銀杏達莫聯(lián)合脂必泰膠囊對小鼠心肌缺血模型的保護性研究

李 健

(山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院藥學部，濟南 250011)

缺血性心臟病屬中醫(yī)學“胸痹”范疇，是目前引發(fā)突然死亡的主要原因之一，嚴重威脅人類健康。近年來，中藥在心肌缺血保護方面顯示出良好的前景。銀杏達莫是銀杏葉提取物，能有效地擴張腦血管、抑制血小板聚集、增加腦血流量、促進腦血液循環(huán)，抗氧化、清除自由基、緩解缺血、缺氧和舒張血管平滑肌等藥理作用［1］。今年藥理研究發(fā)現(xiàn)［2］，其能升高大鼠超氧化物歧化酶、降低丙二醛含量。近年研究發(fā)現(xiàn)［3］，脂必泰能有效地調脂，還能改善血管內皮功能，但目前未見關于銀杏達莫在心肌缺血保護作用的詳細研究。本研究擬在異丙腎上腺素誘發(fā)的小鼠心肌缺血模型上，探討銀杏達莫聯(lián)合脂必泰對心肌缺血的保護作用及作用特點，為臨床用藥提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

鹽酸異丙腎上腺(ISO)(上海禾豐制藥有限公司，批號6E2011);銀杏達莫注射液(山西普德藥業(yè)有限公司，批號20110120);脂必泰(成都地奧九泓制藥廠，批號101126);生理鹽水(四川科倫藥業(yè)股份有限公司)。磷酸肌酸激酶(CK)試劑盒、乳酸脫氫酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)試劑盒均購于北京中生生物工程公司;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器

ECG-651型心電圖儀(上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司)、721分光光度計(上海第三分析儀器廠)、CLSM共聚焦激光掃描顯微鏡(德國Zeiss公司)。

1.3 動物

SPF級昆明種小鼠40只，雌雄各半，體質量18!23g，平均體質量20.8±2.4g，購于山東中醫(yī)藥大學實驗動物中心(許可證號SCXK(魯)20070004)。

1.4 模型建立及分組

入組小鼠均在實驗前記錄Ⅱ導聯(lián)心電圖，剔除ECG異常者，并將其隨機分為對照組、模型組、銀杏達莫組以及聯(lián)合組。對照組和模型組小鼠給予10mg·kg－1NS，銀杏達莫組給予1ml/d腹腔注射，聯(lián)合組在銀杏達莫組基礎上給予4.8mg·kg－1。5min給予20mg·kg－1鹽酸異丙腎上素，連續(xù)2d皮下注射ISO。第2天注射3%戊巴比妥鈉ip麻醉后，仰臥位固定，記錄ISO注射前及注射15min后記錄1次Ⅱ導聯(lián)測定ST段J點上移值。2h后去眼球采血備用。將血樣3000r/min離心15min后取血清，血清CK、LHD含量按照比色法測定，血清SOD活性采用黃嘌呤氧化酶法測定，血清MDA含量按照硫代巴比妥酸法測定，以上測定均按試劑盒說明書進行操作。取血后立即處死小鼠取出心臟，剪去心室置于4%多聚甲醛中進行病理組織學檢查。

1.5 統(tǒng)計學處理

運用SPSS17.0分析所得數(shù)據(jù)，一般資料用均數(shù)±標準差(±s)表示，采用單因素方差分析進行組間比較，各組間樣本采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 對異丙腎上素誘發(fā)小鼠心肌缺血的影響

2.1.1 對心肌缺血小鼠心電圖ST段影響 表1顯示，與對照組相比，異丙腎上素皮下注射后，模型小鼠的心電圖ST段明顯抬高(P＜0.01)。銀杏達莫組及聯(lián)合組能明顯抑制異丙腎上素誘導的小鼠心電圖ST段的抬高(與模型組相比均P＜0.01)，且2組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

表1各組小鼠心肌缺血ECG、血清CK、LDH、MDA、SOD及NOS的影響(±s)

表1各組小鼠心肌缺血ECG、血清CK、LDH、MDA、SOD及NOS的影響(±s)

注:與對照組比較:1)P＜0.001，2)P ＜0.01;與模型組比較:3)P ＜0.001，4)P ＜0.01，5)P ＜0.05

組 別 例數(shù) ST段抬高(mV) CK(U"L－1) LDH(U"L－1) MDA(μmol"L－1) SOD(U"mL－1) NOS(KU"g－1)對 照 10 0.04±0.01 234.56±101.18 361.34±131.35 5.83±1.38 323.95±20.36 0.87±0.09模 型 10 0.74±0.381) 572.49±113.241)623.19±127.121) 11.42±1.731) 226.91±19.271) 0.59±0.072)銀杏達莫 10 0.51±0.233) 375.31±108.133)519.28±121.474) 7.13±1.343) 334.27±23.284) 1.10±0.134)聯(lián) 合 10 0.38±0.164) 338.58±102.544)462.71±113.945) 6.06±1.255) 397.16±30.213) 1.65±0.113)

2.1.2 對心肌缺血小鼠血清LDH、CK、SOD、MDA及NOS的影響 表1顯示，與對照組相比，模型組血清LDH、CK及MDA均明顯升高(P＜0.01)，而血清SOD和NOS明顯降低(P＜0.01)。與模型組相比，銀杏達莫組及聯(lián)合組均可提高心肌缺血小鼠血清SOD活性及NOS活性，降低MDA含量，抑制血清LDH和CK的增加(P＜0.01)。

2.2 對異丙腎上素誘發(fā)心肌缺血小鼠心肌損傷程度的影響

圖1顯示，對照組小鼠心肌組織未見病理形態(tài)改變。模型組小鼠缺血心肌呈萎縮、斷裂狀，部分心肌纖維胞漿呈凝固性壞死，部分呈溶解性壞死，心肌間炎癥細胞浸潤明顯。與模型組相比，銀杏達莫組及聯(lián)合組小鼠心肌組織病理損傷程度均有所減輕，且聯(lián)合組小鼠心肌組織病理改變情況明顯優(yōu)于銀杏達莫組，僅見少量心肌纖維萎縮和少量炎癥細胞浸潤。

3 討論

心血管疾病是臨床常見病、多發(fā)病，隨著社會人口的老年化，其發(fā)病率呈上升趨勢。心肌缺血為心血管常見疾病，長期心肌缺血會導致心肌梗死以及心細胞壞死。異丙腎上腺素皮下注射可加快心率，使心肌收縮力增強，增加心肌耗氧量，造成心肌細胞缺血，是一種常用的動物實驗性心肌缺血模型［4］。心電圖變化是心肌缺血模型成功與否的最直觀的指標［5］。本研究結果顯示，在異丙腎上腺素皮下注射后，模型組小鼠心電圖ST段明顯抬高，給予銀杏達莫和銀杏達莫聯(lián)合脂必泰能明顯抑制小鼠心電圖ST段的抬高，且銀杏達莫組與聯(lián)合組明顯比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。提示銀杏達莫對小鼠心肌缺血損傷具有一定保護作用，脂必泰能提高銀杏達莫的心肌缺血保護作用。

圖1 各組用藥對異丙腎腺上素誘發(fā)心肌缺血小鼠心肌損傷程度情況比較

LDH、CK是心肌缺血時心肌細胞受損程度的重要標志［6］。氧自由基形成過多可導致膜脂質過氧化加強，改變膜通透性及流動性，使心肌細胞的功能、結構發(fā)生改變，是心肌缺血發(fā)生的主要機制之一［7］。MDA含量可間接反映細胞受自由基損傷的程度。SOD活性高低可間接反映機體清除氧自由基的能力［8］，NOS是一種分布于血管內皮細胞、神經(jīng)細胞、中性粒細胞和巨噬細胞等含鐵的單氧化酶［9］。本研究結果顯示，在異丙腎上素皮下注射后，模型組小鼠血清LDH、CK及MDA均明顯升高，而血清SOD和NOS明顯降低(P＜0.01)。銀杏達莫組及聯(lián)合組均可提高心肌缺血小鼠血清SOD活性及NOS活性，降低MDA含量，抑制血清LDH和CK的增加(P＜0.01)，進一步提示銀杏達莫聯(lián)合脂必泰抗心肌缺血作用。

通過EN染色可顯示，心肌組織的病理變化可微觀地觀察心肌損傷程度［10］。本研究結果顯示，與模型組相比，銀杏達莫組及聯(lián)合組小鼠心肌組織病理損傷程度均有所減輕。聯(lián)合組僅見少量心肌纖維萎縮和少量炎癥細胞浸潤，其小鼠心肌組織病理改變較銀杏達莫組明顯減輕，提示銀杏達莫聯(lián)合脂必泰可明顯減輕心肌組織病理損傷程度，其原因可能與脂必泰改變血管內皮功能有關。

綜上所述，銀杏達莫聯(lián)合脂必泰對小鼠心肌損傷具有保護作用，其機制可能與增加NOS、SOD活性，抑制MDA含量和血清LDH、CK活性增加有關。

［1］史美娟.銀杏達莫注射液對心肌保護作用的藥效觀察［J］.中西醫(yī)結合心腦血管病雜志，2005，3(8):732-735.

［2］路華，欒家杰，宋建國.銀杏達莫與舒血寧對老齡大鼠血漿超氧化物歧化酶、丙二醛和一氧化氮含量及血液流變學的影響［J］.中國臨床藥理學與治療學，2006，11(5):582-587.

［3］賈圣英，黃全躍，周祁娜.脂必泰與阿托伐他汀的調脂療效及對血管內皮功能影響［J］.臨床心血管疾病雜志，2010，26(12):909-914.

［4］焦淑萍，周瑋，杜培革.野生山葡萄多酚對異丙腎上腺素誘發(fā)的小鼠心肌缺血的保護作用［J］.中國地方病防治雜志，2006，21(3):146-149.

［5］曹東，張國偉，金風麗，等.小紅參乙酸乙酯部位抗心肌缺血活性研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17(9):209-213.

［6］姚華，陳志武.Urantide對心肌缺血損傷的保護作用［J］.藥學學報，2008，43(2):150-156.

［7］韋健全，鄭子敏，潘勇，等.芒果苷對異丙腎上腺素誘發(fā)小鼠心肌缺血的保護作用［J］.中藥藥理與臨床，2008，24(2):16-21.

［8］李萍，李洪，賀冬林，等.川芎嗪注射液對小鼠缺血再灌注心肌的保護作用［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2006，26(1):32-37.

［9］陳曉光，王巖，吳巖，等.鹿茸多肽對大鼠心肌缺血損傷的保護作用［J］.中國中藥雜志，2009，34(15):1971-1973.

［10］李建宇，李怡，龔海英，等.蕨麻正丁醇提取部位對小鼠急性心肌缺血損傷的保護作用［J］.中西醫(yī)結合學報，2009，7(1):48-55.