兩種方法測定奧拉西坦葡萄糖注射液中5-羥甲基糠醛含量的比較

蘇彥文，張鳳榮，蘇彥斌

(1.吉林化工學院教務處，吉林吉林132022;2.吉林省食品藥品檢驗所，吉林長春130033，3.吉林化工學院化學與制藥工程學院，吉林吉林132022)

5-羥甲基糠醛 (5-Hydroxymethyl furfural，5-HMF)是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產生的一個醛類化合物［1-2］，對人體的橫紋肌和內臟有損害作用［3-4］，是含葡萄糖等單糖注射劑中重要的有關物質［5］，因此，葡萄糖制劑均要控制5-HMF的限度［6］.目前，檢測5-HMF的方法主要有紫外-可見分光光度法(UV)和反相高效液相色譜法(RP-HPLC)［7］.RP-HPLC 需要高效液相色譜儀，樣品處理要求高、檢測費時、成本高并需要對照品.UV法檢測5-HMF，最大吸收波長為284 nm，樣品在該處無干擾，參照5%葡萄糖注射液的限量，可以不用對照品，直接比較.本文分別用兩種方法，測定奧拉西坦葡萄糖注射液中5-HMF的含量.

1 儀器與試藥

島津UV-1700紫外-可見分光光度計，Metter AE-163電子天平，奧拉西坦葡萄糖注射液樣品(20120801、20120802、20120803、20121101).5-羥基甲基糠醛對照品，批號:BCBF6127V，Sigma公司，含量:99%.甲醇為色譜純，水為純化水，其它試劑為分析純.

2 方法與結果

2.1 紫外-可見分光光度法測定奧拉西坦克葡萄糖注射液中的5-HMF

2.1.1 專屬性

取5-HMF對照品，加水制成約10 μg/mL的溶液，作為對照品溶液;取樣品作為測試品溶液;另取奧拉西坦原料藥適量，加水制成4%的溶液，加枸櫞酸和枸櫞酸鈉適量，制成陰性對照溶液，取上述三種溶液，在200～400 nm用UV-1700紫外-可見分光光度計掃描，結果:對照品溶液在284 nm有最大吸收，奧拉西坦葡萄糖注射液也在284有吸收，陰性對照溶液在284 nm無吸收.

2.1.2 測定方法

精密量取奧拉西坦葡萄糖注射液樣品20 m:(約相當于葡萄糖1.0 g)，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為測試品溶液.另取5-HMF對照品約10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液.分別取對照品溶液和測試品溶液，在284 nm波長處測定吸光度，用對照品法計算5-HMF的含量.

2.1.3 重復性

取奧拉西坦葡萄糖注射液樣品1批，分別制備6份測試品溶液，作為供試品溶液.按2.1.2項下的測定方法測定.結果:樣品的平均含量為0.003 0%(以葡萄糖的標示含量計算)，RSD為4.21%，結果表明重復性較好.

急性乳腺炎主要是指乳房部最為多見的急性化膿感染性疾病。因產后婦女的抵抗力嚴重下降,在出現乳汁淤積、乳頭破損、乳管浸入乳房等情況后均會導致乳腺出現繼發感染,并因此導致該病發生,多出現在哺乳期早期階段[1]。中醫認為哺乳期早期乳腺炎應歸屬于“郁滯期乳癰”的范疇,多以推拿療法、外治法、針刺療法等為主要治療手段,而推拿療法是哺乳期早期乳腺炎最常見的一種特色治療方法。現結合我院接診的哺乳期早期乳腺炎患者,對揉散法聯合理療治療的方法及效果,做如下總結。

2.1.4 線性關系考察

取5-HMF對照品約 15 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 0.10、0.20、0.40、1.20、2.00、2.80、3.60 mL，分別置100 ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，在284 nm波長處測定吸光度，以濃度(μg/ml)對吸光度(A)回歸處理，得線性方程:Y=0.1330X+0.002 3，r=0.999 8.結果表明:5-HMF溶液在0.15～5.4 μg/mL范圍內，線性關系良好.

2.1.5 回收率實驗

精密稱取5-HMF對照品約5、10、15 mg各3份，分別置100 mL容量瓶中，按處方比例，加入奧拉西坦原料，按處方加入適量(枸櫞酸25 mg，枸櫞酸鈉50 mg)輔料，加水適量使溶解，分別加入5-HMF對照品溶液15 mL(0.100 1 mg/mL)，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取濾液5 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為測試品溶液.另取重復性項下的對照品溶液作為對照品溶液，同法測定，計算結果:平均加樣回收率為99.56%，RSD為2.40%.

2.1.6 穩定性實驗

5-HMF對照品溶液與測試品溶液，分別于0、1、2 h，在紫外-可見分光光度計上測定吸光度，計算含量，結果RSD為1.74%.結果顯示:測試品溶液在2 h內穩定.

2.2 RP-HPLC法測定奧拉西坦克葡萄糖注射液中的5-HMF

2.2.1 系統適用性與色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Agilent C18(250 ×4.6 mm，5 μm)，甲醇-0.1%磷酸溶液(10:90)為流動相，檢測波長為284 nm，柱溫:30 ℃，流速:0.7 ml/min，進樣量 10 μl，理論板數以5-HMF計為5 000以上，如圖1所示..

圖1 A:5-HMF對照品;B:奧拉西坦葡萄糖注射液測試品;C陰性

取5-HMF對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成10 μg/ml的溶液，取奧拉西坦葡萄糖注射液樣品作為測試品溶液.

2.2.3 專屬性試驗

取奧拉西坦原料藥適量，制成4%的溶液，加枸櫞酸和枸櫞酸鈉適量，制成陰性對照溶液，取溶液制備中的對照品溶液、測試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結果顯示:陰性對檢測無干擾.

2.2.4 重復性

取奧拉西坦葡萄糖注射液樣品1批，按上述色譜條件，分別測定6次.結果:樣品5-HMF的平均含量為0.0030%，RSD為0.02%，表明重復性較好.

2.2.5 線性關系考察

取5-HMF對照品約 10 mg，精密稱量，置100 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1.5、10 mL，分別置100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，分別作為線性試驗溶液(1)和(2);精密吸取線性試驗溶液(1)1 μL和線性試驗溶液(2)1、5、10、20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以進樣量(μg)對峰面積(A)回歸處理，結果:5-HMF進樣量在 0.001 494～0.199 2 μg范圍內，線性關系良好，線性方程:Y=12 694.45X-3.36，相關系數r=1.0.

表1 5-HMF含量測定標準曲線數據

2.2.6 最低檢測限和定量限

取對照品溶液，稀釋至0.02 μg/mL的溶液，進樣，記錄色譜圖，以信噪比S/N=3計算的最低檢測限為0.41 ng，以信噪比S/N=10計算的定量限 1，60 ng.

2.2.7 回收率實驗

精密稱取5-HMF對照品(含量:99%)約5 mg 3份，分別置100 mL量瓶中，按處方比例，加入適量輔料，加流動相適量使溶解，稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取濾液1 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為測試品溶液.精密稱取5-HMF對照品(含量:99%)約 5、10、15 mg各3份，分別置100 mL量瓶中，按處方比例，加入適量輔料，加流動相適量使溶解，分別加入對照品溶液15 mL(0.100 1 mg/mL)稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取濾液1 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為測試品溶液，取對照品溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算，結果:平均回收率為99.87%，RSD=1.2%(n=12)，結果精密度良好.

2.2.8 精密度實驗

取5-HMF的對照品溶液(濃度為4.98μg/mL)，連續進樣6次，每次進樣1 μL，記錄色譜圖及峰面積，RSD為0.41%，實驗結果表明精密度良好.

2.2.9 穩定性實驗

取對照品溶液，按以上色譜條件，分別于0、2、4 h，精密吸取供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，結果RSD為0.84%.結果顯示:5-HMF對照品溶液在4 h內穩定.

2.3 樣品測定

分別用紫外-可見分光光度法和高效液相色譜法，測定4批奧拉西坦葡萄糖注射液樣品，結果含5-HMF分別為0.002 8%、0.002 9%、0.002 9%、0.003 0%，兩種方法測定結果(紫外-可見分光光度法，用對照品法以吸光度計算，高效液相色譜法，用對照品法以峰面積計算，均以葡萄糖的標示量的百分含量計算)基本一致.

3 討 論

專屬性考查結果，兩種方法陰性均不干擾實驗，兩種方法相比，UV 方法［8］:簡單、快速、不需對照品;高效液相色譜法:相對成本高、麻煩、費時，還需要對照品等.因此，在陰性不發生干擾的前提下，應首選紫外-可見分光光度法，兩種方法檢測結果基本一致.

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［8］Zhang C，Chai XS，Luo XL，Fu SY，Zhan HY.Rapid method for determination of furfural and 5-hydroxymethyl furfural in pre-extraction stream of biomass using UV spectroscopy［J］.Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi，2010，30(1):247-250.