高效液相色譜法同時測定醬腌菜中的3種色素

譚建兵，周 亮（重慶市開縣疾病預防控制中心 405499）

色素是指能被人適量食用的可使食物在一定程度上改變原有顏色的食品添加劑。其分為天然和人工合成兩種。天然色素一般無毒害作用，而人工合成色素多以苯、甲苯、萘等化工產品為原料，經過磺化、硝化、偶氮化等一系列有機反應化合而成，可影響人體細胞代謝、酶的活力，甚至能引起癌變，但由于其成本低廉，色澤鮮艷，著色力強，性質穩定，使用方便等特點使其在食品生產加工行業中被廣泛應用［1-2］。目前我國允許使用的人工合成色素有莧菜紅、胭脂紅、檸檬黃、日落黃和靛藍，在食品添加劑國家標準GB2760-2011［3］中規定了各種色素的允許使用量。本文結合日常工作實際，研究建立了一種簡單、有效的樣品純水提取法，采用高效液相色譜，以0.02mol／L乙酸銨、甲醇梯度洗脫的方式同時測定醬腌菜中檸檬黃、胭脂紅、日落黃，獲得滿意的實驗結果。

1 材料與方法

1.1 主要儀器 高效液相色譜儀：島津10AVP型附二極管陣列檢測器，色譜柱：4.6mm×250mm，5μm（依利特）；IKA A11basic樣品粉碎機（德國IKA公司）。

1.2 試劑與材料

1.2.1 材料 0.45μm水系微孔濾膜（津騰），5mL注射器。

1.2.2 試劑 甲醇（色譜純，Merck公司），乙酸銨、檸檬酸為優級純，實驗室用水均為超純水，電阻率18.25MΩ·cm（優譜公司超純水制備）。

1.2.3 標準儲備液 檸檬黃：中國計量科學研究院，批號：11001，濃度：0.50mg／mL，不確定度為1%，有效期至2014年4月，等級標準號為GBW（E）100001a。胭脂紅：中國計量科學研究院，批號：11001，濃度：0.50mg／mL，不確定度為1%，有效期至2014年4月，等級標準號為GBW（E）100004a。日落黃：中國計量科學研究院，批號：10001，濃度：0.50mg／mL，不確定度為1%，有效期至2013年7月，等級標準號為GBW（E）100003a。

1.2.4 標準溶液的配制 準確吸取3種標準溶液各5.00 mL，用純水稀釋至刻度，混勻，分別配制成濃度為5μg／mL、10 μg／mL、20μg／mL、40μg／mL、50μg／mL的標準工作曲線。

1.3 色譜條件 色譜柱：4.6mm×250mm，5μm HYPersil ODS2分析柱；流動相：A，甲醇，B，0.02mol／L乙酸銨，梯度洗脫（見表1）；流速：1.0mL／min；檢測器：二極管陣列；檢測波長：254nm，標準樣品圖譜如圖1所示。

圖1 標準樣品色譜圖（50μg／mL）

1.4 樣品處理 稱取1.00g已粉碎樣品于10mL容量瓶中，加水至刻度，用檸檬酸溶液調pH＝6左右，振搖3min，靜置3 h后置離心管中，2 000r／min離心5min，取上清液經微孔濾膜過濾后進樣分析。

2 結 果

2.1 線性范圍與檢出限 3種色素的濃度與峰面積呈良好的線性關系，相關系數均可達到0.999 2以上，以3倍的噪音計算出最低檢出量，再根據進樣量換算為檢出限，見表1。

2.2 精密度 取陰性樣品，分別加入3種色素10μg／mL、20 μg／mL標準溶液，連續進行6次測定，計算相對標準偏差RSD值。RSD值在為1.10%～2.43%之間，精密度較好。

2.3 回收率試驗 在已知含量的樣品中加入一定量的色素標準溶液，進行加標回收測定，計算加標回收率，結果見表2。由表2可見樣品加標回收率在88.3%～91.9%之間，回收率較理想。

表1 線性范圍、線性方程及相關系數

表2 方法回收率實驗結果

表3 兩種方法回收率比較

3 討 論

本研究的前處理方法為純水直接提取法，而國標GB／T5009.35-2003［4］采用聚酰胺吸附法。國標方法所需器材及試劑多，成本高，操作過程繁瑣，耗時長，損失大［5-6］。本法提取過程簡單，準確快速，且少了很多中間抽濾、洗滌、解析、蒸發以及吸附等環節，減少了操作誤差及不必要的損失，成本低，適應于大批量樣品的測定。兩種方法通過回收率實驗，純水直接提取法的檸檬黃、胭脂紅、日落黃平均回收率分別為89.8%、89.0%、90.4%，聚酰胺吸附法的檸檬黃、胭脂紅、日落黃平均回收率分別為85.4%、85.6%、85.3%（見表3）。

流動相梯度變化的選擇和儀器及色譜柱有很大關系，甲醇的比例如果從一開始就過大，檸檬黃出峰太快，與雜質峰有干擾［7-8］，而是應逐漸增大甲醇的比例，以便獲得更好的分離效果。

回收率實驗證明純水直接提取法提取效果更好，回收率更高，平行性、精密度更好，滿足實驗要求，能夠同時檢測醬腌菜中3種色素，適宜推廣應用，為醬腌菜中色素的檢測分析提供了依據。

［1］朱海英，黃萬琪.食品安全背景下合成色素的問題及對策［J］.現代醫藥衛生，2011，27（8）：1259-1262.

［2］華永有，林堅，林宏琳.HPLC法測定保健食品中的8種合成色素的研究［J］.中國衛生檢驗雜志，2013，23（1）：64-67.

［3］蒲云霞，徐曉楓，李偉，等.高效液相色譜法檢測藥品與保健品囊殼中的合成色素［J］.中國衛生檢驗雜志，2010，20（7）：1664-1665.

［4］陳文軍.高效液相色譜法測定食品中的合成色素酸性紅26［J］.光譜實驗室，2012，10（5）：2848-2851.

［5］林仁權，郎燕玲，王雪君.HPLC測定合成色素的干擾峰鑒別研究［J］.中國衛生檢驗雜志，2011，21（6）：1378-1381.

［6］肖海龍，屠海云，王紅青，等.反相高效液相色譜法快速測定食品中18種水溶性合成著色劑［J］.中國衛生檢驗雜志，2011，21（2）：264-266.

［7］高文惠，耿靜靜，裴立.高效液相色譜法同時測定食品中多種添加劑［J］.食品科學，2008，29（9）：472-475.

［8］黃海龍，莊莉，崔強，等.高效液相色譜法同時測定榨茶中的10種食品添加劑［J］.化學分析計量，2011，20（5）：20-22.