食品藥品檢驗所）均為各省藥監局在全國醫藥市場上按照正常抽樣程序抽取的流通樣品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為DB-5MS毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣為氦氣，流速為1.0 ml/min；自動進樣，分流比為10∶1；進樣量為1 μl；進樣口溫度為250℃；柱溫為程序升溫：60℃保持1 min，以20℃/min的速率升至220℃保持1 min，以5℃/min的速率升至300℃保持7 min。

EI（電子轟擊）電離方式；電子轟擊能為70 eV；傳輸線溫度為280℃；離子源溫度為230℃；溶劑延時3.00 min。

試驗中各組分的定性分析采用SCAN模式，掃描質量范圍為50～650 amu；定量測定采用SIR模式。

2.2 溶液制備

2.2.1 標準溶液的制備。用甲醇將3個單標對照品分別溶解并稀釋制成1 mg/ml的溶液，再分別吸取17成分混標和3個單標溶液用甲醇稀釋成各含40 μg/ml的混標溶液，依次稀釋成質量濃度均為30、20、10、4、2 μg/ml的混合標準工作液。

2.2.2 樣品的制備。取待測樣品研細（囊殼剪碎），取細粉（碎片）1 g置于10 ml離心管中，準確加入甲醇5 ml，超聲30 min，靜置后取上清液（必要時濾過）作為供試品溶液，整個試驗過程不能接觸塑料設備。

2.3 檢測方法

2.3.1 提取溶劑的選擇。分別試驗了正己烷和甲醇等常用提取溶劑，結果均對鄰苯二甲酸酯有良好的提取效果。考慮到甲醇的揮發性毒性相對較小，且易得到色譜純試劑，故選用甲醇作為提取溶劑。

2.3.2 標準色譜圖。按質譜分析條件對20種鄰苯二甲酸酯類的混合標準工作液（質量濃度40、4 μg/ml）進行分析，結果，20種鄰苯二甲酸酯類化合物的總離子流SCAN色譜圖見圖1，SIR色譜圖見圖2。

圖1 20種鄰苯二甲酸酯類總離子流-SCAN色譜圖（40 μg/ml）Fig1 TIC-SCAN chromatograms of 20 kinds of phthalates（40 μg/ml）

圖2 20種鄰苯二甲酸酯類總離子流-SIR色譜圖（4 μg/ml）Fig 2TIC-SIR chromatograms of 20 kinds of phthalates（4 μg/ml）

由圖1、圖2可見，在此條件下20種鄰苯二甲酸酯均能良好地分離。20種化合物的特征離子見表1。

2.3.3 線性范圍與檢測限。利用外標法將峰面積與18種（除鄰苯二甲酸二異壬酯、鄰苯二甲酸二異癸酯外）鄰苯二甲酸酯類濃度之間的關系進行定量。結果，18種鄰苯二甲酸酯類檢測質量濃度線性范圍為2～40 μg/ml，相關系數均大于0.99。

以信噪比為3確定方法檢測限，得18種鄰苯二甲酸酯類的檢測限均大于2 μg/g（g指樣品質量）。

2.3.4 精密度試驗。將質量濃度為4 μg/ml的20種鄰苯二甲酸酯類混合標準工作液重復進樣6次，結果，峰面積的RSD均＜10%。

表1 20種鄰苯二甲酸酯的特征檢測離子Tab1 Mass ion of 20 kinds of phthalates

2.3.5 準確度試驗。取本品1 g，加入20種鄰苯二甲酸酯類的混合標準工作液適量，照“2.2.2”項下方法處理樣品，進樣檢測，計算回收率。結果，18種成分的回收率在79%～99%間。

2.4 鹽酸雷尼替丁制劑中鄰苯二甲酸酯類化合物的檢測結果

分別對不同廠家的285批樣品（片劑4批、膠囊劑281批），經“2.2.2”項下方法處理后，采用SCAN方式對鄰苯二甲酸酯類化合物的種類進行定性，用SIR方式對檢出陽性成分進行定量研究。依據待測樣品色譜峰的保留時間和特牲離子并結合計算機NIST譜庫檢索進行定性；分別用表1中的特征離子作為20種成分的監測離子，以色譜峰面積外標法進行定量。檢測結果見表2。

表2 樣品檢測結果Tab2 Results of the determination of samples

檢測結果顯示，285批樣品中，有1批檢出鄰苯二甲酸二乙酯，此批樣品為薄膜衣片（此為驗證建立的方法是否可行而制備的陽性對照樣品），原因是在包衣過程中為使包衣效果更好而使用了該物質；其他制劑中均未檢出20種塑化劑成分。

3 討論

（1）本文建立的方法適用于口服固體制劑中塑化劑的監測，及時為國家藥監局對口服固體制劑中塑化劑的監管工作提供了強有力的技術和數據支持。檢測限和檢出濃度均能滿足要求。選用既有揮發性、毒性較小、又容易得到色譜純級別的甲醇作為提取溶劑，利于監測工作的進行。

（2）塑化劑成分對液相色譜和液質聯用儀器的污染和殘留比較大；而選用氣相質譜聯用法可以同時測定多種塑化劑成分，同時對儀器和色譜柱的污染和殘留較小，且樣品處理簡單，方法快速、靈敏、簡便易行。由于塑化劑的各成分存留于塑料制品中幾率較大，因此整個試驗過程中禁止使用塑料容器。

（3）本色譜條件下（見圖1、圖2）保留時間在20～25 min的一簇色譜峰為鄰苯二甲酸二異壬酯、鄰苯二甲酸二異癸酯等系列同系物的混合峰，若樣品中明顯檢出色譜峰，應再進一步單標定位檢測；定量時暫不考慮表1中的19、20號峰。

[1]趙文紅.酞酸酯類增塑劑毒理研究進展[J].環境與職業醫學，2003，20（2）：135.

[2]王小逸，林光桃，容慧明，等.北京地區家庭中鄰苯二甲酸酯類環境污染物的調查[J].環境與健康雜志，2007，24（10）：820.

[3]鄭和輝，趙立文，劉玉敏，等.飲用水中鄰苯二甲酸酯的氣相色譜-質譜測定法[J].環境與健康雜志，2005，22（5）：377.

[4]蔡智鳴，史馨，張前龍，等.GC-MS測定人血清中酞酸酯類環境污染物[J].理化檢驗：化學分冊，2006，42（2）：115.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄31、78.

[6]中國食品藥品檢定研究院.2011年國家評價性抽樣品種塑化劑檢測任務工作手冊[S].2011.