AKT2在大腸腺瘤及其癌變組織中的表達及意義

艾迎春,王立平,李奕鑫

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化二科,黑龍江 佳木斯 154003;2.佳木斯大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院,黑龍江 佳木斯 154003;3.佳木斯市醫(yī)保醫(yī)院,黑龍江佳木斯 154004)

大腸癌是常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病機制尚不十分明確。AKT2是一種絲氨酸 /蘇氨酸蛋白激酶 ,在細胞信號傳導(dǎo)通路和調(diào)控細胞生存和凋亡的平衡中發(fā)揮重要作用。但對于AKT2在大腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用國內(nèi)研究還很少。本試驗用 SABC免疫組化技術(shù)檢測 AKT2在大腸腺瘤及大腸腺瘤癌變組織中的表達并探討其在大腸腺瘤惡性轉(zhuǎn)化中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般材料

選取哈爾濱市第二醫(yī)院 2005— 01～2011— 01確診臨床資料完整的 30例大腸癌(癌變的大腸腺瘤 )的存檔蠟塊 ,40例大腸腺瘤的存檔蠟塊,其中高危性腺瘤 14例,低位性腺瘤26例;管狀腺瘤19例,混合性腺瘤 9例,絨毛狀腺瘤12例。20例正常大腸黏膜蠟塊。所有癌癥病例術(shù)前均未進行放化療。全部標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定,常規(guī)脫水后石蠟包埋,制成蠟塊保存。載玻片為多聚賴氨酸防脫片,購自福州邁新公司。每個蠟塊行連續(xù)切片,厚4μm,行 HE染色和免疫組化染色。

1.2 方法

1.2.1 試劑

兔抗人 AKT2多克隆抗體,編號:BA-1512,購自武漢博士德生物工程有限公司,4°C冰箱保存。廣譜型 SABC免疫組化試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。試驗步驟:采用 SABC免疫組化法,嚴(yán)格按照試劑盒說明進行。

1.2.2 陽性結(jié)果判斷

AKT2蛋白陽性為黃色顆粒主要定位于胞漿。400倍下計數(shù)5個視野,陽性細胞率=陽性細胞數(shù) /總細胞數(shù)×100%。結(jié)合陽性細胞百分比和及陽性細胞強弱計算免疫組化染色評分:①陽性細胞≤ 5為0分,陽性細胞6%～25%為1分 ,26%～50%為2分,＞ 50%為 3分。②0分為無色,陽性細胞淡黃色為 1分,黃色為2分,棕黃色為 3分。①、②兩項乘積即為其免疫組化評分,得分 ＜2分為陰性,≥2分為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用 SPS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件,采用卡方檢驗,P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AKT2在正常大腸組織,大腸腺瘤,大腸腺瘤癌變組織中的表達

三者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (i2= 19.68,P＜0.01)。正常組和大腸腺瘤組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (i2= 5.09,P＜0.05)。大腸腺瘤組和癌變的大腸腺瘤組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (i2=6.01,P＜0.05),癌變的大腸腺瘤組和正常組的比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (i2= 16.8,P＜0.01)。見表1。

2.2 AKT2與大腸腺瘤臨床病理因素的關(guān)系

各組織學(xué)類型間比較,AKT2陽性表達率無顯著性差異(P＞ 0.05)。高危性腺瘤和低危性腺瘤相比,AKT2陽性表達率升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P ＜0.05);見表 2。

表1 AKT2在不同大腸組織中的表達

3 討論

AK T2是生長因子受體酪氨酸激酶下游重要的調(diào)節(jié)靶點,是磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信號傳導(dǎo)通路的中心環(huán)節(jié)。PI3K/AKT2通路被證實參與了多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。AKT2以直接或間接的方式影響下游多個因子,這些因子參與調(diào)控細胞存活和蛋白翻譯。目前的研究發(fā)現(xiàn) AKT2是腫瘤發(fā)生的重要信號分子,其異常表達在人類的惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展和演進過程中發(fā)揮重要作用。AKT2主要通過兩條路徑來調(diào)節(jié)細胞存活:(1)直接參與細胞凋亡。AKT可減弱細胞內(nèi)在的凋亡途徑,和外在的凋亡途徑不同之處是內(nèi)在途徑與細胞內(nèi)線粒體體系密切相關(guān)。(2)干擾部分基因轉(zhuǎn)錄。許多細胞凋亡刺激素要求啟動細胞內(nèi)一些基因表達來誘導(dǎo)細胞凋亡,AKT可干擾促進細胞凋亡的轉(zhuǎn)錄程序,或通過激活生存轉(zhuǎn)錄程序來抑制細胞凋亡。再者磷酸化的 AKT可抑制 KB抑制因子激酶(ILK),啟動核因子 Kb(N FkB)轉(zhuǎn)錄功能,促進 bcl-xL及凋亡蛋白抑制子(IAP)的表達來維持細胞生存。

在多種腫瘤組織中都有 AKT2的過度表達或活化,最新研究結(jié)果證明,在卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌和胰腺癌等多種腫瘤中存在 AKT的持續(xù)激活[1～3]。AK T2在不同結(jié)直腸組織中的表達 Roy[4]等發(fā)現(xiàn),57%的散發(fā)型結(jié)腸癌和結(jié)腸腺瘤AKT蛋白過量表達和活化 ,并以 AKT2亞型為主 ,提示其可能參與結(jié)腸上皮細胞早期增生癌變過程,是結(jié)直腸癌變過程的一個早期事件。翟云芝[5]等發(fā)現(xiàn) AKT2在結(jié)直腸癌組織中高表達,陽性率達57.9%,而在正常大腸黏膜組織中陽性率僅為17.5%,兩者對比有統(tǒng)計學(xué)差異,提示 AK T2可能在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中有重要作用。本實驗顯示 AKT2在正常大腸黏膜組的陽性表達率為10.0%、大腸腺瘤組的陽性表達率42.5%、癌變的腺瘤組織中的陽性表達率73.3%呈逐漸升高的趨勢,且在大腸腺瘤與癌變腺瘤之間的陽性表達率差異具有顯著性,說明在大腸腺瘤向腺癌方向的轉(zhuǎn)化過程當(dāng)中,AKT2起到了重要的作用,可能是大腸腺瘤發(fā)生癌變的早期信號。AKT2的表達率與大腸腺瘤的組織學(xué)類型無相關(guān)性,而隨著大腸腺瘤的危險性增高陽性表達率逐漸升高。本試驗表明在大腸腺瘤的惡性轉(zhuǎn)化過程中 AKT2發(fā)揮了重要作用。檢測 AKT2的表達可能做為臨床監(jiān)測大腸腺瘤的惡性轉(zhuǎn)化的指標(biāo),并為大腸癌的早期診斷提供新的思路和理論依據(jù)。

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[5]翟云芝,陳振東.Ezrin和 AKT2在大腸癌組織中的表達和臨床意義 [J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2009,14(1):25-28