氯磷酸二鈉緩釋微丸質量考察及藥效動力學研究

張天英,朱艷麗,胡 洋,谷繼偉,李晶紅

(佳木斯大學附屬第一醫院,黑龍江 佳木斯 154003)

我們采用擠出滾圓法制作氯磷酸二鈉緩釋微丸,其工藝為:高檔速度下滾制 6min,干燥溫度為60℃。微丸的最佳配方為:20mg氯膦酸二鈉,不加微晶纖維素,乙基纖維素和硬脂酸比例為1:2,24μL的10% Eudragit L30D-55。為了評價該工藝制備的微丸的質量以及藥效動力學,本文分析了微丸工藝重現性和穩定性,并用氯磷酸二鈉對重癥急性胰腺炎大鼠肺泡巨噬細胞凋亡的影響模型評價藥效動力學,現報道如下。

1 材料與方法

1.1 氯磷酸二鈉緩釋微丸制備

取適量的氯膦酸二鈉和輔料的混合物與黏合劑充分混合,然后用擠出機擠出直徑恒定的圓筒條,再切斷圓筒條成小段,并將小段高速滾制成圓球,繼續滾制使圓球滾成更勻稱的圓球。最后在干燥箱干燥制備好的圓球。其工藝為:高檔速度下滾制6min,干燥溫度為60℃。微丸的最佳配方為:20mg氯膦酸二鈉,不加微晶纖維素 ,乙基纖維素和硬脂酸比例為 1:2,24 μL的 10% Eudragit L30D-55。

1.2 微丸釋放量的檢測

[1]方法進行檢測,用陰離子交換色譜柱 (IonPac AS11-HC);以45mmol/L氫氧化鉀溶液為流動相,流速為每分鐘1.2mL;檢測器為電導檢測器,檢測方式為抑制電導檢測;柱溫30℃;理論板數按氯膦酸二鈉峰計算不低于2000。測定法 精密量取本品2mL,置100mL量瓶中 ,用水稀釋至刻度,搖勻,精密量取5mL,置 50mL量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻 ,精密量取 25 μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖。另取氯膦酸二鈉對照品,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1mL中約含無水氯膦酸二鈉 120 μg的溶液,同法測定,按外標法以峰面積計算,即得。分別檢測微丸釋放量,并計算釋放比。

1.3 工藝重現性分析方法

隨機取四批制備的微丸,采用陰離子交換色譜檢測0～12h內不同時間點時微丸釋放氯膦酸二鈉的總量,并按照釋放率=釋放量/總含量 計算不同時間點的釋放率。繪制釋放率對時間的釋放曲線,并比較四批微丸的釋放曲線的差異。

1.4 加速試驗穩定性

隨機取四批制備的微丸,置于40℃,相對濕度 75%的密閉容器中,恒溫放置 3個月,分別于1、2、3個月取樣,觀察微丸外觀和測定藥物含量。

1.5 藥效動力學分析

培養重癥急性胰腺炎大鼠肺泡巨噬細胞,分別加入生理鹽水或微丸。采用叮陡橙熒光染色檢測細胞凋亡,熒光顯微鏡下觀察結果并計數200個細胞,并計算出肺巨噬細胞凋亡率。可見不同的細胞形態:未凋亡細胞和凋亡細胞。細胞凋亡率由以下公式計算:凋亡率=凋亡細胞 /總細胞數×100%。檢測48h內細胞的凋亡率,并繪制凋亡率與時間的藥效動力學曲線。

1.6 統計學分析

采用 SPSS14.0軟件進行統計學分析,所有計量資料均采用均值±標準差 (± s)。單因素組兩組之間的比較采用 t檢驗,多組之間比較采用方差分析。

2 結果

2.1 工藝重現性分析結果

表 1(a和 b)結果表明,四批次的微丸在12h檢測期內不同時間點的釋放率之間無顯著差異 (P均＞ 0.05)。表2結果表明,經加速試驗處理后,四批次微丸的外觀均為乳白色且顯微黃,含量無顯著性差異 (P均 ＞ 0.05)。

表1 四批次微丸不同時間點釋放率比較結果 (±s)

表1 四批次微丸不同時間點釋放率比較結果 (±s)

0h 0.5h 1h 1.5h 2h 4h 6h 8h 10h 12h 1批 0 8.4± 0.9 23.7± 1.1 29.9± 0.8 46.3± 0.7 50.9± 1.5 69.9± 1.2 78.3± 1.9 88.9± 1.7 88.9± 2.5 2批 0 11.4± 1.1 21.7± 0.7 30.9± 1.1 45.3± 1.6 52.1± 1.8 68.9± 2.3 78.3± 2.4 86.9± 2.6 89.9± 2.4 3批 0 9.4± 0.3 25.7± 0.4 31.9± 0.9 43.3± 0.7 51.9± 1.3 67.9± 1.8 78.3± 1.7 84.9± 1.6 90.9± 1.9 4批 0 13.4± 1.2 19.7± 0.8 30.9± 0.7 47.3± 1.3 53.2± 1.5 66.9± 2.1 78.3± 2.4 86.9± 2.6 86.9± 2.7 P 0.135 0.214 0.172 0.365 0.338 0.177 0.179 0.203 0.215

表2 四批次微丸外觀和藥物含量比較 (±s)

表2 四批次微丸外觀和藥物含量比較 (±s)

外觀 含量(%)1批 乳白色 /微黃 98.25±0.78 2批 乳白色 /微黃 99.22±0.35 3批 乳白色 /微黃 98.71±0.26 4批 乳白色 /微黃 99.31±0.29 P 0.216

2.2 藥效動力學分析結果

表3結果為四批次微丸對大鼠巨噬細胞凋亡的影響,在48h的作用時間內,與生理鹽水相比,微丸可顯著誘導巨噬細胞凋亡 (P＜0.05),四批次微丸在不同時間的凋亡率無顯著差異 (P＞ 0.05)。

表3 四批次微丸對小鼠巨噬細胞凋亡的影響 (±s)

表3 四批次微丸對小鼠巨噬細胞凋亡的影響 (±s)

0h 1h 6h 12h 24h 48h生理鹽水 0 0.12± 0.04 0.41± 0.07 2.13± 0.17 2.57± 0.25 2.92± 0.37 1批 0 2.68± 0.67 35.67± 1.97 68.3± 3.12 74.3± 2.96 81.2± 4.11 2批 0 3.14± 0.82 38.19± 2.02 67.4± 3.45 75.3± 3.24 80.9± 4.18 3批 0 2.03± 0.72 37.12± 1.67 63.6± 4.02 74.9± 3.17 79.4± 4.92 4批 0 3.46± 0.76 36.9± 1.96 65.1± 3.92 73.7± 3.25 82.3± 3.93 P 0.115 0.107 0.314 0.549 0.273

3 討論

氯磷酸二鈉緩釋微丸的制備一直是我們研究的課題,氯膦酸二鈉一直以來是作為種骨代謝調節劑,常用于各種類型的骨質疏松、腫瘤骨轉移引起的高鈣血癥、變形性骨炎等[2]。緩釋微丸可以有效提高藥物進入人體后的半衰期,增加藥物的作用時間以提高藥效。口服緩控釋固體劑型的研究和實踐已有多年的歷史,是目前國內外藥劑學發展的重要方向。緩控釋制劑的類型較多,包括:骨架型制劑、膜控型制劑、給藥樹脂、滲透泵等,其中骨架型制劑最為常見,在眾多類型的緩控釋制劑中,微丸制劑因其獨特的優點成為目前口服緩控釋制劑主要的發展方向[3]。由于其粒徑較小,表面積大,它具有生物利用度高,個體間差異小,釋藥規律的重現性和一致性較好,安全性高等顯著優點[4]。因此氯磷酸二鈉緩釋微丸的應用會增加氯磷酸二鈉在人體內的作用效果。

但不是所有的藥物均可制備成緩釋微丸,研究表明微丸骨架型結構會影響藥物自由移動,聚合物和藥物擴散是影響藥物釋放率的限速步驟[5]。過高的釋放率起不到緩釋效果,過低的釋放率會影響藥物到達病灶位置的時間。因此,良好的緩釋微丸還需要評價制備的微丸的釋放率、制備工藝的穩定性、制備的微丸的質量以及微丸的藥效等[6]。

我們之前已經建立了擠出圓滾法制備氯磷酸二鈉緩釋微丸,該工藝操作簡便且可成功制備出緩釋微丸,研究也表明制備的微丸在12h時還具有緩釋效果。為了評價工藝的重現性和制備微丸的藥效,本文從微丸釋放率、加速試驗外觀和含量變化情況來評價經擠出圓滾法制備的氯磷酸二鈉緩釋微丸質量,結果得出:4批次制備的微丸在12h內釋放率均無顯著差異 ,經3個月內的加速試驗處理后,微丸的外觀和含量均無差異,說明通過我們確定的擠出圓滾法制備的微丸工藝重現性較好。另外,通過評價氯磷酸二鈉對大鼠巨噬細胞的凋亡的影響模型來評價微丸的藥效動力學,結果表明制備的微丸可顯著促進細胞凋亡,而四批次的微丸的效果無顯著差異,因此說明制備的微丸藥效較好,且不同批次的微丸藥效也較穩定。

參考文獻:

[1]雷毅,鐘新林.離子色譜法測定氯膦酸二鈉及其制劑的含量和有關物質 [J].分析化學,2009,37(7):1065-1068

[2]佟倩.氯膦酸二鈉治療前列腺癌骨轉移疼痛的療效觀察[J].中外健康文摘,2012,09(14):182-183

[3]劉艷,張志鵬,索緒斌,等.緩控釋制劑體外釋放度的研究進展[J].時珍國醫國藥,2011,22(3):701-703

[4]張佳良,楊秋霞,陳建明.固體分散體在緩控釋制劑中的應用[J].藥學實踐雜志,2010,28(4):248-250,303

[5]余裕炳,涂家生.硝苯地平骨架型和膜控型緩釋微丸的制備及比較 [J].藥學與臨床研究,2010,18(3):235-238

[6]李悅,邢建國,楊秀,等.擠出滾圓法制備香青蘭黃酮骨架型微丸[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(4):1-4