中藥紅花水提物的 HPLC-ESI-ITMSn分析

王 蒙,崔培王申 ,張乃峰,孫長海

(佳木斯大學藥學院,黑龍江 佳木斯 154007)

紅花又名紅藍花,別名有草紅花、刺紅花、紅花草等,為菊科(Compositae)植物紅花 Carthamus tinctorius L.的干燥花,是紅花屬中唯一的栽培品種,分布廣泛,新疆吉木薩爾、河南新鄉、四川簡陽、云南巍山是我國紅花的四個主要產地。紅花味辛微苦、性濕 ,歸心、肝經,是活血通經,去淤止痛之良藥[1～5]。紅花的化學成分復雜,先后分得黃酮類,聚乙炔類,吲哚類,甾族類,木質素類,脂肪酸,揮發油 ,烷基二醇類,有機酸類和甾醇類等化合物二百多種。具有擴張血管、增加血流量、改善微循環、抑制血小板聚集、興奮子宮、降壓、抗癌、抗炎等藥理活性[6～13]。中藥提取方式種類多,多采用水蒸氣蒸發回流,能夠很好地將紅花中有效成分提取出來。液相色譜-電噴霧質譜聯用技術有著強大的分離能力和鑒定能力,在天然藥物化學成分的分析中具有獨特的優勢。目前,關于紅花的報道已有很多,但從 HPLC-ESI-ITM Sn角度來對中藥紅花水提物成分鑒定尚未見報道。本文將從此方面入手,建立了中藥紅花水提物的高效液相色譜-電噴霧離子阱測定方法,為中藥紅花成分的表征提供了一種新方法,有望在中藥質量控制中得到廣泛的應用[14～15]。

1 儀器與材料

液相色譜系統(Agilent1200配有 G1312A型四元輸液泵、G1367A型自動進樣器、G1316A型柱溫箱、和 G1322A型脫氣機,G1315D型 DAD檢測器)離子阱質譜儀(G6310,美國 Agilent公司)。甲醇 (色譜純,天津市科密歐化學試劑有限公司);甲酸(分析純,天津市科密歐化學試劑有限公司);娃哈哈純凈水。中藥紅花(購于佳木斯市新藥特藥醫藥有限公司)。

2 實驗方法

2.1 色譜與質譜條件

Agilent EC-C18色譜柱 (4.6 mm× 100mm,2.7 μm);SC GeminiC18保護柱 (5mm× 2.1mm,1.7 μm);柱溫 25℃ ;二元線性梯度洗脫:流動相為0.1%甲酸水溶液(A)-甲醇(B),梯度洗脫:0～2minA相保持95%,2～10min線性變化至 35%A相,10～ 25min線性變化至 100%A相,保持 5min。流速為0.6mL˙min-1,樣品進樣量為 40μL。

質譜條件:毛細管溫度325℃,毛細管電壓13V,氮氣為鞘氣和輔助氣,鞘氣流速 10mL˙min-1,輔助氣流速 0.15mL˙ min-1,氦氣為碰撞氣進行碰撞誘導解離分析,掃描范圍 m/z 100～ 1100,正離子模式下進行二級離子全掃描。

2.2 中藥水提物的制備

稱取干燥至恒重紅花藥材100g,以10倍量蒸餾水浸泡30min,加熱回流提取 2h,用蒸餾水補足失重,搖勻,濾過,取續濾液,經0.22μm微孔濾膜濾過 ,即得紅花水提物溶液,4℃冰箱冷藏備用。

3 結果與討論

3.1 色譜與質譜條件的選擇

在 HPLC-ESI-ITM S分析中,離子化模式的選擇以基峰的強度為依據,為了確定離子化模式,中藥紅花水提物分別在 ESI離子源下正負離子模式下測定其質譜。在兩種離子化模式下,正離子的基峰強度明顯大于負離子的強度,所以選擇 ESI正離子模式掃描來研究中藥紅花的成分。

基于峰型的對稱性和峰的分離性,色譜條件經反復優化。在實驗中分別選用了甲醇/甲酸水和乙腈 /甲酸水來試驗,前者響應值較高,并且能夠較好的將紅花水提物的成分洗脫出來 ,譜峰得到了很好的分離。所以本實驗選擇甲醇 /甲酸水作為流動相。

3.2 利用 HPLC-ESI-ITMS分析紅花水提物的成分

中藥紅花化學成分極其復雜,包括黃酮類,聚乙炔類,吲哚類 ,甾族類,木質素類,脂肪酸,揮發油 ,烷基二醇類,有機酸類和甾醇類等多種化學成分。目前,針對中藥化學成分的研究,首先經過色譜分離,再利用 DAD檢測器進行紫外光譜實時檢測,但一些物質無紫外吸收或紫外吸收弱,應用質譜技術能很好的解決。它對中藥的多種成分均能夠檢測,且有較好的響應。因此,利用 HPLC-ESI-ITM S分析中藥紅花是一個可行的方法。

中藥紅花水提物的正離子檢測模式下的一級總離子流圖,如圖 1所示。列出了36個主要組分的分子量、保留時間和二級碎片 ,見表1。通過質譜庫進行檢索,參考有關文獻資料,定性了10個化合物。

圖1 正離子檢測方式下紅花藥材一級全掃描色譜圖

3.3 鑒定化合物

由于 HPLC-ESI-ITM Sn能夠同時提供化學成分的質荷比、保留時間、二級碎片等信息,被視為鑒定化合物的一種有力工具。所以,與已有紅花文獻報道相結合,通過相應質譜信息初步定性了中藥紅花中的10種化合物:芹菜素、花生酸、月桂酸、阿魏酸、楊梅素、豆甾醇、丁二酸、山奈酚、羥基紅花黃色素 A、山奈酚-3-O-蕓香糖苷。

表1 紅花水提物主要化學成分

15 329.3 6.5 327.1、 269.9、 167.0 16 619.5 6.5 600.0、 438.2、 276.2 17 152.1 6.6 135.1、110.1 18 阿魏酸 C10H10O4 194.19 6.7 175.0、151.1、110.0 19 254.4 6.7 237.1、195.0 20 楊梅素 C15H10O 318.0 7.4 317.0、273.0、203.0 21 豆甾醇 C29H48O 412.69 8.4 383.1、322.1、251.1 22 丁二酸 HOOCCH2CH2COOH 118.09 9.0 103.0、70.2 23 397.6 9.9 367.1、 277.1、 235.0 24 山奈酚 C15H10O6 286.23 10.1 284.1、227.1、184.9 25 羥基紅花黃色素 AC27H32O16 612.5 10.8 595.0、451.0、331.2 26 514.6 11.2 497.1、 451.1、 351.1 27 419.6 11.8 373.2、 305.7、 273.0 28 351.5 11.9 348.1、 281.0、 231.1 29 山奈酚-3-O-蕓香糖苷C27H30O15 594.52 12.0 576.9、 433.0、 397.0 30 603.1 12.6 584.1、 552.9、 486.1 31 637.7 13.0 619.1、 517.0、 473.0 32 928.4 13.4 909.8、 814.7、 701.7 33 589.7 13.5 577.2、 475.1、 441.2 34 607.9 13.6 587.3、 460.2、 403.2 35 688.9 13.7 671.2、 596.3、 513.2 36 769.7 14.9 750.3、 649.2、 592.2

4 結論

本文建立了用高效液相色譜-電噴霧離子阱質譜法定性分析中藥紅花水提物中的多種化學成分,利用液質聯用技術無需衍生化,直接通過多級質譜進行結構鑒定的優點,結合文獻報道采用該法鑒定了10個化合物,每個化合物均具有較高的靈敏度,為同時快速分析中藥多個化學成分提供了有效手段。

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